Summary
Мы опишем протокол для индукции полезным и nonrewarding опыт в плодовых мух (дрозофилы) с использованием добровольного потребления этанола в качестве меры для изменения в награду государств.
Abstract
Мы опишем протокол для измерения этанола самоуправлением в плодовой мушки (дрозофилы) в качестве прокси для изменений в награду государств. Мы демонстрируем простой способ подключиться к системе вознаграждения лету, изменять опыт, связанный с естественной наградой, а также использовать добровольное потребление этанола в качестве меры для изменения в награду государств. Подход служит в качестве соответствующего инструмента для изучения нейроны и гены, которые играют определенную роль в опыте опосредованной изменения внутреннего состояния. Протокол состоит из двух отдельных частей: подвергая мух к полезным и nonrewarding опыта, и опробование добровольное потребление этанола в качестве меры мотивации, чтобы получить вознаграждение наркотиков. Эти две части могут быть использованы независимо друг от друга, чтобы вызвать модуляцию опыта в качестве первого шага для дальнейшего вниз по течению анализов или в качестве независимого два выбора анализа кормления, соответственно. Протокол не требует сложной настройки и, следовательно, могут быть применены в любом Laboratorу с основными инструментами культуры летать.
Introduction
Модификация поведения в ответ на опыт позволяет животным корректировать свое поведение к изменениям в их среде 1. В ходе этого процесса, животные интегрировать их внутреннее физиологическое состояние с изменением условий внешней среды, а затем выбрать одно действие над другим, чтобы увеличить свои шансы на выживание и размножение. Системы вознаграждения эволюционировали мотивации поведения, которые необходимы для выживания особей и видов путем усиления поведения , которые увеличивают немедленное выживание, например, еды или питья, или те , которые обеспечивают долгосрочное выживание, такие как сексуальное поведение или уход за потомством 2. Искусственные соединения , такие как наркотики злоупотребления также влияют на системы вознаграждения путем кооптации нервных путей , которые обеспечивают естественные награды 2.
За последние два десятилетия плодовой мушки дрозофилы была создана в качестве перспективной модели для изучения Molecулар и нейронные механизмы, которые формируют влияние этанола на поведение 3,4.
Ранее мы определили подмножество пептидергических нейронов у мух (НРП / НРП рецептора (R) нейроны) , которые соединяют естественные награды, такие как сексуальный опыт, к мотивации получения вознаграждения наркотиков 5. НРП выражение чувствительна к обоим параметрам сексуального опыта и поощрений наркотиков, таких как этанол интоксикации. Изменения в НРП уровней экспрессии преобразуются в изменения в этаноле самоуправления 5, где высокая НРП снижает и низкий НРП увеличивает предпочтение к потреблению этанола. Активация нейронов является НПФ полезным для мух, поскольку они показывают сильное предпочтение запаха, спаренной с активацией, что также отражается снижением потребления этанола. Что еще более важно, активация нейронов НРП мешает способности мух, чтобы сформировать положительную ассоциацию между интоксикацией этанолом и запах реплике. Причинно-следственная связь между НРП / Rсистема, вознаграждение памяти, и потребление этанола позволяет предположить , что можно использовать этанол самоуправлением в качестве меры для изменения в награду 5 государств.
В этой публикации мы демонстрируют комплексный подход к выстукивать в лету естественной системы вознаграждения и изменения опробование в награду государств. Подход состоит из двух отдельных частей, учебного протокола для манипулирования природными опытом вознаграждения, связанных с последующим двумя вариантами капиллярный питатель анализа (CAFE) для оценки этанола самоуправления в качестве оценки изменений в награду государств. Анализ КАФЕ аналогична выбору анализов двух бутылок , используемых в исследованиях на грызунах для наркотиков самоуправления и было показано , чтобы отразить некоторые свойства наркомании типа поведения у мух 6.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Примечание: Общий обзор экспериментального проектирования: Экспериментальный дизайн включает в себя адаптированный протокол для подавления 7-9 ухаживания , в которых самцы мух подвергаются полезным и nonrewarding опытом в 3 -х последовательных сессий обучения в течение 4 дней. В конце фазы опыта, мухи проходят в два выбора добровольного анализа потребления этанола в течение 3 - 4 дней. Протокол в данном документе включает в себя несколько подготовительных этапов, некоторые из которых могут быть сделаны заранее , чтобы использоваться в более чем одном эксперименте, в то время как другие должны происходить своевременно до начала эксперимента (таблица 1).
