Summary
Представлен протокол для количественного определения белка в сложных биологических жидкостей, с использованием технологии автоматизированного иммуно MALDI (iMALDI).
Abstract
Масс-спектрометрия (МС) является одним из наиболее часто используемых технологий для количественной оценки белков в сложных проб, с отличным пробирного специфичности в результате прямого обнаружения соотношение массы и заряда каждой молекулы целевых. Однако на основе MS протеомики, как большинство других аналитических методов, имеет уклон в сторону измерения высоких изобилие аналитов, так это сложно добиться обнаружения ограничивает низкой нг/мл или ПГ/мл в сложных образцов и это является диапазон концентраций для многих болезни соответствующих белков в biofluids таких как человеческой плазмы. Для оказания помощи в обнаружении низкого изобилие аналитов, иммуно обогащение интегрирована в assay сконцентрироваться и очищают аналита перед МС измерение, значительно улучшая анализа чувствительности. В этой работе технология иммуно - Matrix-Assisted лазерной десорбции/ионизации (iMALDI) представлены для количественного определения белков и пептидов в biofluids, основанные на иммуно обогащение на бусы, следуют MALDI MS измерения без предварительного Элюирование. Антитела против пептида функционализированных на магнитные бусы и инкубировали с образцами. После мытья, бисер передаются непосредственно на пластину MALDI целевой, и сигналы измеряются MALDI-время полета (MALDI-TOF) документа после того, как матрица решение было применено к бисеру. Упрощается процедура подготовки образца, по сравнению с другими иммуно MS анализов, и измерение MALDI быстро. Подготовка всей выборки автоматизирован с жидкостью системы, обработки с улучшение пробирного воспроизводимость и высокую пропускную способность. В этой статье, iMALDI assay используется для определения пептид ангиотензин I (анг я) концентрация в плазме крови, которая клинически используется как индикация активности ренина плазмы для скрининга первичный гиперальдостеронизм (PA).
Introduction
Масс-спектрометрия стала незаменимым инструментом в количественном протеомики. Масс-спектрометрия можно определить массы целевых белков и пептидов, поэтому полученные аналита сигналы могут быть весьма конкретными по сравнению с иммуноанализа. Два способа ионизации, электроспрей и MALDI, наиболее часто используются для определения белков и пептидов,1,2,3,4. Серьезной проблемой в количественной оценки на основе MS белка лежит в обнаружении низкого изобилие белков в сложных проб на нг/мл или ПГ/мл концентрация в присутствии высоких изобилие белков, и многие кандидат белковых биомаркеров в плазме крови человека в рамках этого диапазона5. Эта проблема во многом вызвано изначально широкий динамический диапазон и сложность человеческого протеома6.
Для преодоления этих проблем обнаружения, иммуно MS методы были разработаны для обогащения белков-мишеней или пептиды из примеров решений на прочную поверхность, следуют элюции аналитов и МС измерение7,8 , 9 , 10. через иммуно обогащение, аналитов очищаются от сложных образцов и таким образом к минимуму Ион подавление эффекты от других молекул. Среди различных твердых поддерживает, магнитные шарики в настоящее время наиболее широко используются как они имеют преимущества высокой антитела связывающая способность и простотой в обращении. Магнитные бусы с различными functionalizations и размеров разработаны и коммерциализации для иммунопреципитации экспериментов. На сегодняшний день, иммуно обогащение на бусины была сопряжена с электроспрей ионизации (ESI) и MALDI MS для измерения белков и пептидов. В стабильных изотопов стандартов и захвата анти пептида антитела (SISCAPA) технологии перевариваются белки в образцах, следуют инкубации с антителами бусины иммуно-обогащения. В «классических» SISCAPA захваченные proteotypic пептидов этого eluted из бисера и измеряется по жидкой хроматографии-ESI-мс (LC-MS), или путем прямого инфузии ESI-несколько реакции мониторинг-мс (ESI-мно-МС)11,12. Иммуно обогащение улучшена чувствительность пробирного управления записями сообщений по 3-4 порядка величины, достигнув диапазон низких нг/мл13.
