Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.

Artículo de método

Síntesis y caracterización de placenta condroitina sulfato (plCSA) - Targeting lípido - nanopartículas de polímero

7.8K vistas

⸱

DOI:

10.3791/58209

⸱

18 de septiembre de 2018

 ,  ,  , 
1Laboratory for Reproductive Health, Institute of Biomedicine and Biotechnology, Shenzhen Institutes of Advanced Technology, Chinese Academy of Sciences (CAS), 2Guangdong Key Laboratory of Nanomedicine, CAS Key Lab for Health Informatics, Shenzhen Institutes of Advanced Technology, Chinese Academy of Sciences (CAS), 3Department of Chemistry, Guangdong Medical University

* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

Aquí, presentamos un protocolo para la síntesis del péptido de Unión placentaria condroitin sulfato A (plCSA-BP)-conjugados polímero lipídico nanopartículas via solo paso sonicación y bioconjugate técnicas. Estas partículas constituyen una novedosa herramienta para la entrega específica de la terapéutica para tumores más humanos y trofoblastos placentarios para tratar cánceres y trastornos placentarios.

Resumen

Un método terapéutico eficaz cáncer reduce y elimina tumores con mínima toxicidad sistémica. Nanopartículas activamente dirigida a ofrecen un enfoque prometedor para la terapia del cáncer. El sulfato de condroitina placentaria glycosaminoglycan (plCSA) se expresa en una amplia gama de las células cancerosas y trofoblastos placentarios y palúdica proteína que var2csa puede atar específicamente a plCSA. Un péptido de Unión placentaria divulgado el sulfato de condroitina A (plCSA-BP), derivado de proteína de la malaria VAR2CSA, puede enlazar también específicamente plCSA en las células cancerosas y trofoblastos placentarios. Por lo tanto, las nanopartículas conjugadas de BP plCSA podrían utilizarse como una herramienta para el suministro de medicamentos dirigidos a los cánceres humanos y trofoblastos placentarios. En este protocolo, se describe un método para sintetizar lípidos-polímero conjugado de BP plCSA nanopartículas cargadas con doxorrubicina (plCSA-DNPs); el método consiste en una técnica de sonicación solo paso y bioconjugate. Además, se describen varios métodos para la caracterización de plCSA-DNPs, incluyendo la determinación de sus propiedades fisicoquímicas y la absorción celular de las células de coriocarcinoma placentario (JEG3).

Introducción

Un método terapéutico eficaz cáncer reduce y elimina tumores con mínima toxicidad sistémica. Por lo tanto, selectiva tumor targeting es la clave para explorar métodos terapéuticos exitosos. Nanopartículas ofrecen una oportunidad prometedora para tratamiento del cáncer, y conjuntos moleculares con diferentes grupos funcionales serán mejorar la eficacia de los medicamentos y reducir los efectos secundarios asociados1,2. Por otra parte, nanopartículas sistemas utilizan principalmente pasiva y activa dirigida a para alcanzar el objetivo tumores3.

Orientación pasivo explota las características innatas de nanopartículas y permeabilidad mejorada y los efectos de la retención (EPR) para llegar a las células del tumor. Liposomas catiónicos se han utilizado con éxito para entregar varios medicamentos anticancerosos a tumores en aplicaciones clínicas4,5,6. A pesar del potencial efecto terapéutico de cáncer eficaz, una concentración baja de drogas en la región del tumor y una incapacidad para distinguir las células tumorales de los tejidos normales son dos limitaciones importantes de nanopartículas dirigidas a pasivo7.

Activadas estrategias dirigida a toman ventaja de antígeno-anticuerpo, ligando-receptor y otras interacciones de reconocimiento molecular específicamente entregar drogas a tumores8. El sulfato de condroitina placentaria glycosaminoglycan (plCSA) se expresa ampliamente en la mayoría de las células cancerosas y trofoblastos placentarios. Por otra parte, la proteína de la malaria VAR2CSA puede atar específicamente a plCSA9,10. Por lo tanto, VAR2CSA puede ser una herramienta para apuntar las células de cáncer humano. Sin embargo, cuando VAR2CSA es conjugados a nanopartículas, la proteína de larga duración puede limitar la penetración de nanopartículas en las células del tumor. Recientemente, descubrió un péptido de Unión plCSA (plCSA-BP), derivado de la proteína de la malaria VAR2CSA. nanopartículas de polímero lipídico plCSA BP conjugado enlazado rápidamente a células de coriocarcinoma y aumentó significativamente la doxorrubicina (DOX) actividad anticancerosa en vivo11; Estas partículas también específicamente adheridos a trofoblastos placentarios y podrían servir como una herramienta para la entrega específica de drogas a la placenta12.

