Summary
Celle-baserede assay er en meget udbredt metode til at påvise serum anti-aquaporin-4 immunoglobulin G. Denne metode kan anvendes til klinisk diagnose og videnskabelige undersøgelser af neuromyelitis optisk spektrum forstyrrelser.
Abstract
Anti-aquaporin-4 (AQP4) immunoglobulin G (IgG) er den kerne diagnostiske biomarkør for neuromyelitis optica spektrum forstyrrelser (NMOSD). Celle-baserede analysen (CBA) er en meget anvendt metode til at opdage anti-AQP4 IgG i humant serum med høj følsomhed og specificitet. Kort, serum anti-AQP4 IgG er fanget af AQP4-transfekteret celle, der er fastsat på biochip derefter fundet af en fluorescein-mærket sekundær antistof. Fluorescens mikroskopi er udnyttet til at visualisere fluorescens, og intensiteten af Fluorescens er evalueret af mindst to erfarne klinikere. En endelig diagnose af NMOSD kan gøres baseret på en kombination af anti-AQP4 IgG påvisning resultater, kliniske manifestationer og neuroradiological resultater. Ifølge tidligere undersøgelser, CBA er mere følsom og specifik end andre anti-AQP4 IgG påvisningsmetoder, og det kan anvendes til både klinisk diagnose og undersøgelser af NMOSD. Metoden har begrænsninger; for eksempel, mangler en international skala til at evaluere serum anti-AQP4 IgG titers stadig. Her, er en detaljeret protokol for humant serum anti-AQP4 IgG påvisning ved hjælp af CBA beskrevet.
Introduction
Serum AQP4 IgG er en core diagnostiske biomarkør for neuromyelitis optica spektrum forstyrrelser (NMOSD)1. Celle-baserede analysen (CBA) er en udbredt anti-AQP4 IgG påvisningsmetode med høj følsomhed og specificitet. Her, er en detaljeret protokol for CBA indført.
AQP4, en vand kanal protein, har seks membran-spænder enheder og to spiralformet domæner omkring en vandig pore2. Anti-AQP4 IgG er involveret i patogenesen af NMOSD gennem binding til sit mål AQP4, som er hovedsageligt placeret på endfeet af astrocytter3. Det har vist sig at anti-AQP4 IgG er positiv i cirka to tredjedele af NMOSD patienter4. I de seneste internationale diagnostiske kriterier for NMOSD, er anti-AQP4 IgG betragtes som et grundlæggende diagnostisk biomarkør5. I denne forbindelse, det er afgørende at etablere en pålidelig protokol for at opdage humant serum anti-AQP4 IgG og lette kliniske diagnose af NMOSD.
I øjeblikket er forskellige anti-AQP4 IgG påvisningsmetoderne tilgængelige, såsom CBA, væv-baserede assay, enzym-forbundet immunosorbent assay og flow flowcytometri6,7. CBA beskæftiger EU90 celler, som er transfekteret med menneskelige AQP4, til at fange anti-AQP4 IgG. Erobrede anti-AQP4 IgG er opdaget af fluorescerende sekundære antistoffer og efterfølgende visualiseret ved mikroskopi. Akkumulere beviser har vist, at CBA er mere følsom og specifik end andre anti-AQP4 IgG påvisning metoder6,7. Ifølge en meta-analyse, følsomhed og specificitet af CBA viste sig at være 76% og 99%, hvilket var højere end væv-baserede og enzym-forbundet immunosorbent undersøgelser vedrørende6. Derudover blev en multicenter sammenligning af diagnostiske assays af anti-AQP4 IgG gennemført7. Ialt 193 undersøgelse emner fra 15 europæiske diagnostiske Centre var tilmeldt7. Fire forskellige metoder blev udnyttet til at opdage serum anti-AQP4 IgG7. Det blev påvist, at CBA var mere følsom og specifik end andre metoder7. Som AQP4 er udtrykt som to store isoformer (AQP4-M1 og AQP4-M23), transfekteret anti-AQP4 IgG fange celle med enten AQP4-M1 eller AQP4-M23. Hvilken type af fange celle er imidlertid bedre resterne kontroversielle. En undersøgelse har støttet AQP4-M1 baseret CBA8, mens andre har anført, at AQP4-M23 baseret CBA er bedre7,9,10. Dog kan AQP4-M23-baserede CBA give falsk positive resultater på grund af uspecifik IgG bindende8. Jarius al.. 11 rapporterede, at der var ingen signifikant forskel i anti-AQP4 IgG opdagelse takster mellem AQP4-M1 og AQP4-M23-baseret CBAs.