По сравнению с электроспрей MS, MALDI MS быстрее и не включают очистки и восстановления сбалансированности LC столбцов так Есть никаких проблем загрязнения и уноса, что делает его более подходящим для высок объём исследований14. Иммуно-MALDI технология была разработана в нашей лаборатории объединить иммуно обогащения с MALDI MS для чувствительной и конкретной количественной оценки пептидов и белков (основанный на количественный proteotypic пептидов)15,16 ,17. После иммуно обогащение бисер залегают на плите целевой MALDI, матрица решение добавляется к бисеру и плита готова для анализа MALDI-TOF MS после высыхания. Элюирующий пептидов из бисера не выполняется как отдельный шаг, но сходство прыгните аналитов этого eluted путем решения матрицы MALDI когда он добавляется к шарик пятна, таким образом упрощая пробоподготовки и минимизации потерь образца. IMALDI технология применялась в различных приложениях18,19и недавно автоматизированных и используется для измерения ангиотензин I (анг я) для определения плазмы ренина активность (PRA)20. Этот протокол будет демонстрировать процедура, используемая для выполнения автоматизированных iMALDI assay. Принимая PRA assay как, например, CVs между день менее 10% были достигнуты благодаря автоматизации, с возможностью измерения 744 проб в день20.
Assay пра iMALDI, продемонстрировали в этой рукописи не требует переваривания белка, как молекулы целевых (анг я) – это пептид с молекулярной массой 1295.7 да. В других анализов, где необходима переваривания белка и пептид используется как суррогат для интактных белков выбранный пептидные для iMALDI должны быть уникальными и специфическими для целевого белка, с массой более 800 да так что она может быть легко отличить от c химический шум от решения матрицы MALDI. Анти пептида антитела необходимы для иммуно обогащение пептидов. Протокол для измерения пра iMALDI assay состоит из четырех этапов: 1) поколение Анг I в плазме крови человека; 2) иммуно обогащение анг я использую бисер антителами; 3) передача Бусы MALDI целевой пластины и Добавление матрицы решения; и 4) сигнал приобретение MALDI-TOF-MS и данных анализа20.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
количество реагентов, описанные ниже основывается на измерении 20 образцов пациента плазмы. Протокол представлена ниже следующим образом руководство Университета Виктории ' Комитет по этике исследований человеческого ф.
1. поколение Анг I в плазме крови человека
- оттепель образцы плазмы (≥ 200 мкл) в комнате ванна на 5 мин температуры воды, а затем поместить образцы на льду до тех пор, пока полностью разморожен.
- Перевести 200 мкл каждого плазмы образца вручную, чтобы отделить скважин 1.1 мл штанхглубинных плиты (образец плита) и центрифуги пластину в центрифуге для 10 мин на 2 ° C и 1278 x g.
- Использовать автоматизированные жидкость, системы обработки серийно разбавить 500 фмоль/мкл Анг I NAT стандартное решение подготовить шесть решений калибратор с курицей яичный альбумин (0,1, 0,2, 0,6, 1.9, 5.7, 17.2 фмоль/мкл).
- Пипетку 200 мкл каждого калибратора хорошо и 125 мкл поколения буфер образца пластины.
Примечание: CEWA в фосфат буферизации физраствора (PBS) буфера необходимо свежеприготовленные на день эксперимента. - С помощью автоматизированных жидкости, системы обработки, в новой пластинкой смесь 125 мкл плазмы супернатанта или 125 мкл CEWA в PBS с 25 мкл анг я поколения буфер, который содержит 1 М трис, 0,2 мм Этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА) и 1 мм phenylmethylsulfonyl фторид (PMSF).
Примечание: Подготовьте анг я поколения буфера путем смешивания 1 М трис/0,2 мм ЭДТА водный буфера (приспособиться к рН 5,5 с использованием уксусной кислоты) и решение PMSF (100 мм в метаноле). Оба решения может храниться до 1 месяца на 4 ° C. смесь двух решений на день эксперимента. - Автоматически перевести решения в 96-луночных плита, 3 реплицирует каждого решения, 34 мкл в колодец. Инкубировать пластины при 37 ° C для 3 х.