1. Подготовительные шаги
- Подготовка системы капиллярного питатель
- Тепло 27 G иглу и использовать его , чтобы проколоть маленькие отверстия вдоль флакона (рисунок 1).
- Вырезать флакон пробку пополам (вдоль и поперек), используя лезвие бритвы. Марк четыре точки на поверхности пробки, создавая Squarе форма для размещения держателей капилляров в. Используйте 18 G иглу , чтобы сделать 4 отверстия через отверстия (Рисунок 1b).
- Используйте лезвие, чтобы отрезать микропипетки, чтобы они могли плотно удерживать 5 мкл стеклянных капиллярах, которые служат в качестве адаптеров.
- Вставьте 4 капиллярные адаптеры в подготовленные заглушками.
- Отметьте положение 2 этанол- и двух nonethanol содержащих капилляров на вилке.
Примечание: Рекомендуется, чтобы сохранить позиции 2-х типов капилляров последовательных во всех флаконах. Обратите внимание на размер отверстий, а большие отверстия позволяют побег мух из флаконов. Кроме того, рекомендуется использовать гладкую сторону пробки (обычно противоположной стороне разреза) в качестве стороны, которая обращена вниз при вставке в ампуле, как резка пробку создает некоторые небольшие, свободные волокна, которые мухи могут могут запутаться в , - Приготовьте большое количество флаконов и адаптеров, которые будут использоваться для системы капиллярного фидера (CAFE)Эксперименты, описанные в пункте 2.3.
- Приготовление пищи ампул небольшие стеклянные
- За день до сбора мух (шаг 1.4), организовать 200 стеклянные флаконы по микроцентрифужных трубки стоек. Melt покупать еду (по рецепту кукурузной муки мелассы, смотри таблицу материалов) с использованием микроволновой печи. Залить 2 мл летучей пищи в стеклянные флаконы (старайтесь не размазывать пищу на флаконе стены). Пусть пищи затвердевают, и покрыть ампул с полиэтиленовой пленкой.
Примечание: Стеклянные флаконы, содержащие пищу можно хранить при температуре 4 ° С в течение нескольких недель. - В день сбора мух, возьмите флаконах из холодильника и дайте им добраться до RT, прежде чем использовать их для размещения мух.
Примечание: Если пищевые Флаконы несколько недель, чтобы убедиться, что пища еще цела и не отсоединяется от флакона, как мухи могут быть захвачены в щели между едой и стеклом.
- За день до сбора мух (шаг 1.4), организовать 200 стеклянные флаконы по микроцентрифужных трубки стоек. Melt покупать еду (по рецепту кукурузной муки мелассы, смотри таблицу материалов) с использованием микроволновой печи. Залить 2 мл летучей пищи в стеклянные флаконы (старайтесь не размазывать пищу на флаконе стены). Пусть пищи затвердевают, и покрыть ампул с полиэтиленовой пленкой.
- Изготовление раствора запас пищи для анализа капиллярную фидера
- Для предварительногочистить раствор запас пищи (5% сахарозы и 5% дрожжевого экстракта), растворяют 5,88 г дрожжевого экстракта и 5,88 г сахарозы в 100 мл дистиллированной воды.
Примечание: Исходный раствор чрезвычайно подвержен загрязнению. Поэтому рекомендуется автоклаве (121 ° С, 30 мин, и без цикла сушки) и аликвоты его в 850 мкл рабочего аликвоты должны храниться при температуре 4 ° С до дальнейшего использования. Концентрация ингредиентов в маточном растворе составляет 5,88% и достигнет конечной концентрации 5% после добавления 15% этанола или воды (150 мкл в 850 мкл раствора Premade пищи) непосредственно перед его использованием на стадии 2.3.
- Для предварительногочистить раствор запас пищи (5% сахарозы и 5% дрожжевого экстракта), растворяют 5,88 г дрожжевого экстракта и 5,88 г сахарозы в 100 мл дистиллированной воды.
- Сбор экспериментальных мух
- Соберите 200 наивных мужчин мух с помощью CO 2 колодки.