Nanopartículas de polímeros lípidos consisten en una cáscara de monocapa de lípidos y un núcleo polímero hidrofóbico y representan un portador nuevo de la entrega de la droga. Estas nanopartículas combinan las ventajas de liposomas y nanocarriers poliméricos, tales como tamaño de nanopartícula controlable, alta biocompatibilidad, liberación sostenida del fármaco, eficacia de drogas alta carga (LE) y excelente estabilidad13. En este trabajo, utilizamos un método de sonicación solo paso para sintetizar nanopartículas de polímero lipídico. Este método es rápido, conveniente y adecuado para escala-para arriba y ha sido ampliamente utilizado para la preparación de nanopartículas de polímero lipídico por nuestro grupo11,14 y otros15,16,17,18 .

1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) clorhidrato de carbodiimida (EDC) es una carbodiimida popular utilizada como agente de reticulación para conjugar la biomoléculas que contiene aminas y carboxylates19. Además de EDC, N-hydroxysulfosuccinimide (NHS) es el reactivo verbal más común en la superficie y nanopartículas Conjugación reacciones20,21. NHS puede reducir el número de reacciones secundarias y mejorar la estabilidad y rendimiento de éster intermediarios22,23.

Aquí, describimos un protocolo para la síntesis de nanopartículas de polímero lipídico plCSA dirigidos. En primer lugar, se describe la síntesis de sonicación solo paso de nanopartículas de polímero de lípidos cargados de DOX (DNPs). Luego, se introduce una técnica de bioconjugate EDC/NHS para la generación de nanopartículas de polímero lipídico plCSA-BP-conjugados. Esta técnica de bioconjugate puede utilizarse también para conjugar otros anticuerpos y péptidos a nanopartículas. Finalmente, describimos el análisis de propiedades y en vitro fisicoquímico utilizado para caracterizar las nanopartículas de polímeros de lípidos plCSA dirigidos. Creemos que estas nanopartículas de polímero lipídico plCSA dirigida podrían constituir un sistema eficaz para la entrega específica de fármacos para cánceres más humanos y la entrega específica de cargas a la placenta para tratar los trastornos placentarios.

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Protocolo

1. preparación de soluciones Stock

  1. Preparar una solución acuosa de etanol 4% diluyendo 4 mL de etanol absoluto con 100 mL de agua ultrapura. La solución a 4 ° C.
    Nota: Agua ultrapura se define como agua sin contaminantes tales como bacterias, partículas, iones o nucleasas. Agua ultrapura fue obtenida de un sistema de purificación de agua con una resistencia de blanco de hasta 18.2 mΩ·cm, que significa baja contaminación aniónica.
  2. Preparar un 1 mg/mL solución stock de la lecitina de soja mediante la disolución de 20 mg de lecitina de soja en 20 mL de la solución acuosa de etanol al 4%. Almacenar la solución madre de lecitina de soja a 4 ° C.
  3. Prepare un 25 mg/mL solución DSPE-PEG (2000)-COOH disolviendo 100 mg de DSPE-PEG-COOH en 4 mL de la solución acuosa de etanol al 4%. Almacenar la solución a-20 ° C.
  4. Prepare un 10 mg/mL solución DOX disolviendo 50 mg de DOX en 5 mL de agua ultrapura. Almacenar la solución DOX a 4 ° C en la oscuridad.
  5. Prepare un 2 mg/mL solución PLGA mediante la disolución de 20 mg de PLGA en 10 mL de acetonitrilo. Almacenar la solución PLGA a 4 ° C.
    PRECAUCIÓN: Acetonitrilo es inflamable y tóxico. Operar con cuidado en una campana de humos y use el equipo de personal adecuado, tales como batas de laboratorio, gafas de seguridad y guantes de látex.
  6. Prepare una solución ácido (MES, pH 6.0) de 0.1 M 2-(morpholino) (n-2-hidroxietilpiperazina-N'-2-ácido disolviendo 2,17 g de MES en 100 mL de agua ultrapura. Almacenar la solución a 4 ° C.