2. Иммуно обогащение анг я антителами используя бусы
- спряжение антител на магнитные бусы белок G
Примечание: спряжение антитела с бисером производится вручную в течение 3 ч анг я поколения период на день эксперимента. Для других аналитов конъюгированных бусины могли бы храниться в PBS буфер, содержащий 0,015% ПАРНЕЙ (PBSC) при 4 ° C на три месяца или дольше, в зависимости от свойств и стабильности антитела.- Передачи 110 мкл суспензии из бисера (достаточно для измерения 20 образцов и приготовления калибровочной кривой 6-точка) в 1,5 мл трубку. Вымойте бусины семь раз с 1 мл 25% Ацетонитрил/PBSC и три раза с 1 мл раствора PBSC. Использование магнитного стенд для пеллет бусы между каждым шагом стиральная. Удаление буфера мыть после последнего Вашингтон
Примечание: Стирка 7 раз с 25% Ацетонитрил/PBSC имеет решающее значение для удаления MS-несовместимые добавок в шарик шлама, таких как Tween-20. Если есть нет таких добавок в выбранном бусы, этот шаг обширные Стиральная не может быть необходимым. - Ресуспензируйте бисер в 110 мкл PBSC и 110 мкл анти анг я антитела (концентрация окончательный антитела: 100 мкг/мл). Смешать бусы и решения, закупорить и инкубировать их при комнатной температуре в течение 1 ч, вращающихся на 8 об/мин.
- Мыть бисер 3 раза с 1 мл раствора PBSC и Ресуспензируйте в 1100 мкл PBSC.
Примечание: Если какое-либо решение шарик утекло в крышку трубки во время инкубации, спина вниз решения с помощью настольная центрифуга на 2680 x г. - Вручную передать решение шарик 96-луночных плиты (шарик Стандартные плиты). Используйте автоматизированные жидкости, обработки системы Алиготе бусины же 96-луночных пластины, 120 мкл за хорошо.
- Передачи 110 мкл суспензии из бисера (достаточно для измерения 20 образцов и приготовления калибровочной кривой 6-точка) в 1,5 мл трубку. Вымойте бусины семь раз с 1 мл 25% Ацетонитрил/PBSC и три раза с 1 мл раствора PBSC. Использование магнитного стенд для пеллет бусы между каждым шагом стиральная. Удаление буфера мыть после последнего Вашингтон
- иммуно обогащение на бисер
- после 3 h Анг I поколения период, место пластину инкубации на ICE для 10 мин прекратить поколения Ang I.
- Автоматически разбавить SIS пептид Стоковый раствор (10 пмоль/мкл) 100 раз с PBS буфер и далее автоматически Алиготе стабильной isoptope Стандартный пептид разбавления до 96-луночных ПЦР-планшете. Перевести 1.5 мкл раствора стабильного изотопа стандартов (SIS) пептида (содержащие 100 фмоль) в каждой скважине пластину инкубации и смешайте его с образцы плазмы или CEWA в PBS буферов.
- Автоматически передавать содержимое пластину инкубации шарик решение, 10 мл на хорошо, смешайте.
- Инкубировать пластину на 4 ° C в течение 1 ч при вращении в 8 об/мин.
- Мыть бисер три раза автоматически с 5 мм бикарбонат аммония (AmBic) раствор, 100 мкл на хорошо за мыть. После последнего мыть Ресуспензируйте бисер в 7 мкл 5 мм AmBic решение в каждой скважине. Использовать магнит тянуть бисер на дно после последнего Вашингтон
3. Передача бусы на MALDI целевой пластины и Добавление матрицы решения
- передачи 7 мкл шарик навоза автоматически на пластину целевой MALDI пятно размером 2 600 мкм. Пусть бисером высохнуть.
Примечание: Небольшой USB-powered вентилятор может использоваться для ускорения процесса сушки шарик. - Автоматически 2 мкл α-циано-4-Гидроксикоричная кислоты (HCCA)-Матрица решения (содержащие 3 мг/мл HCCA, цитрат аммония 1,8 мг/мл, Ацетонитрил 70% и 0,1%, trifluoroacetic кислота) от матрицы хорошо на каждый образец пятно на пластину целевой .
4. Сигнал приобретение MALDI-TOF-MS и анализа данных
- анализ образца пятна с инструментом MALDI-TOF режиме положительных отражателя. Выполнение внутренней калибровки, сглаживание данных и вычитание автоматически с поставщика программного обеспечения.
Примечание: Режим (положительных/отрицательных, линейный/рефлектор) выбран для MALDI-TOF измерения зависит от целевой пептидов или белки. - Рассчитать относительный ответ коэффициент (коэффициент интенсивности Nat/SIS) и сравнить его с калибровочной кривой определить из анг концентрация в каждом образце. Рассчитать PRA, используя уравнение (1), где Δt анг я поколение представляет время, используется для генерации Ang I.