Примечание: Используйте любой лабораторный штамм, имеющих значение для экспериментального вопроса. 250 мух может быть легко собрана из пяти бутылок мух на начальном этапе их вылупления подборщика. При сборе мух, обратите особое внимание на ColСобирайте мух, которые недавно eclosed (девственные перспективных мух: яркие мухи с меконием пятном на их животе). Экспериментальные мух должны храниться отдельно, в небольших стеклянных флаконах, содержащих продукты питания и в возрасте до 3 - 4 d старое перед использованием в эксперименте. - Используйте мягкие заглушки, чтобы закрыть флаконы.
Примечание: Те же мягкие пробки будут очень полезны для этапа обучения при использовании аспирации рот, чтобы вставить самок в и из флаконов во время фазы опыта.
- Соберите 200 наивных мужчин мух с помощью CO 2 колодки.
- Сбор тренер мух
Примечание: Все собранные мух должны храниться в течение 12 ч / 12 ч свет / темнота инкубаторе при 25 ° С и 70% относительной влажности (RH). 12 ч / 12 ч цикл свет / темнота может быть изменен на удобное время пуска.- Девственница тренер мух
- Соберите 500 девственница тренер летит из запаса WT или virginator запаса для использования в качестве девственных восприимчивых самок. Держите женского мух в группах 25 на флакон пищи регулярного размера, и всеOW их возраст до 3 - 4 d старое, прежде чем использовать их в эксперименте.
- Спаренных женские тренер мух
- Соберите 300 девственница мух от запаса WT или virginator складе пройти спаривание до этапа обучения (этап 1.6.1).
Примечание: Женские мухи находятся в группе из 10 женщин в одном флаконе еды регулярного размера и в возрасте до 3 - 4 d старое перед использованием в эксперименте.
- Соберите 300 девственница мух от запаса WT или virginator складе пройти спаривание до этапа обучения (этап 1.6.1).
- Мужской мухи используются для создания спаренных женского тренера мух
- Соберите 150 самцов мух (не обязательно девственница).
Примечание: Мухи содержатся в группах по 15 самцов в одном флаконе еды регулярного размера и в возрасте до 3 - 4 d старый перед тем, как в паре с девственной самки мух для создания спаренных тренера самок.
- Соберите 150 самцов мух (не обязательно девственница).
- Девственница тренер мух
- Создание спаренных женского тренера мух
- Для создания спаренных самка мухи, которые будут использоваться в качестве инструкторов, парные группы 10 девственной самки мух с 15 самец летит, переворачивая один самец, содержащий флакон в самку-Контаоцен- ками флакон 16 - 18 ч до этапа обучения (этап 2.1) 10.
Примечание: Это обычно занимает место вечером перед тренировкой. 1,5: 1 соотношение между мужчинами летит к женским мух гарантирует, что все самки будут спариваться. - В день эксперимента, отделяют спаренных самок из самцов аспирацией самцов из флакона с использованием рот аспиратора. Выполните это право перед началом каждого учебного дня.
- Для создания спаренных самка мухи, которые будут использоваться в качестве инструкторов, парные группы 10 девственной самки мух с 15 самец летит, переворачивая один самец, содержащий флакон в самку-Контаоцен- ками флакон 16 - 18 ч до этапа обучения (этап 2.1) 10.
2. Экспериментальные шаги
- Настройка фазы опыта
- Начать эксперимент как можно ближе к началу легкой фазы в инкубаторе. Поместите тренер самок (как целинных и спаренных) в поведении камеры.
Примечание: Рекомендуется для проведения эксперимента в поведении камеры, или любой укромный среду, которая тихо и установить до 25 ° С и 60 - на 65% RH. Поддержание влажности более 50% является очень важным, так как ухаживания и спаривания поведениеs зависят от феромонов зондирования, который, как известно, чувствительны к влажности.
- Начать эксперимент как можно ближе к началу легкой фазы в инкубаторе. Поместите тренер самок (как целинных и спаренных) в поведении камеры.
- Разоблачение мужчин мух к награждению и nonrewarding опытом
- Устройте стеклянные флаконы, содержащие одиночные мужские мух на микроцентрифужными стойках, позиционирование ампул по краям стойки.
Примечание: Эта компоновка позволяет экспериментатору легко наблюдать пары мух, которые подвергаются совокупления, не принимая флаконах из стойки. - Готовят (как описано в пункте 2.2.1) 2 группы 100 стеклянных флаконов , содержащих одного самца мухи на отдельных стойках для мужчин , подвергающихся полезным и nonrewarding опытом спаривания (т.е. бракованных и спаренных).