2. síntesis de la DNPs

Nota: Para evitar la degradación fotoquímica de DOX, todas las operaciones se realizaron en la oscuridad.
Las nanopartículas fueron sintetizadas por un método de sonicación solo paso previamente divulgados11,13,14.

  1. Añadir 3 mL de la solución acuosa de etanol 4% a un tubo de centrífuga estéril de 10 mL. Luego, añadir 90 μg de la solución madre de lecitina de soja, 210 μg de la solución madre de DSPE-PEG-COOH y 750 μg de la solución madre de DOX a 3 mL de la solución acuosa de etanol al 4%.
  2. El tubo de centrífuga en un baño de hielo y el baño de hielo en un procesador de ultrasonidos.
  3. Con una jeringa de 1 mL pipetear 2 mg de la solución madre de PLGA gota a gota (1 gota/4-6 s) en el tubo de centrífuga. Mientras tanto, someter a ultrasonidos el tubo usando un Sonificador Ultrasonidos de una frecuencia de 20 kHz y una amplitud de salida de 30% por 5 min para sintetizar la DNPs.
    Nota: Para sintetizar partículas uniformes con tamaños pequeños, la velocidad en que la solución del EGLP se goteó en el tubo tiene que ser lento, y debe evitarse la generación de burbujas.
  4. Purificar la DNPs lavando la solución anterior en tampón MES de 0,1 M (pH 6.0) 3 veces con un filtro de centrífugas (MWCO, 10 kDa). Centrifugar a 4 ° C y 1000 × g durante 3 minutos cada vez. Por último, debe permanecer aproximadamente 1 mL de nanopartículas MES resuelto.
    Nota: Este es un punto de parada aceptable en el procedimiento. Si no utiliza la conjugación de péptidos, las nanopartículas pueden ser purificadas por tampón PBS (pH 7.4), y la DNPs purificada pueden almacenarse a 4° C en la oscuridad.

3. Conjugación de péptidos a la DNPs

  1. Activación de Ester
    1. Agregar 0,4 mg de EDC (concentración final de 2 mM) a 1 mL de la DNPs.
    2. Añadir a 0,24 mg de NHS a la reacción (concentración final de 2 mM).
      Nota: Para la fácil adición de la cantidad correcta de EDC y NHS, una solución stock se puede preparar si los reactivos están disueltos y utilizados inmediatamente.
    3. Mezclar bien los componentes de la reacción y coloque la reacción en una coctelera; permita que la reacción de 30min - 1 h a temperatura ambiente en la oscuridad.
  2. Reacción de Amina
    1. Aumentar el tampón, pH 7.2-7.5 uso PBS (20 ×, pH 7,4).
    2. Añadir 0,5 mg del péptido plCSA-targeting (plCSA-BP, EDVKDINFDTKEKFLAGCLIVSFHEGKC) a la solución de reacción.
      Nota: Antes además, disolver los péptidos en acetonitrilo 20%. Si no son absorbibles péptidos, sonicación en un sonicador de baño puede útil.
    3. Mezcle bien la solución y luego colocar en una coctelera; permitir la reacción proceder a 4 ° C durante la noche en la oscuridad.
    4. Coloque la solución de conjugado en las bolsas de diálisis (MWCO, 3.500 Da) a dializarse y purificar la DNPs plCSA con tampón PBS (pH 7.4) a temperatura ambiente por 24 h en la oscuridad.
      Nota: Alternativamente, purificación puede realizarse como en el paso 2.4 para obtener plCSA-DNPs.
    5. Para las aplicaciones de la cultura de célula, filtrar la solución reconstituida a través de un filtro de jeringa estéril de 0,22 μm para eliminar posibles precipitados.