PRA = [анг я] / Δt анг я поколения (1)
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Автоматизированная iMALDI процедура измерения анг я показано на рисунке 1. Целевой пептидов (эндогенные пептидов или пептиды из переваренной белков) обогащены на борьбе с пептидной магнитные бусы, а затем бисер передаются целевой пластина для измерения MALDI. Вся процедура упрощена по сравнению с другими технологиями иммуно MS, которые требуют дополнительных пептид элюции шаги. Автоматизация анализа iMALDI позволяет высок объём анализ большого числа проб с Интер день коэффициент вариации (кв) ниже 10% 20. Представитель спектров получена путем измерения анг я в пробах человеческой плазмы показано на рисунке 2. SIS пептиды функция как внутренний стандарт для пептида quantitation. Корреляции PRA значений из 188 пациентов образцов, полученных с автоматизированной iMALDI assay с PRA значения, полученные с помощью клинических LC-MS/MS процедура17 показан на рисунке 3. Эти два метода имеют коэффициент корреляции 0,98; разница между склонах может быть вызвана с помощью различных внутренних стандартов в этих двух методов, или путем использования различных антител в iMALDI процедура20. Линейный диапазон assay и точность анализа показано на рис. 4 и 5.
Рисунок 1: Схема потока процесса автоматизированной iMALDI PRA assay. Адаптировано из ссылки20, с разрешения. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 2: Представитель спектры NAT и SIS анг я пептиды измеряется от человеческой плазмы образца.
Рисунок 3: Значения корреляции PRA измеряется путем iMALDI и LC-MS/MS от 188 пациентов образцов. Адаптировано из ссылки20, с разрешения.
Рисунок 4: Линейный Диапазон iMALDI PRA пробирного отражателя (A) и (B) линейный режим. Адаптировано из ссылки20, с разрешения. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 5: Внутридневной точность (A) и внутридневного точность (B) iMALDI PRA анализов на плазме бассейны с низкой, средней и высокой PRA значениями. Адаптировано из ссылки20, с разрешения. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
По сравнению с обычными белка на основе MS количественной оценки, iMALDI использует антитела, чтобы обогатить аналитов и очистить их от сложных образцов, поэтому делает возможным количественно белков и пептидов при низких концентрациях. Важнейшим шагом в iMALDI протоколе является иммуно обогащение целевой пептиды. Для этой цели должен быть выбран с высокой специфичности и сродство антитела. В SISCAPA сообщалось, что для достижения высокой чувствительности низкой нг/мл21потребуется сродства антител на 10-9 M или лучше. Кроме того бусины с высоким антитела связывающая способность являются предпочтительными для оптимального обогащения.
Это также важно для создания относительно «чистой» спектры для молекулы-мишени с минимальным фоновых уровней. Высокое соотношение сигнал шум может быть достигнуто через обширные шарик промывки после шага иммуно обогащения. Кроме того мы обнаружили, что стирки шарик пятна на пластину целевой после добавления и сушки решение матрица может значительно уменьшить шум сигналов и таким образом улучшить соотношение сигнал шум.
Assay пра iMALDI, продемонстрировали в этой работе не требует протеолиза шаги, как молекулы целевых анг я – это пептид. Для количественного определения белковых молекул в образце, белок переваривается обычно в пептидов до иммуно обогащение, хотя для эпитопов содержащих пептидов, пищеварение может быть выполнена на захваченных белок22,23. В этом случае существующий протокол пищеварение протеина можно легко вставляется в процесс iMALDI. В зависимости от буфера пищеварение опреснительные шаг может потребоваться до захвата пептидов на бусы, чтобы избежать вмешательства с использованием антител пептид привязки.
Подобно к другим методам иммуно MS, производство антител против пептида является одной из основных задач в развитии iMALDI анализов. Недавно Triple X протеомики технология была разработана для производства вяжущих сходства выполняемых несколькими пептидов на связыватель24. Это может снизить стоимость анти пептида антитела и способствовало бы развитию одновременно мультиплексированных анализов с использованием единого инкубации. Кроме того антитела фрагменты25 или синтетических аптамеры26 могут быть альтернативы использованию нетронутыми антител и будет иметь преимущество легче производства. Синтетические аптамеры были зарегистрированы как показаны ниже фоновых уровней чем нетронутыми антител при использовании сходства обогащение26.