I sammendrag, serum anti-AQP4 IgG er en core biomarkør for NMOSD. CBA har højere specificitet og sensitivitet end andre anti-AQP4 IgG detektionsmetoder. Det er fortsat kontroversielt, om AQP4-M1 - eller AQP4-M23-baserede CBA er bedre. I denne artikel, er en detaljeret protokol for AQP4-M1-baserede CBA beskrevet, som kan anvendes til klinisk diagnose og undersøgelser af NMOSD.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Denne procedure blev vedtaget af den etiske komité i det første Hospital i Jilin Universitet og blev udført på cirka 1.500 emner.
1. patienten tilmelding og blod prøve indsamling
- Anvende laboratorium påvisning af serum anti-AQP4 IgG til klinikken patienter med chef klager og symptomer nedenfor. Udføre fysiske undersøgelser så godt.
Synsnervebetændelse: patienter lider med visuelle underskud, såsom tab af visuelle felter og reduktion af synsskarphed.
Akut myelitis: patienterne kan præsentere med lammelse, sensoriske underskud og autonom dysfunktion.
Område postrema syndrom: patienter kan have symptomer på uforklarlig hikke, kvalme eller opkastning.
Akut hjernestammen syndrom: hjernestammen læsioner kan resultere i forskellige symptomer og fysiske tegn afhængigt af placeringen af læsioner.
Symptomatisk narkolepsi eller akut diencephalic klinisk syndrom med NMOSD-typisk diencephalic Mr-læsioner.
Symptomatisk cerebral syndrom med NMOSD-typisk hjernelæsioner.
Bemærk: Ifølge international konsensus diagnostiske kriterier for NMOSD5, en diagnose af NMOSD kan foretages, hvis patienten er serum anti-AQP4 IgG-positive og har mindst et af de centrale kliniske karakteristika nævnt ovenfor. Dog anbefaler vi ikke, afprøvning af anti-AQP4 IgG hos patienter med synsnervebetændelse kun. -
Blod prøve indsamling
Bemærk: patienter behøver ikke at være fastende.- Træk 2-3 mL af venøse blod i en 4 mL vakuum blod collection tube.
- Tillad serum til at størkne i 30 min. ved stuetemperatur (RT).
Bemærk: Langvarig koagulation kan øge serumniveauer som følge af lækage fra blodplader. - Centrifuger på 2100 x g i 5 min. Overfør omhyggeligt serum til en ny tube.
- Analysere serum straks eller delprøve og opbevares ved -20 eller-80 ° C.
Bemærk: Opbevaring ved-20 ° C er for opbevaring af måneder, mens-80 ° C er for opbevaring af år.
2. anti-AQP4 påvisning af antistof
Forsigtighed: Patientprøver og brugte kit reagenserne bør betragtes infektiøs materialer. Natrium indeholder-indeholdende reagenser i sættet er giftige. Et flowdiagram af protokollen er fastsat i figur 1.
-
Forberedelse
- Bringe kit til RT før brug.
Bemærk: Opbevar kit ved 2-8 ° C. - Forbered mindst 200 mL PBS vaskebuffer indeholdende 0,2% Tween 20. Hæld 100 mL af wash buffer i et 500 mL bægerglas.
- Fortyndede serum prøver 10 x med wash buffer. Forberede de positive og negative kontroller efter anvisninger af forhandleren.
- Bringe kit til RT før brug.
-
Prøven inkubation
- Tilføje 30 µL af den forud fortyndede prøver, positiv kontrol eller negativ kontrol til felterne reaktion af reagens skuffe (figur 2).
Bemærk: Undgå luftbobler. - Fjern den beskyttende dække på biochip dias.