4. Caracterización de lípidos objetivo plCSA-nanopartículas de polímero

  1. Medición de las dimensiones de nanopartículas hidrodinámico con dispersión ligera dinámica (DLS)
    1. Nanopartículas diluidas con agua ultrapura (50-fold dilución). Carga de 500 μl de la muestra en una cubeta siguiendo las instrucciones del instrumento potencial DLS o zeta.
      Nota: Potencial Zeta y cubetas DLS pueden diferenciarse en base a las especificaciones del instrumento.
    2. Una vez finalizada la medición, registre el diámetro de la partícula, índice de polidispersidad (PDI) y potencial zeta. Medio los resultados de 4 repitieron lecturas y calcular la desviación estándar.
  2. Microscopía electrónica de transmisión (TEM)
    Nota: Se observó la morfología de las nanopartículas por TEM con el método de tinción negativa. 24
    1. Nanopartículas diluidas con agua ultrapura (400-fold dilución). Añadir 20 μl de la muestra en una cuadrícula TEM y dejar para reposar 5 minutos.
    2. Añada 100 μl de ácido fosfotúngstico al 2% (w/v) y dejar para reposar 2 minutos mecha la gota.
    3. Secar la rejilla TEM a temperatura ambiente.
    4. Ajustar la tensión de aceleración de TEM a 80 kV y ampliar la imagen a × 100.000 para visualizar las nanopartículas.
  3. Determinación de la eficiencia de encapsulación (EE) y LE
    1. Generación de la curva estándar. Disolver DOX en agua ultrapura para preparar soluciones DOX de cinco diferentes concentraciones: 1 μg/mL, 5 μg/mL, 10 μg/mL, 50 μg/mL y 100 μg/mL. Medir la absorción de las soluciones DOX a 480 nm con un espectrómetro de UV-VIS. Generar una curva estándar basada en las concentraciones de DOX.
    2. Diluir 25 μl de nanopartículas con 500 μl de agua ultrapura. Medir la absorción a 480 nm con un espectrómetro de UV-VIS. Calcular las concentraciones de la droga por la curva estándar.
    3. Calcular LE utilizando la siguiente ecuación:
      LE = ((cantidad de droga en nanopartículas) / (peso total de materiales)) × 100%.
    4. Calcular el EE mediante la siguiente ecuación:
      EE = ((cantidad de droga en nanopartículas) / (cantidad de agregado drogas)) × 100%.
  4. Medición de la eficiencia verbal usando el análisis de (BCA) ácido bicinchoninic 25 , 26 , 27
    1. Pipetear 25 μl de soluciones de péptido estándar (tabla 1) o plCSA-DNPs en pocillos de microplacas en duplicado. Añadir 200 μL de reactivo de trabajo a cada pocillo y mezclar la placa bien en una coctelera de placa por 30 s.
    2. Cubra la placa e incubar a 37 ° C durante 30 minutos.
    3. Medir la absorbancia a 562 nm en un lector de placas. Utilice la curva estándar generada para calcular las concentraciones de plCSA de plCSA-DNPs.
    4. Calcular la eficiencia verbal utilizando la siguiente ecuación:
      Eficiencia verbal = ((cantidad de péptido en nanopartículas) / (cantidad de añadido péptido)) × 100%.
FrascoVolumen de diluyente (μL)Volumen y fuente de péptidos (μL)Concentración final del péptido (μg/mL)
A0300 de Stock1000
B250frasco una dilución de 250500
C250250 de dilución del vial B250
D250250 de dilución frasco C125
E300200 de dilución frasco D50
F250250 de dilución frasco E25
G400100 de dilución frasco F5
H50000

Tabla 1. Preparación de péptidos estándar

5. fluorescencia microscopía evaluación de la absorción de nanopartículas plCSA dirigida en células de coriocarcinoma (JEG3)

  1. Semilla de células en placas de 12 bien estériles a 1.0 × 104 células/pozo con completo DMEM/F12 (cDMEM/F12, que contiene 1% penicilina/estreptomicina y 10% suero bovino fetal (FBS)). Permitir a las células a crecer hasta 60% de confluencia a 37 ° C y 5% de CO2 en condiciones húmedas.
  2. Quitar los medios de comunicación y agregar 1 mL de medio fresco frío con un contenido bajo del suero (5% SBF) y DNPs o plCSA-DNPs (5 μg de equivalentes DOX).
  3. Incubar la mezcla de células y nanopartículas a 4 ° C durante 1 hora.
  4. Después de la incubación, retirar los medios de comunicación y lavar las células 3 veces con PBS. Luego, añadir 1 mL de cDMEM fresco/F12 e Incube las células a 37 ° C durante 30 minutos.
  5. Retire el cDMEM/F12 y lavar las células 3 veces con PBS.
  6. Añadir 2 mL de frío 4% paraformaldehido (PFA) e incubar a temperatura ambiente durante 15 minutos reparar las células.
  7. Retire la PFA. Lavar una vez las células con 2 mL de PBS. Añadir 1 mL de PBS con DAPI (1 μg/mL) para núcleos coloración e incubar a temperatura ambiente durante 10 minutos.
  8. Aspire el PBS y lavar las células 3 veces con PBS.
  9. Añadir medio de montaje y la imagen de la fluorescencia con una microscopía de fluorescencia, utilizando los canales verdes y azules para visualizar los DOX y núcleos, respectivamente.