- Аспирируйте тренер самок и добавить их в каждый флакон, содержащий мужские мух. Установите таймер в течение 1 ч. Начиная с отвергнутым группой, добавить повязана женщина в каждый флакон. Затем перейдем к самцам спариваться и добавить девственница в каждый флакон.
- Смотрите сопрягаемые встречи тесночтобы убедиться, что самцы взаимодействуя с девственных самок успешно спариваться в течение первого часа и что самцы взаимодействуют с ранее сопряженными самок не спариваются. Для того, чтобы следить за отвергнутую когорту за течение 1 ч, установить второй таймер в течение 15 мин и смотреть самцы каждые 15 мин.
- Выделения самцов из отклоненного когорты, которым удалось спариться и мужчин из спаренных когорты, которые не в конечном итоге спаривание к концу первой тренировочной сессии.
- Закончить первую тренировку аспирационных вне ранее спаренных женских тренеров в обычный пузырек муха пищи, и держать их на следующей сессии кондиционирования. Следуйте этот шаг, мягко аспирационных самок из спаренных мужской группы.
- Пусть летит отдыхать в течение 1 часа.
- Повторите шаги 2.2.3 - 2.2.7 дважды.
- Повторите тренировку с шагом 2.2.3 - 2.2.8 каждый день для более 3 дней.
- Устройте стеклянные флаконы, содержащие одиночные мужские мух на микроцентрифужными стойках, позиционирование ампул по краям стойки.
- Потребление записи (CAFE)
- В конце последнего conditioninг-я сессия (четвертый день), аспирация одиночные самцы и сгруппировать их в капиллярную фидерных флаконах. Используйте мягкую пробку, чтобы покрыть пузырек капиллярная фидер при вставке мух, и быстро заменить его на готовую капиллярного фидера пробки после того, как все мухи были вставлены. Группа 6 - 8 мух от каждой из экспериментальных групп во флакон, не создавая не менее 8 флаконов в состоянии.
- Влажный пробки, осторожно добавив 5 мл воды, к верхней части пробки. Будьте осторожны при добавлении воды, чтобы избежать утечки во флаконы. Добавить равное количество воды в каждый флакон.
Примечание: Этот шаг делается для уменьшения испарения из капилляров. Таким образом, повторяется каждый день в течение остальной части эксперимента. В зависимости от относительной влажности, в последующие дни может потребовать меньшего количества воды, чтобы добавить к штекеров. - Приготовьте два отдельных растворов пищевых продуктов путем добавления этанола или воды к запас пищевых аликвоты для создания конечной концентрации 15%.
- Для заполнения capillAries с двумя пищевых растворов, создать 5 мкл жидкой пищи падает на кинопленка лабораторных и дайте раствору для заполнения капилляра, пока он не достигнет отметки 5 мкл. Убедитесь в том, чтобы использовать ясный конец капилляра, который близок к 5 мкл черной метки линии.
Примечание: Для того, чтобы заполнить несколько капилляры сразу, можно подключить 6 - 8 капиллярные адаптеры вместе и использовать их в качестве вставки для удержания капилляры. - Нажмите капилляры мягко на парафиновой полосы для размещения раствора пищи ровно в черной метки. Уплотнение капилляры, опуская конец каждого капилляра на мелкие капли минерального масла. Этот шаг позволяет минимизировать потенциальное испарение пищевого раствора.
- Вставьте два этанолсодержащих капилляры и два nonethanol, содержащий капилляры через 4-х адаптер / держатель в вилке, пока открытые стороны капилляров едва не выглядывать из внутренней части флакона (1 мм или менее от поверхности штекера).
ЗАМЕТКА:Сохраняя открытие капилляров, близких к мокрой пробки уменьшает испарение и обеспечивает легкий доступ к пище, как мухи обычно сидят на свечах и спуститесь на обнаженном капилляра, чтобы питаться. - В дополнение к флаконах, содержащих экспериментальные мух, подготовить макет флакона без мух. Этот элемент управления служит для оценки естественного испарения.
Примечание: Старайтесь поддерживать относительно равное позиционирование капиллярного отверстия по сравнению с пробками, поскольку различия могут привести к испарению переменной и вводит в заблуждение данные о потреблении. Поддержание адекватной влажности во время эксперимента и расположите капиллярные отверстия как можно ближе к влажному пробки, так как низкая влажность и большое расстояние от мокрой пробки может и привести к неконтролируемым испарения. - Запишите относительное положение жидкости в каждом из капилляров по отношению к черной метки линии в мм с помощью линейки, и запишите их.