Bemærk: Rør ikke biochips for at undgå detachment og forurening af faste celler. Hold dias side-by-side før du fjerner dækslet. - Anvende biochip dias til reagens skuffe (figur 2). Starte en 30 min inkubation ved RT.
Bemærk: Hver prøve skal være en enkelt dråbe tilsluttet de tilsvarende biochip uden blanding med andre dråber. - Forsigtigt skyl biochip diaset én gang med wash buffer. Fordyb biochip dias i 500 mL bægerglas fyldt med 100 mL af wash buffer i mindst 5 min. sted i bægerglasset på en shaker hvis det er muligt.
- Tegne biochip dias fra wash buffer. Forsigtigt tørre væk de resterende vaskebuffer uden for felterne reaktion med et stykke køkkenrulle. Udsætte biochip dias i fri luft for 1-2 min til at fordampe de resterende vaskebuffer på feltet reaktion.
Bemærk: Tør ikke ud af felterne reaktion. Rør ikke biochips med køkkenrulle.
- Tilføje 30 µL af den forud fortyndede prøver, positiv kontrol eller negativ kontrol til felterne reaktion af reagens skuffe (figur 2).
-
Sekundær antistof inkubation
- Forberede sekundær antistof løsning efter anvisninger af forhandleren.
- Tilføje 25 µL af fluorescerende sekundær antistof til felterne reaktion af en ren reagens skuffe.
- Gælde reagens skuffe fyldt med sekundær antistof biochip dias. Inkuber i 30 min. ved RT.
-
Montering
- Hæld den anvendte vaskebuffer og tilsættes 100 mL frisk vaskebuffer i bægerglasset. Gentag vask, som beskrevet i trin 2.2.4 og 2.2.5.
- Forsigtigt tilføje indlejring medium til felterne reaktion på et biochip dias (en dråbe pr. reaktion felt). Forsegle biochip dias med et stykke af dækslet glas. Undgå luftbobler.
-
Registrering af fluorescens
- Tænde lysstofrør mikroskop og før varme i 15 min. Vælg en 488 nm filter.
- Åbn fotografi software. Tage billeder fra både transfekteret og untransfected områder af alle reaktion felter med forskellige forstørrelser. Først, tage et billede med 4 x forstørrelse giver overblik, så tage flere billeder med 10 x og 20 x forstørrelse.
Bemærk: Den detaljerede protokollen er vist i tabel 1. Fortolkning af resultaterne er beskrevet i afsnittet repræsentative resultater.
3. diagnose af patienter
- Hvis patienten er serum anti-AQP4 IgG-positive og viser mindst én kerne kliniske karakteristisk for NMOSD (Se diskussion sektion), diagnosticere patienten med NMSOD5. Men, hvis patienten er anti-AQP4 IgG-negative, en diagnose af NMOSD kan ikke udelukkes.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Ved hjælp af den beskrevne procedure her, specifikke anti-AQP4 IgG serum kan detekteres. Under proceduren, blev forud fortyndede prøver, positiv kontrol og negativ kontrol føjet til felterne reaktion, som indeholder transfekteret og untransfected områder (figur 2). Fluorescens af den negative kontrol i et transfected område er primært angivet uspecifik bindingen af sekundær antistof mod de transfected celler på biochips (figur 3). Administrationsprocedurerne svag fluorescens var synlige (figur 3). Med hensyn til den positive kontrol, blev anti-AQP4 antistof tilføjet til feltet reaktion. Stærk fluorescens blev observeret i området transfected, der anførte den specifikke binding af anti-AQP4 IgG til AQP4-M1 i de transfected celler (figur 4). Fluorescens i den positive kontrol i et untransfected område viste antydninger af uspecifik binding af anti-AQP4 IgG til faste celler på biochips (figur 4). For 10 x fortyndede prøver, anti-AQP4 IgG-negativt serum viste en fluorescerende mønster svarende til den negative kontrol, mens de positivt serum viste et mønster svarende til den positive kontrol (figur 5). Intensiteten af fluorescens var forbundet med anti-AQP4 IgG titer. Eksempler på forskellig intensitet af Fluorescens er præsenteret i figur 5. Figur 5 A og 5B var fra anti-AQP4 IgG-negative prøver, mens figur 5C-H var fra anti-AQP4 IgG-positive prøver. Så længe heterogene og granulerede fluorescens dukkede op i transfekteret områder, prøven blev betragtet som anti-AQP4 IgG-positiv, uanset styrken af fluorescens. De diagnostiske kriterier for NMOSD, som er baseret på serum anti-AQP4 IgG, vil blive yderligere beskrevet i afsnittet diskussion.