iMALDI технология сочетает в себе преимущества иммуноанализа с масс-спектрометрия MALDI, включение анализа быстрой и высок объём белка/пептида в большое количество сложных проб, с высокой чувствительностью и специфичностью. В отличие от других методов иммуно MS после иммуно захвата, цель, которую пептиды не этого eluted в трубе, но бисер, перевозящих аналитов передаются на пластину целевой MALDI MS-анализа, таким образом избегая потери пептидов из-за их адсорбции пластик трубы. По сравнению с широко используемым proteomic инструментов, таких как Западная помарка или ELISA, в iMALDI, значительно сократить время разработки пробирного и стоимости требуется только один антитела. Нижний предел обнаружения, которую мы получили в PRA assay сопоставимые обычные ELISA и хорошо в пределах физиологического диапазона. Антитела и соотношение массы и заряда обеспечивают двойной выбор процесса, который обеспечивает высокую специфичность assay. Применение iMALDI не ограничивается PRA анализов, но может применяться количественный любого выражения протеина и даже количественной модификации белков в сложных образцах. Примечательно автоматизированных iMALDI высокой пропускной способности может быть мощный клинический инструмент для обнаружения и проверки белковых биомаркеров в различных заболеваний, благодаря наличию настольная MALDI инструментов в настоящее время используется в клиниках для бактериального Идентификация.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
C.H.B держит патент на технологию iMALDI.
Acknowledgments
Мы благодарим финансовой поддержки из генома Канады и Британской Колумбии генома для операций (204PRO) и развития технологии (214PRO) через сеть инноваций генома (Джин). Мы благодарим платформы обнаружения наркотиков в исследовательском институте центра здоровья университета МакГилл для использования MALDI-TOF инструмента для съемок. H.L. благодарен за поддержку от докторантура стипендий от национальной науки и инженерных исследований Совет Канады (СЕНТИ). C.H.B благодарен за поддержку от переднего края Дотационный фонд (LEEF). C.H.B. благодарен за поддержку Председателя McGill Сигал в молекулярная онкология в университете Макгилла (Монреаль, Квебек, Канада). M.X.C. и C.H.B. благодарна за поддержку от Уоррен ю. Сопер благотворительный фонд и Фонд семьи Сегал Элвин еврейской больницы (Монреаль, Квебек, Канада).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Healthy control human plasma | Bioreclamation | HMPLEDTA2 | |
| Ammonium bicarbonate | Sigma Aldrich | 09830 | |
| Ammonium citrate dibasic | Sigma Aldrich | 09833 | |
| CHAPS (>=98%) | Sigma Aldrich | C9426 | |
| Albumin from chicken egg white (>98%) | Sigma Aldrich | A5503 | |
| Ethylenediaminetetraacetic acid | Sigma Aldrich | EDS | |
| Alpha-cyano-4-hydroxycinnamic acid | Sigma Aldrich | 70990 | |
| Phosphate buffered saline | Sigma Aldrich | P4417 | |
| Phenylmethanesulfonyl fluoride | Sigma Aldrich | 78830 | |
| Trifluoroacetic acid | Thermo Fisher Scientific | 85172 | LC-MS grade |
| acetonitrile | Fluka | 34967 | LC-MS grade |
| water | Fluka | 39253 | LC-MS grade |
| acetic acid | Fluka | 320099 | LC-MS grade |
| Tris(hydroxymethyl)aminomethane | Roche Diagnostics | 3118169001 | |
| Dynabeads Protein G magnetic beads | Thermo Fisher Scientific | 10003D | 2.8 μm, 30 mg/mL |
| anti-Ang I goat polyclonal antibody | Santa Cruz Biotechnology | sc-7419 | |
| Nat and SIS Ang I | synthesized at the University of Victoria-Genome BC Proteomics Centre | ||
| Automated liquid handling system | Agilent | 16050-102 | Agilent Bravo robotic workstation |
| Magnet | Thermo Fisher Scientific | 12321D | Invitrogen DynaMag-2 magnet |
| Tube rotator | Theromo Scientific | 400110Q | Labquake Tube Rotator |
| Magnet | Thermo Fisher Scientific | 12027 | DynaMag-96 side skirted magnet |
| Magnet | VP Scientific | 771RM-1 | used to pull the beads to the bottom of the well |
| MALDI-TOF | Bruker | Bruker Microflex LRF instrument |
References
- Aebersold, R., Mann, M.
- Nicol, G. R., et al. Use of an Immunoaffinity-Mass Spectrometry-based Approach for the Quantification of Protein Biomarkers from Serum Samples of Lung Cancer Patients. Mol. & Cell. Proteomics. 7 (10), 1974-1982 (2008).
- Webster, J., Oxley, D. Chemical Genomics and Proteomics: Reviews and Protocols. Zanders, E. D. , Humana Press. 227-240 (2012).