Примечание: Если решение позиционируется именно на черном лине, то значение должно быть равно нулю, и если она выше или ниже, оно должно быть положительным или отрицательным значения, соответственно. Начальные уровни жидкости устанавливают опорные точки для значений расхода Окончательный O / N. - Установите чаш обратно в инкубаторе в течение 24 ч. Заменить капилляры при постоянной времени в течение всего эксперимента.
- Удалить капилляры осторожно из ампул и измеряют уровень жидкости по отношению к черной линии разметки.
- Тщательно проверьте уровень жидкости в макете флаконе.
Примечание: Если уровни упали более чем на 2 мм, это указывает на то, что испарение является высоким, и уровень потребления не являются надежными. - Смочить пробки осторожно с 2 мл воды и вставить новый набор капилляров, как указано в пунктах 2.3.3 - 2.3.10. Установите чаш обратно в инкубаторе в течение 24 ч.
- Определение предпочтений
- Подсчитайте общее потребление каждого капилляра путем вычитания конечного уровня из Initial уровень в начальной точке.
- Объединить значения обоих капилляров с той же пищей (т.е. nonethanol капилляры отдельно от этанолсодержащих капилляров).
- Подсчитайте предпочтение этанола путем вычитания количества потребленной из капилляров без этанола от количества потребляемого из этанола, содержащего капилляры и делят значение на суммарные значения потребления из всех капилляров одного и того же флакона.
- Среднее значение на основании предпочтений индексы всех флаконах по той же экспериментальной группы.
Примечание: Nonethanol 1 (NE1), Nonethanol 2 (NE2), Этанол 1 (E1), Этанол 2 (Е2), Итого nonethanol (Total NE) = NE1 + NE2, Общий этанол (Total E) = E1 + E2, Общая сумма Потребляемая мощность (общая сумма) = Общий NE + Total E, и Этанол предпочтения Index (PI)
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
FPreviously, Devineni и др. показали , что , когда плодовые мушки дают выбор к потреблению этанола , содержащего пищу, они проявляют сильное предпочтение этанол-содержащие продукты над nonethanol , содержащей пищу 6. Здесь показаны некоторые репрезентативные результаты, полученные нами при опробование врожденное предпочтение к этанолу наивных мужчин мух, которые не прошли протокол обучения.
Наивные Canton S самцов мухи были собраны на вылупления, в возрасте до 4-дневного возраста, и анализировали на их врожденным предпочтением к потреблению этанола в течение 4 дней (рисунок 2). Анализ количества потребленных из этанол- и nonethanol содержащих решений показывает , что мухи демонстрируют надежные предпочтение потребляя 15% пищевого этанола над nonethanol пищи (рисунок 2).
Использование против сексуальнойопыт, ранее мы показали, что самцы мух, которые были допущены к спариванию в группах ( "повязана сгруппируете") дисплей более низкое предпочтение этанола, чем однократно размещались мужчин, которые были отвергнуты ранее спаренных самок ( "отвергнута развязкой"). Мы использовали несколько элементов управления , чтобы отцепить опыт корпуса из опыта сопрягаемой связанных и показал , что дифференциал предпочтения является результатом опыта спаривания 5.
Использование протокола обучения, описанный здесь, мы сгенерировали однократно повязана и отклоненные мужчин мух, которые прошли аналогичные жилищные и брачные режимы. Один мужчина Canton S мухи были подвергнуты в течение 4 дней в несопоставимых опыта ответными. Одна когорта мужчин было разрешено взаимодействовать и спариваться с девственных самок мух (одиночный повязана когорте), а другая когорта была обучена с ранее сопряженными самок мух (одиночный отвергнута когорте). После этапа обучения, одиночные самцы обезжиривающимм две когорты были сгруппированы (8 / флакон) и помещали в капилляр фидерных флаконах; их добровольное потребление этанола было зарегистрировано в течение 4 дней (рис 3А). Предпочтение к потреблению этанола рассчитывали из данных о потреблении с использованием формулы на шаге 2.4 (фиг.3В). Положительные значения указывают на предпочтение этанол-содержащих продуктов питания, так и отрицательные значения указывают на отвращение к этанол-содержащие продукты.