I et par prøver, kun et lille antal celler var stærkt plettet i transfekteret områder, og det var svært at afgøre, hvorvidt serum er anti-AQP4 IgG-positive eller negative (figur 6). I dette tilfælde kan "sandsynlige positive" blive rapporteret. I sjældnere tilfælde var fluorescens af en prøve i transfekteret områder administrationsprocedurerne stærkere end i untransfected områder (figur 7). I dette tilfælde skal prøven betragtes som anti-AQP4 IgG-negative. Den høje intensitet af baggrunden fluorescens kan være uspecifikke. For at oprette en pålidelig rapport, bør alle fotografier vurderes blindt af mindst to klinikere. Klinikerne bør være uddannet inden vurderingen. I denne protokol, de var vist repræsentative fotografier af forskellige sample typer og blev informeret om, hvordan du kan evaluere resultaterne. Derefter evalueres de fotografier sammen med en erfaren kliniker. Endelig, de uddannede klinikere arbejdede uafhængigt. I en ideel situation, bør det altid være de samme klinikere, der evaluerer resultaterne.
Figur 1 : Flowdiagram af anti-AQP4 IgG detection protocol. AQP4-M1-transfekteret eller untransfected EU 90 celler er faste på biochips. Når du tilføjer serum til biochips, er anti-AQP4 IgG i serum fanget af de faste transfected celler. Derefter anvendes fluorescein-mærket sekundær antistof til påvisning af anti-AQP4 IgG. Fluorescens kan visualiseres ved mikroskopi med forskellige forstørrelser. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2 : Prøve inkubation. (A) Top view af reagens skuffe. Ethvert reagens skuffe indeholder fem individuelle reaktion felter. Positiv kontrol, prøver og negativ kontrol bør føjes til felterne separat reaktion. (B) Top view biochip dias. Hver biochip dias indeholder fem reaktion felter, som har to undersektioner. Den transfected underafdeling indeholder faste AQP4-M1-transfekteret celler, mens den untransfected underafdeling indeholder untransfected celler. (C) Front Se reagens skuffe og biochip dias. Reaktion felter på reagens skuffe og biochip dias er parret med hinanden. Prøven føjes til feltet reaktion på reagens skuffe bør forbindes til feltet reaktion på biochip dias. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3 : Repræsentative tal for negativ kontrol. (A) en oversigt over den transfected område for den negative kontrol er opnået ved 4 x forstørrelse mikroskopi. Administrationsprocedurerne svag fluorescens blev observeret i hele området. (B, C) Flere detaljer blev observeret i 10 x (B) og x (C) forstørrelse fotografier. Generelt, cellemembranen og plasma var lidt plettet, og cellekernen var unstained. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 4 : Repræsentative tal for den positive kontrols. (A, B) Transfekteret (A) og untransfected (B) områder af positiv kontrol er vist. Administrationsprocedurerne svag fluorescens blev observeret i untransfected områder, med angivelse af uspecifik binding af anti-AQP4 IgG til faste celler. Omvendt, heterogene stærk fluorescens blev observeret i transfekteret områder, der angiver specifikke binding af anti-AQP4 IgG til AQP4-M1 udtrykt på faste celler. (C-F) Flere oplysninger om transfekteret (C, E) og untransfected (D, F) områder overholdes med 10 x (C, D) eller 20 x (E, F) forstørrelse. Svage og endda fluorescens dukkede op i untransfected områder. En stor procentdel af celler i transfekteret områder viste imidlertid intens fluorescens. I plasma af stærkt farvede celler viste anti-AQP4 IgG glat og granulerede fluorescens. Cellekernen var unstained eller lidt plettet. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 5 : Repræsentative tal for anti-AQP4 antistof negative eller positive prøver. Prøver var 10 x fortyndet, og alle tal vist blev taget med en 10 x mål. (A, B) Negative fluorescens prøve: fluorescens var administrationsprocedurerne svag i begge (A) transfekteret og (B) untransfected områder. (C, D) Svag fluorescens udsnit: sammenlignet med untransfected områder (D), en lille mængde af celler (ca 25% til 50%) i transfekteret områder (C) viste mere intens fluorescens. (E, F) Moderat fluorescens prøve: i transfekteret områder (E), stærkt granulerede fluorescens blev observeret i en mellemlang antal celler (ca 50% til 75%). (G, H) Stærk fluorescens prøve: celler i untransfected områder (H) var svagt farvede. Dog i transfekteret områder (G), granular fluorescens med høj intensitet dukkede op i et stort antal celler (ca over 75%). Generelt, som titer af anti-AQP4 IgG steg, både fluorescens intensitet og procentdel af stærkt farvede celler forhøjet tilsvarende. Fluorescens af untransfected områder var altid administrationsprocedurerne svag. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 6 : Repræsentative tal for anti-AQP4 antistof "sandsynlige positive" prøver. (A, B) Ingen væsentlige forskelle i fluorescens mønstre blev observeret mellem transfekteret (A) og untransfected (B) områder på 4 x forstørrelse. (C-E) Med 10 x (C, D) eller 20 x (E, F) forstørrelse, et par celler i transfekteret områder (C, E) viste stærkt granulerede fluorescens. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 7 : Eksempel på atypisk anti-AQP4 IgG-negativ prøve. Både transfekteret (A) og untransfected (B) områder var administrationsprocedurerne farves. Fluorescens i transfekteret områder var dog stærkere end i untransfected områder. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
| Forstørrelse | Transfekteret område | Untransfected område |
| 4 x | 1 billede | 1 billede |
| 10 x | 4 billeder | 1 billede |
| 20 x | 5 billeder | 1 billede |
Tabel 1: Fluorescens mikroskopi. Det anbefales at bruge 4 x, 10 x og 20 x mål for billeddannelse af transfekteret og untransfected områder.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Vi har beskrevet et bredt tilgængelige metode til påvisning af anti-AQP4 IgG i humant serum. Anti-AQP4 IgG er nært beslægtet med NMOSD, og om oprettelse af en pålidelig anti-AQP4 IgG påvisningsmetode er afgørende for den kliniske diagnose af NMOSD. Første er anti-AQP4 IgG specifikke for NMOSD. Multipel sklerose er også en immun-medieret sygdom i centralnervesystemet og deler mange ligheder med NMOSD12. Anti-AQP4 IgG er imidlertid kun positive i NMOSD13. Andet, anti-AQP4 IgG er udbredt blandt NMOSD patienter. Cirka to tredjedele af NMOSD patienter er serum anti-AQP4 IgG-positive4. For det tredje IgG de seneste diagnose kriterier for NMOSD er baseret på serum anti-AQP4 test5. Tilsammen, kunne serum anti-AQP4 IgG detektion lette den kliniske diagnose af NMOSD.
Blandt forskellige anti-AQP4 IgG påvisningsmetoder, er CBA almindeligt brugt til klinisk diagnose på grund af sin høje følsomhed og specificitet6,7. Selvom CBA er en hurtig og enkel metode, behandles nogle nøglepunkter. Første skal være eksperimentatorer forsigtig, når du arbejder med biochips, som AQP4-M1-transfekteret og untransfected celler er faste på biochips. Under hele proceduren, bør biochips ikke rørt ved håndkraft eller tørret ud. Derudover dias med biochips skal håndteres forsigtigt, ellers faste cellerne på biochips kan falde ned eller blive forurenet, hvilket kan resultere i fluorescens defekte zoner eller en høj fluorescerende baggrund. For det andet, når du tilføjer prøver til felterne reaktion på reagens skuffe, forskere skal sikre at dråber af prøver, der ikke er blandet med hinanden. Luftbobler mellem prøver og biochips bør undgås.