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Resultados

En este protocolo, PLGA, DSPE-PEG-COOH y soja lecitina son un polímero representativo, lípido-PEG-COOH conjugado y lípidos, respectivamente. La síntesis de nanopartículas a través de un solo paso método de sonicación polímero lipídico plCSA dirigida y una técnica EDC/NHS se ilustra en la figura 1. En primer lugar, bajo condiciones de sonicación, lecitina de soja, PLGA y DSPE-PEG-COOH uno mismo-montar al core-shell de forma estructurada DNPs. El núcle...

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Discusión

Este protocolo proporciona un método eficiente y reproducible para la síntesis de nanopartículas de polímero lipídico plCSA-BP-conjugados. El método de sonicación solo paso para la preparación de nanopartículas de polímero lipídico es rápido, reproducible y diferente del típico nanoprecipitation métodos que implican calentamiento, Vortex o evaporación. Por lo tanto, el método desarrollado reduce significativamente el tiempo de síntesis. Además, la EDC/NHS bioconjugate utilizado en este protocolo es una técnica comúnmente...

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Divulgaciones

X.F. y B.Z. son los inventores de la patente PCT/CN2017/108646 y 201710906587.6 enviado por SIAT que cubre un método de síntesis de nanopartículas dirigidas plCSA y aplicación. No hay posibles conflictos de interés fueron revelados por otros autores.

Agradecimientos

Este trabajo fue apoyado por subvenciones de la nacional clave de investigación y programa de desarrollo de China (2016YFC1000402), la Fundación Nacional de Ciencias naturales (81571445 y 81771617) y la Fundación Ciencias naturales de la provincia de Guangdong (2016A030313178) a X.F. y el fondo de investigación básica de Shenzhen (JCYJ20170413165233512) a X.F.

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Péptido plCSAShanghai GL Biochem573518para la síntesis de péptidos
Absoluto de etanolSinopharm 10009218 químicopara la síntesis de nanopartículas
Lecitina de sojaAvanti Polar Lipids441601para la síntesis de nanopartículas
DSPE-PEG-COOHAvanti Polar Lipids880125para la síntesis
de nanopartículasDoxorrubicinaJKComático113424para la síntesis de nanopartículas
AcetonitriloShanghai Lingfeng1008621para la síntesis de nanopartículas
PLGASigma-Aldrich719897para la síntesis de nanopartículas
Procesador ultrasónicoSonicsVCX130para la síntesis de nanopartículas
Filtro centrífugo (MWCO 10 kDa)MilliporeUFC801024para la
centrífugaSigma3-18KSpara la purificación de nanopartículas
Ácido 2-[morfolino]etanosulfónico (MES)Sigma-AldrichM3671para la conjugación de péptidos
Clorhidrato de carbodiimida (EDC) 1-etil-3-(3-dimetilaminopropilo) (EDC)Sigma-Aldrich3450para la conjugación de péptidos
N-hidroxisuccinimida (NHS)Sigma-Aldrich56480para la conjugación de péptidos
Bolsas de diálisisSpectrum132592Tpara la purificación de nanopartículas
PBSHycloneSH30028.01para cultivo celular
Tubos de centrífuga de 10 mL, polipropilenoAladdinS-025para síntesis de nanopartículas
Tubos de centrífuga de 15 mL, polipropilenoCorning430791para diversas aplicaciones
0,22 y mu; M filtro de jeringa estérilMilliporeSLGV033RBpara la purificación de nanopartículas
Jeringa de 1 ml, polipropilenoBD328421para la síntesis de nanopartículas
Malvern ZetasizerMalvernNano ZSpara analizador de tamaño de partícula
Ácidopara TEM
Rejilla TEMEMCNBZ10024apara TEM
espectrómetro UV-VISLeageneDZ0035para transmisión TEM