Данный эксперимент поддерживает наши предыдущие выводы, предполагая, что сексуальный опыт, а не жилого состояния, модулирует потребление этанола. Успешное спаривание увеличивает внутренние уровни вознаграждения, что, в свою очередь, снижает потребление этанола. Отказы, воспринимаемые как отсутствие вознаграждения, приводят к увеличению вознаграждения ищущих поведения (рис 3B).
Рисунок 2. Пример врожденной предпочтение Потребляйте этилового спирта. Наивные мужчины WT были сгруппированы в группы по 8 мужчин / пузырек, а их потребление этанол- и nonethanol растворов, содержащих регистрировали в течение 96 часов. Мухи потребляется большее количество 15% этанола containinг пищи (** P <0,01, *** р <0,001, двусторонний ANOVA с повторными измерениями с Бонферрони пост-тестов, п = 8). Приведенные данные представляют собой среднее значение + SEM или среднее - SEM. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 3. Противоположные Спаривание Опыт mModulate Этанол предпочтения. (А) Схема комбинированного протокола. Одиночные девственные самцы WT могут спариваться с девственных самок или подвергают 3x 1h ухаживания подавление тренировок (изображается как «Т»), разнесенных на 1 час отдыха (обозначен как "R"). Обучение повторяется в течение 4 дней. В конце каждого дня, мухи помещаются в инкубатор (обозначен как "ON"). После 4 дней обучения, самцы были помещены во флаконы, где они могли бы выбрать, чтобы питаться откапилляры, содержащие пищевые растворы с добавлением или без 15% этанола. (B) Single отвергнута мужчины выставлены более высокое предпочтение этанола , чем отдельные спаренных мужчин (** P <0,01, двусторонний повторных измерений ANOVA с Бонферрони пост- испытаний, п = 9, сравнения между группами лечения через 3 суток после окончания обучение). Приведенные данные представляют собой среднее значение + SEM или среднее - SEM. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
| опорный разрез | Заметки |
| 1.1 | Может быть использован во многих экспериментах |
| 1.2 | Может храниться в 4 ° С в течение нескольких недель |
| 1.3 | Хранить в 4 ° C после того, как автоклав |
| 1.4 | В возрасте до 3 - 4 г до тогоиспользуется в эксперименте |
| 1.5 | Этот шаг должен проходить вечером перед каждой тренировкой |
| 2.1 | Этот шаг должен происходить утром каждой тренировки |
| 2.2 | Для того, чтобы повторить в 3-х последовательных сессий подготовки в течение 4 дней |
| 2.3 | Свалка пробки с водой, измерения расхода и заменить капилляры в течение 4 дней |
| 2.4 | Этот шаг делается каждый раз перед заменой капилляры в течение двух выбора анализа |
Таблица 1. Обзор протокола , изображающие порядок и время потока для различных этапов.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Мы благодарим У. Хеберлайн и А. Devineni для длительных обсуждений и технических консультаций. Мы также благодарим членов лаборатории Шохат-Офир, А. Benzur, Л. Kazaz и О. Шалом, за помощь с демонстрации метода. Особая благодарность идет к Элиэзер Costi для создания систем для полетов в лаборатории. Эта работа была поддержана Израильского научного фонда (384/14) и гранты Мари Кюри Карьера интеграции (CIG 631127).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Polystyrene 25 x 95 mm Vials | FlyStuff | 32-109 | |
| narrow plastic vials flugs | FlyStuff | 42-102 | |
| Disposable Sterile Needle 18 G and 27 G | can be acquired by any company | 1.20 X 38 mm (18 G x 1 1/2") , 0.40 X 13 mm (27 G x 1/2") | |
| 10 x 75 mm Borosilicate Glass Disposable Culture Tubes | kimble chase | 73500-1075 | |
| calibrated pipets 5 μL | VWR | 53432-706 | color coded white to contain 5 μL |
| Mineral Oil | Sigma-Aldrich | M5904 | |
| Sucrose, Molecular Biology Grade | CALBIOCHEM | 573113 | |
| Yeast extract Powder for microbiology | can be acquired by any company | ||
| Ethanol | Sigma-Aldrich | 32221 | |
| standard pipette Tips (micro-pipetts) | ThermScientific | T114R-Q | volume: 0.1 - 20 μL (ultramicro) |
| IDENTI-PLUGS (Foam Tube Plugs) | Jaece | L800-A | fits opening 6 - 13 mm |
| IDENTI-PLUGS (Foam Tube Plugs) | Jaece | L800-D | fits opening 35 - 45 mm |
| virginator fly stock | bloomington drosophila stock center | #24638 | |
| Narrow Vials, Tray Pack (PS) | Genesee Scientific Corporation | # 32-109BR | |
| Drosophila Media Recipes and Methods | Bloomington Drosophila Stock Center | http://flystocks.bio.indiana.edu/Fly_Work/media-recipes/molassesfood.htm | |
| propionic acid | Sigma-Aldrich | P5561 | |
| phosphoric acid | Sigma-Aldrich | W290017 | |
| Methl 4-Hydroxybenzoate | Sigma-Aldrich | H3647 | |
| Agar Agar | can be acquired by any company | ||
| corn meal | can be acquired by any company | ||
| Grandma's molasses | B&G Foods, Inc | not indicated | |
| instant dry yeast | can be acquired by any company |
References
- Robinson, G. E., Fernald, R. D., Clayton, D. F.