Denne metode har begrænsninger; for eksempel, når du bruger CBA til at opdage anti-AQP4 IgG, er det svært at kvantificere fluorescens intensitet og beskrive anti-AQP4 IgG titer i serum. I øjeblikket, er intensiteten af fluorescens i vores diagnostisk center, subjektivt rapporteret af to klinikere efter sammenligner fotografier af prøver vs. kontrol. I de fleste tilfælde er det ikke svært at afgøre, om serum er anti-AQP4 IgG-positive eller negative. Dog, i sjældne tilfælde, fluorescens fra prøver kan synes kun lidt stærkere end den negative kontrol, og prøven anses for at være "sandsynlige positive". I denne situation, bør klinikere være mere forsigtige med at gøre en diagnose. En anden mulig løsning er at gentage CBA. En mere præcis metode til at måle intensiteten af fluorescens og en international definition af "anti-AQP4 IgG-positive" er berettiget. Især, positiv anti-AQP4 IgG i cerebrospinalvæsken er meget lavere end i serum, og test for anti-AQP4 IgG i cerebrospinalvæsken er ikke oplysende14,15.
CBA kan anvendes til både klinisk diagnose og videnskabelige undersøgelser af NMOSD. En klinisk diagnose af NMOSD er foretaget på grundlag af kombinationen af kliniske manifestationer, serum IgG anti-AQP4, og neuroradiological resultater. Serum anti-AQP4 IgG-positive patienter med mindst én kerne kliniske karakteristisk for NMOSD kan være diagnosticeret med NMOSD5; Men, hvis patienten er anti-AQP4 IgG-negative, en diagnose af NMOSD bør ikke være udelukket5, og klinikere skal yderligere evaluere kliniske manifestationer og neuroradiological resultater5,16,17 . Serum myelin oligodendrocyte glykoprotein antistof kan påvises for at bistå diagnose18,19,20. Navnlig selv om serum anti-AQP4 IgG titer kan ændres med rituximab behandling21, er det ikke intelligent sygdomsforløb og reaktion på immunterapi22,23. CBA er også almindeligt anvendt til videnskabelig forskning. For eksempel, beskrives Yang et al.24 de kliniske funktioner af anti-AQP4 IgG-positive NMOSD patienter. Derudover analyseret Kitley et al.25 de prognostiske faktorer for anti-AQP4 IgG-positive NMOSD patienter25. Begge undersøgelser anvendes CBA til at påvise serum anti-AQP4 IgG.
Sammenfattende CBA er en meget anvendt metode til at påvise anti-AQP4 IgG og kan anvendes til klinisk diagnose og videnskabelig forskning af NMOSD.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ikke noget at oplyse.
Acknowledgments
Forfatterne er taknemmelig for støtten fra tilskud fra National Science Foundation of China (nr. 31600820), The sundhed og familieplanlægning Kommissionen i Jilin provinsen (Nej 2016Q036), og videnskab og teknologi planlægning projekt af Jilin provinsen (nr. 20180520110JH).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Anti-aquaporin-4 IIFT | Euroimmun | FA 1128-2005-50 | Contains biochip slides coated with AQP4-M1 transfected and untransfected EU 90 cells, fluorescein-labelled anti-human IgG, anti-AQP4 antibody as positive control, antibody negative sample, salt for PBS pH 7.2, Tween 20 and embedding medium. |
| CellSens Dimension | OLYMPUS | N/A | photograph software |
| Gel & clot activator tube | Improve medical | 623040202 | From a local Chinese company |
References
- Zekeridou, A., Lennon, V. A.
- Ho, J. D., et al. Crystal structure of human aquaporin 4 at 1.8 A and its mechanism of conductance. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (18), 7437-7442 (2009).
- Takeshita, Y., et al. Effects of neuromyelitis optica-IgG at the blood-brain barrier in vitro. in vitro.Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 4 (1), 311 (2016).
- Sato, D. K., et al. Distinction between MOG antibody-positive and AQP4 antibody-positive NMO spectrum disorders. Neurology. 82 (6), 474-481 (2014).
