Síntesis y caracterización de placenta condroitina sulfato (plCSA) - Targeting lípido - nanopartículas de polímero

Resumen

Aquí, presentamos un protocolo para la síntesis del péptido de Unión placentaria condroitin sulfato A (plCSA-BP)-conjugados polímero lipídico nanopartículas via solo paso sonicación y bioconjugate técnicas. Estas partículas constituyen una novedosa herramienta para la entrega específica de la terapéutica para tumores más humanos y trofoblastos placentarios para tratar cánceres y trastornos placentarios.

Resumen

Un método terapéutico eficaz cáncer reduce y elimina tumores con mínima toxicidad sistémica. Nanopartículas activamente dirigida a ofrecen un enfoque prometedor para la terapia del cáncer. El sulfato de condroitina placentaria glycosaminoglycan (plCSA) se expresa en una amplia gama de las células cancerosas y trofoblastos placentarios y palúdica proteína que var2csa puede atar específicamente a plCSA. Un péptido de Unión placentaria divulgado el sulfato de condroitina A (plCSA-BP), derivado de proteína de la malaria VAR2CSA, puede enlazar también específicamente plCSA en las células cancerosas y trofoblastos placentarios. Por lo tanto, las nanopartículas conjugadas de BP plCSA podrían utilizarse como una herramienta para el suministro de medicamentos dirigidos a los cánceres humanos y trofoblastos placentarios. En este protocolo, se describe un método para sintetizar lípidos-polímero conjugado de BP plCSA nanopartículas cargadas con doxorrubicina (plCSA-DNPs); el método consiste en una técnica de sonicación solo paso y bioconjugate. Además, se describen varios métodos para la caracterización de plCSA-DNPs, incluyendo la determinación de sus propiedades fisicoquímicas y la absorción celular de las células de coriocarcinoma placentario (JEG3).

Introducción

Un método terapéutico eficaz cáncer reduce y elimina tumores con mínima toxicidad sistémica. Por lo tanto, selectiva tumor targeting es la clave para explorar métodos terapéuticos exitosos. Nanopartículas ofrecen una oportunidad prometedora para tratamiento del cáncer, y conjuntos moleculares con diferentes grupos funcionales serán mejorar la eficacia de los medicamentos y reducir los efectos secundarios asociados^1,2. Por otra parte, nanopartículas sistemas utilizan principalmente pasiva y activa dirigida a para alcanzar el objetivo tumores³.

Orientación pasi....

Protocolo

1. preparación de soluciones Stock

1. Preparar una solución acuosa de etanol 4% diluyendo 4 mL de etanol absoluto con 100 mL de agua ultrapura. La solución a 4 ° C.
   Nota: Agua ultrapura se define como agua sin contaminantes tales como bacterias, partículas, iones o nucleasas. Agua ultrapura fue obtenida de un sistema de purificación de agua con una resistencia de blanco de hasta 18.2 mΩ·cm, que significa baja contaminación aniónica.
2. Preparar un 1 mg/mL solución stock de la lecitina de soja mediante la disolución de 20 mg de lecitina de soja en 20 mL de la solución acuosa de etanol al 4%. Almacenar la solución madre de lecitina de soja a 4 ° C.
....

Resultados

En este protocolo, PLGA, DSPE-PEG-COOH y soja lecitina son un polímero representativo, lípido-PEG-COOH conjugado y lípidos, respectivamente. La síntesis de nanopartículas a través de un solo paso método de sonicación polímero lipídico plCSA dirigida y una técnica EDC/NHS se ilustra en la figura 1. En primer lugar, bajo condiciones de sonicación, lecitina de soja, PLGA y DSPE-PEG-COOH uno mismo-montar al core-shell de forma estructurada DNPs. El núcle.......

Discusión

Este protocolo proporciona un método eficiente y reproducible para la síntesis de nanopartículas de polímero lipídico plCSA-BP-conjugados. El método de sonicación solo paso para la preparación de nanopartículas de polímero lipídico es rápido, reproducible y diferente del típico nanoprecipitation métodos que implican calentamiento, Vortex o evaporación. Por lo tanto, el método desarrollado reduce significativamente el tiempo de síntesis. Además, la EDC/NHS bioconjugate utilizado en este protocolo es una técnica comúnmente.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Péptido plCSA	Shanghai GL Biochem	573518	para la síntesis de péptidos
Absoluto de etanol	Sinopharm 10009218 químico		para la síntesis de nanopartículas
Lecitina de soja	Avanti Polar Lipids	441601	para la síntesis de nanopartículas
DSPE-PEG-COOH	Avanti Polar Lipids	880125	para la síntesis
de nanopartículasDoxorrubicina	JKComático	113424	para la síntesis de nanopartículas
Acetonitrilo	Shanghai Lingfeng	1008621	para la síntesis de nanopartículas
PLGA	Sigma-Aldrich	719897	para la síntesis de nanopartículas
Procesador ultrasónico	Sonics	VCX130	para la síntesis de nanopartículas
Filtro centrífugo (MWCO 10 kDa)	Millipore	UFC801024	para la
centrífuga	Sigma	3-18KS	para la purificación de nanopartículas
Ácido 2-[morfolino]etanosulfónico (MES)	Sigma-Aldrich	M3671	para la conjugación de péptidos
Clorhidrato de carbodiimida (EDC) 1-etil-3-(3-dimetilaminopropilo) (EDC)	Sigma-Aldrich	3450	para la conjugación de péptidos
N-hidroxisuccinimida (NHS)	Sigma-Aldrich	56480	para la conjugación de péptidos
Bolsas de diálisis	Spectrum	132592T	para la purificación de nanopartículas
PBS	Hyclone	SH30028.01	para cultivo celular
Tubos de centrífuga de 10 mL, polipropileno	Aladdin	S-025	para síntesis de nanopartículas
Tubos de centrífuga de 15 mL, polipropileno	Corning	430791	para diversas aplicaciones
0,22 y mu; M filtro de jeringa estéril	Millipore	SLGV033RB	para la purificación de nanopartículas
Jeringa de 1 ml, polipropileno	BD	328421	para la síntesis de nanopartículas
Malvern Zetasizer	Malvern	Nano ZS	para analizador de tamaño de partícula
Ácido			para TEM
Rejilla TEM	EMCN	BZ10024a	para TEM
espectrómetro UV-VIS	Leagene	DZ0035	para transmisión TEM
microscopio electrónico	JEOL	JEM-100CXII	para analizador de tamaño de partícula
reactivo BCA A	Thermo Fisher Scientific	23228	para ensayo de BCA
reactivo BCA B	Thermo Fisher Scientific	23224	para ensayo de BCA
placas de 96 pocillos	Corning	3599	para BCA
lector de placas	de ensayo Thermo Fisher Scientific	Multiskan™ Pruebas GO	for BCA
placas de 12 pocillos	Corning	3513	para cultivo celular
JEG3	de la Academia China de Ciencias	TCHu195	Placenta humana
DMEM/F12	Hyclone	SH30272.01	rojo de fenol
Suero fetal bovino (FBS)	GIBCO	10100	para cultivo celular
Penicilina/estreptomicina	GIBCO	15070063	para cultivo celular
Microscopio de fluorescencia	OLYMPUS	CKK53	para la absorción celular
Paraformaldehído	Shanghai Lingfeng	1372021	para la absorción celular
DAPI	Sangon Biotech A606584		para la absorción celular
Medio de montaje	Life	P36961	para la absorción celular

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