- Yergey, A. L., et al. De novo sequencing of peptides using MALDI/TOF-TOF. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 13 (7), 784-791 (2002).
- Anderson, L. Six decades searching for meaning in the proteome. J. Proteomics. 107, 24-30 (2014).
- Landegren, U., et al. Opportunities for Sensitive Plasma Proteome Analysis. Anal. Chem. 84 (4), 1824-1830 (2012).
- Guo, A., et al. Immunoaffinity Enrichment and Mass Spectrometry Analysis of Protein Methylation. Mol. & Cell. Proteomics. 13 (1), 372-387 (2014).
- Florentinus-Mefailoski, A., Soosaipillai, A., Dufresne, J., Diamandis, E. P., Marshall, J. G. An enzyme-linked immuno-mass spectrometric assay with the substrate adenosine monophosphate. Anal. Bioanal. Chem. 407 (4), 1119-1130 (2015).
- Fredolini, C., et al.
- Tran, J. C., et al. Automated Affinity Capture and On-Tip Digestion to Accurately Quantitate in Vivo Deamidation of Therapeutic Antibodies. Anal. Chem. , (2016).
- Razavi, M., Leigh Anderson, N., Pope, M. E., Yip, R., Pearson, T. W. High precision quantification of human plasma proteins using the automated SISCAPA Immuno-MS workflow. N. Biotechnol. 33 (5 Part A), 494-502 (2016).
- Razavi, M., et al. High-Throughput SISCAPA Quantitation of Peptides from Human Plasma Digests by Ultrafast, Liquid Chromatography-Free Mass Spectrometry. J. Proteome Res. 11 (12), 5642-5649 (2012).
- Anderson, N. L., et al. SISCAPA Peptide Enrichment on Magnetic Beads Using an In-line Bead Trap Device. Mol. & Cell. Proteomics. 8 (5), 995-1005 (2009).
- Parker, C. E., Pearson, T. W., Anderson, N. L., Borchers, C. H. Mass-spectrometry-based clinical proteomics - a review and prospective. The Analyst. 135 (8), 1830-1838 (2010).
- Reid, J. D., Holmes, D. T., Mason, D. R., Shah, B., Borchers, C. H. Towards the Development of an Immuno MALDI (iMALDI) Mass Spectrometry Assay for the Diagnosis of Hypertension. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 21 (10), 1680-1686 (2010).
- Mason, D. R., Reid, J. D., Camenzind, A. G., Holmes, D. T., Borchers, C. H. Duplexed iMALDI for the detection of angiotensin I and angiotensin II. Methods. 56 (2), 213-222 (2012).
- Camenzind, A. G., vander Gugten, J. G., Popp, R., Holmes, D. T., Borchers, C. H. Development and evaluation of an immuno-MALDI (iMALDI) assay for angiotensin I and the diagnosis of secondary hypertension. Clin. Proteomics. 10 (1), 20 (2013).
- Jiang, J., et al. Development of an immuno tandem mass spectrometry (iMALDI) assay for EGFR diagnosis. Proteomics Clin Appl. 1, (2007).
- Jiang, J., Parker, C. E., Fuller, J. R., Kawula, T. H., Borchers, C. H. An Immunoaffinity Tandem Mass Spectrometry (iMALDI) assay for Detection of Francisella tularensis. Analytica chimica acta. 605 (1), 70-79 (2007).
- Popp, R. An automated assay for the clinical measurement of plasma renin activity by immuno-MALDI (iMALDI). Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Proteins and Proteomics. 1854 (6), 547-558 (2015).
- Schoenherr, R. M., et al. Automated screening of monoclonal antibodies for SISCAPA assays using a magnetic bead processor and liquid chromatography-selected reaction monitoring-mass spectrometry. J Immunol Methods. 353 (1-2), 49-61 (2010).
- Borchers, C. H. Methods of quantitation and identification of peptides and proteins. US patent. , US 7846748 B2 (2010).
- Borchers, C. H. Methods of quantitation and identification of peptides and proteins. Canadian patent CA. , CA 2507864 C (2011).
- Weiß, F., et al. Catch and measure-mass spectrometry-based immunoassays in biomarker research. Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Proteins and Proteomics. 1844 (5), 927-932 (2014).
- Nelson, A. L. Antibody fragments: Hope and hype. mAbs. 2 (1), 77-83 (2010).
- Gupta, V., et al. An evaluation of an aptamer for use as an affinity reagent with MS: PCSK9 as an example protein. Bioanalysis. 8 (15), 1557-1564 (2016).