- Wingerchuk, D. M., et al. International consensus diagnostic criteria for neuromyelitis optica spectrum disorders. Neurology. 85 (2), 177-189 (2015).
- Ruiz-Gaviria, R., et al. Specificity and sensitivity of aquaporin 4 antibody detection tests in patients with neuromyelitis optica: A meta-analysis. Multiple Sclerosis and Related Disorders. 4 (4), 345-349 (2015).
- Waters, P., et al. Multicentre comparison of a diagnostic assay: aquaporin-4 antibodies in neuromyelitis optica. Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 87 (9), 1005-1015 (2016).
- Fryer, J. P., et al. AQP4 autoantibody assay performance in clinical laboratory service. Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 1 (1), 11 (2014).
- Long, Y., et al. Aquaporin-4 antibody in neuromyelitis optica: re-testing study in a large population from China. The International Journal of Neuroscience. 127 (9), 790-799 (2017).
- Pisani, F., et al. Aquaporin-4 autoantibodies in Neuromyelitis Optica: AQP4 isoform-dependent sensitivity and specificity. PloS One. 8 (11), 79185 (2013).
- Jarius, S., et al. Aquaporin-4 antibody testing: direct comparison of M1-AQP4-DNA-transfected cells with leaky scanning versus M23-AQP4-DNA-transfected cells as antigenic substrate. Journal of Neuroinflammation. 11, 129 (2014).
- Juryńczyk, M., Craner, M., Palace, J. Overlapping CNS inflammatory diseases: differentiating features of NMO and MS. Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 86 (1), 20-25 (2015).
- Chen, H., et al. Clinical Features of Patients with Multiple Sclerosis and Neuromyelitis Optica Spectrum Disorders. Chinese Medical Journal. 129 (17), 2079-2084 (2016).
- Majed, M., Fryer, J. P., McKeon, A., Lennon, V. A., Pittock, S. J. Clinical utility of testing AQP4-IgG in CSF: Guidance for physicians. Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 3 (3), 231 (2016).
- Jarius, S., et al. Cerebrospinal fluid antibodies to aquaporin-4 in neuromyelitis optica and related disorders: frequency, origin, and diagnostic relevance. Journal of Neuroinflammation. 7, 52 (2010).
- Asgari, N., et al. Disruption of the leptomeningeal blood barrier in neuromyelitis optica spectrum disorder. Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 4 (4), 343 (2017).
- Kim, H. J., et al. MRI characteristics of neuromyelitis optica spectrum disorder: an international update. Neurology. 84 (11), 1165-1173 (2015).
- Jarius, S., et al. MOG encephalomyelitis: international recommendations on diagnosis and antibody testing. Journal of Neuroinflammation. 15 (1), 134 (2018).
- Narayan, R., et al. MOG antibody disease: A review of MOG antibody seropositive neuromyelitis optica spectrum disorder. Multiple Sclerosis and Related Disorders. 25, 66-72 (2018).
- Ogawa, R., et al. MOG antibody-positive, benign, unilateral, cerebral cortical encephalitis with epilepsy. Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 4 (2), 322 (2017).
- Valentino, P., Marnetto, F., Granieri, L., Capobianco, M., Bertolotto, A. Aquaporin-4 antibody titration in NMO patients treated with rituximab: A retrospective study. Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 4 (2), 317 (2016).
- Kessler, R. A., et al. Anti-aquaporin-4 titer is not predictive of disease course in neuromyelitis optica spectrum disorder: A multicenter cohort study. Multiple Sclerosis and Related Disorders. 17, 198-201 (2017).
- Mealy, M. A., et al. Aquaporin-4 serostatus does not predict response to immunotherapy in neuromyelitis optica spectrum disorders. Multiple Sclerosis. , (2017).
- Yang, Y., et al. The role of aquaporin-4 antibodies in Chinese patients with neuromyelitis optica. Journal of Clinical Neuroscience. 20 (1), 94-98 (2013).
- Kitley, J., et al. Prognostic factors and disease course in aquaporin-4 antibody-positive patients with neuromyelitis optica spectrum disorder from the United Kingdom and Japan. Brain. 135 (6), 1834-1849 (2012).