microscopio electrónico		JEOLJEM-100CXIIpara analizador de tamaño de partícula
reactivo BCA AThermo Fisher Scientific23228para ensayo de BCA
reactivo BCA BThermo Fisher Scientific23224para ensayo de BCA
placas de 96 pocillosCorning3599para BCA
lector de placasde ensayo Thermo Fisher ScientificMultiskan™ Pruebas GOfor BCA
placas de 12 pocillosCorning3513para cultivo celular
JEG3de la Academia China de CienciasTCHu195Placenta humana
DMEM/F12HycloneSH30272.01rojo de fenol
Suero fetal bovino (FBS)GIBCO10100para cultivo celular
Penicilina/estreptomicinaGIBCO15070063para cultivo celular
Microscopio de fluorescenciaOLYMPUSCKK53para la absorción celular
ParaformaldehídoShanghai Lingfeng1372021para la absorción celular
DAPISangon Biotech A606584para la absorción celular
Medio de montajeLifeP36961para la absorción celular
purificación de nanopartículas fosfotúngstico Banco de células sin

Referencias

  1. Davis, M. E., Shin, D. M. Nanoparticle therapeutics: an emerging treatment modality for cancer. Nature Reviews Drug Discovery. 7 (9), 771(2008).
  2. Nie, S., Xing, Y., Kim, G. J., Simons, J. W. Nanotechnology applications in cancer. Annual Review of Biomedical Engineering. 9, 257-288 (2007).
  3. Jabir, N. R., et al. An overview on the current status of cancer nanomedicines. Current Medical Research and Opinion. 34 (5), 911-921 (2018).
  4. Pillai, G. Nanomedicines for Cancer Therapy: An Update of FDA Approved and Those under Various Stages of Development. SOJ Pharmacy & Pharmaceutical Sciences. 1 (2), 1-13 (2014).
  5. Marta, T., Luca, S., Serena, M., Luisa, F., Fabio, C. What is the role of nanotechnology in diagnosis and treatment of metastatic breast cancer? Promising Scenarios for the Near Future. Journal of Nanomaterials. 2016, e5436458(2016).
  6. Dasari, S., Tchounwou, P. B. Cisplatin in cancer therapy: molecular mechanisms of action. European journal of Pharmacology. 740, 364-378 (2014).
  7. Brigger, I., Dubernet, C., Couvreur, P. Nanoparticles in cancer therapy and diagnosis. Advanced Drug Delivery Reviews. 64, 24-36 (2012).
  8. Steichen, S. D., Caldorera-Moore, M., Peppas, N. A. A review of current nanoparticle and targeting moieties for the delivery of cancer therapeutics. European Journal of Pharmaceutical Sciences. 48 (3), 416-427 (2013).
  9. Salanti, A., et al. Targeting human cancer by a glycosaminoglycan binding malaria protein. Cancer Cell. 28 (4), 500-514 (2015).
  10. Seiler, R., et al. An Oncofetal Glycosaminoglycan Modification Provides Therapeutic Access to Cisplatin-resistant Bladder Cancer. European Urology. 72 (1), 142-150 (2017).
  11. Zhang, B., et al. Targeted delivery of doxorubicin by CSA-binding nanoparticles for choriocarcinoma treatment. Drug Delivery. 25 (1), 461-471 (2018).
  12. Zhang, B., et al. Placenta-specific drug delivery by trophoblast-targeted nanoparticles in mice. Theranostics. 26 (2), 130-137 (2018).
  13. Zhang, L., et al. Self-assembled lipid--polymer hybrid nanoparticles: a robust drug delivery platform. ACS Nano. 2 (8), 1696-1702 (2008).
  14. Zheng, M., et al. Single-step assembly of DOX/ICG loaded lipid-polymer nanoparticles for highly effective chemo-photothermal combination therapy. ACS. 7 (3), 2056-2067 (2013).
  15. Fang, R. H., Aryal, S., Hu, C. -M. J., Zhang, L. Quick synthesis of lipid− polymer hybrid nanoparticles with low polydispersity using a single-step sonication method. Langmuir. 26 (22), 16958-16962 (2010).
  16. Gu, L., et al. Folate-modified, indocyanine green-loaded lipid-polymer hybrid nanoparticles for targeted delivery of cisplatin. Journal of Biomaterials Science, Polymer Edition. 28 (7), 690-702 (2017).