- Koob, G. F. Neurobiological substrates for the dark side of compulsivity in addiction. Neuropharmacol. 56, Suppl 1 18-31 (2009).
- Kaun, K. R., Devineni, A. V., Heberlein, U. Drosophila melanogaster as a model to study drug addiction. Hum Genet. 131, 959-975 (2012).
- Devineni, A. V., Heberlein, U.
- Shohat-Ophir, G., Kaun, K. R., Azanchi, R., Mohammed, H., Heberlein, U. Sexual deprivation increases ethanol intake in Drosophila. Science. 335, 1351-1355 (2012).
- Devineni, A. V., Heberlein, U. Preferential ethanol consumption in Drosophila models features of addiction. Curr Biol : CB. 19, 2126-2132 (2009).
- McBride, S. M., et al. Mushroom body ablation impairs short-term memory and long-term memory of courtship conditioning in Drosophila melanogaster. Neuron. 24, 967-977 (1999).
- Ejima, A., Smith, B. P., Lucas, C., Levine, J. D., Griffith, L. C. Sequential learning of pheromonal cues modulates memory consolidation in trainer-specific associative courtship conditioning. Curr Biol. 15, 194-206 (2005).
- Ejima, A., et al. Generalization of courtship learning in Drosophila is mediated by cis-vaccenyl acetate. Curr Biol. 17, 599-605 (2007).
- Keleman, K., Kruttner, S., Alenius, M., Dickson, B. J. Function of the Drosophila CPEB protein Orb2 in long-term courtship memory. Nat Neurosci. 10, 1587-1593 (2007).
- Kaun, K. R., Azanchi, R., Maung, Z., Hirsh, J., Heberlein, U. A Drosophila model for alcohol reward. Nat Neurosci. 14, 612-619 (2011).
- Xu, S., et al. The propensity for consuming ethanol in Drosophila requires rutabaga adenylyl cyclase expression within mushroom body neurons. Genes Brain Behav. 11, 727-739 (2012).
- Devineni, A. V., Heberlein, U. The evolution of Drosophila melanogaster as a model for alcohol research. Annu Rev Neurosci. 36, 121-138 (2013).
- Ro, J., Harvanek, Z. M., Pletcher, S. D. FLIC: high-throughput, continuous analysis of feeding behaviors in Drosophila. PloS one. 9, 101107 (2014).
- Itskov, P. M., et al. Automated monitoring and quantitative analysis of feeding behaviour in Drosophila. Nat Commun. 5, 4560 (2014).
- Yapici, N., Cohn, R., Schusterreiter, C., Ruta, V., Vosshall, L. B. A Taste Circuit that Regulates Ingestion by Integrating Food and Hunger Signals. Cell. 165, 715-729 (2016).
- Peru, Y. C., et al. Long-lasting, experience-dependent alcohol preference in Drosophila. Addict Biol. 19, 392-401 (2014).
- Dus, M., et al. Nutrient Sensor in the Brain Directs the Action of the Brain-Gut Axis in Drosophila. Neuron. 87, 139-151 (2015).
- Anderson, D. J., Adolphs, R. A framework for studying emotions across species. Cell. 157, 187-200 (2014).
- Gibson, W. T., et al. Behavioral responses to a repetitive visual threat stimulus express a persistent state of defensive arousal in Drosophila. Curr Biol. 25, 1401-1415 (2015).