  17. Mandal, B., Mittal, N. K., Balabathula, P., Thoma, L. A., Wood, G. C. Development and in vitro evaluation of core-shell type lipid-polymer hybrid nanoparticles for the delivery of erlotinib in non-small cell lung cancer. European Journal of Pharmaceutical Sciences. 81, 162-171 (2016).
  18. Shi, T., et al. Enhanced legumain-recognition and NIR controlled released of cisplatin-indocyanine nanosphere against gastric carcinoma. European Journal of Pharmacology. 794, 184-192 (2017).
  19. Grabarek, Z., Gergely, J. Zero-length crosslinking procedure with the use of active esters. Analytical Biochemistry. 185 (1), 131-135 (1990).
  20. Hadjipanayis, C. G., et al. EGFRvIII Antibody-Conjugated Iron Oxide Nanoparticles for Magnetic Resonance Imaging-Guided Convection-Enhanced Delivery and Targeted Therapy of Glioblastoma. Cancer Research. 70 (15), 6303-6312 (2010).
  21. Sadhukha, T., Wiedmann, T. S., Panyam, J. Inhalable magnetic nanoparticles for targeted hyperthermia in lung cancer therapy. Biomaterials. 34 (21), 5163-5171 (2013).
  22. Jennings, M., Nicknish, J. Localization of a site of intermolecular cross-linking in human red blood cell band 3 protein. Journal of Biological Chemistry. 260 (9), 5472-5479 (1985).
  23. Staros, J. V. N-hydroxysulfosuccinimide active esters: bis(N-hydroxysulfosuccinimide) esters of two dicarboxylic acids are hydrophilic, membrane-impermeant, protein cross-linkers. Biochemistry. 21 (17), 3950-3955 (1982).
  24. Valencia, P. M., et al. Single-step assembly of homogenous lipid− polymeric and lipid− quantum dot nanoparticles enabled by microfluidic rapid mixing. ACS. 4 (3), 1671-1679 (2010).
  25. Altintas, I., et al. Nanobody-albumin nanoparticles (NANAPs) for the delivery of a multikinase inhibitor 17864 to EGFR overexpressing tumor cells. Journal of Controlled Release. 165 (2), 110-118 (2013).
  26. Maya, S., et al. Cetuximab conjugated O-carboxymethyl chitosan nanoparticles for targeting EGFR overexpressing cancer cells. Carbohydrate Polymers. 93 (2), 661-669 (2013).
  27. Deepagan, V. G., et al. In vitro targeted imaging and delivery of camptothecin using cetuximab-conjugated multifunctional PLGA-ZnS nanoparticles. Nanomedicine. 7 (4), 507-519 (2012).
  28. Totaro, K. A., et al. Systematic investigation of EDC/sNHS-mediated bioconjugation reactions for carboxylated peptide substrates. Bioconjugate Chemistry. 27 (4), 994-1004 (2016).
  29. Sinz, A. Chemical cross-linking and mass spectrometry to map three-dimensional protein structures and protein-protein interactions. Mass Spectrometry Reviews. 25 (4), 663-682 (2006).
  30. Zhang, B., et al. LDLR-mediated peptide-22-conjugated nanoparticles for dual-targeting therapy of brain glioma. Biomaterials. 34 (36), 9171-9182 (2013).
  31. Koren, E., Apte, A., Sawant, R. R., Grunwald, J., Torchilin, V. P. Cell-penetrating TAT peptide in drug delivery systems: proteolytic stability requirements. Drug Delivery. 18 (5), 377-384 (2011).
  32. Chu, Y., et al. Topical ocular delivery to laser-induced choroidal neovascularization by dual internalizing RGD and TAT peptide-modified nanoparticles. International Journal of Nanomedicine. 12, 1353-1368 (2017).

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Reimpresiones y permisos

Etiquetas

Conjugaci n de p ptidoscarga de doxorrubicinaensayo de captaci n celularmicroscop a de fluorescenciamedici n del potencial zetaim genes de TEMs ntesis de nanopart culas de PLGAreacci n de activaci n de steres
Síntesis y caracterización de placenta condroitina sulfato (plCSA) - Targeting lípido - nanopartículas de polímero
Contáctenos
Recomendar a la biblioteca

Privacidad

Condiciones de uso

Políticas

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Todos los derechos reservados.