Summary
Test basati su celle è un metodo ampiamente utilizzato per rilevare l'immunoglobulina del siero anti-acquaporina-4 G. Questo metodo potrebbe essere applicato a diagnosi clinica e ricerche scientifiche di neuromielite ottica dello spettro autistico.
Abstract
Anti-acquaporina-4 (AQP4) dell'immunoglobulina G (IgG) è il biomarcatore diagnostico di nucleo per disordini di spettro di optica di neuromyelitis (NMOSD). L'analisi basata sulle celle (CBA) è un metodo ampiamente usato per rilevare anti-AQP4 IgG nel siero umano con alta sensibilità e specificità. Brevemente, siero anti-AQP4 IgG è catturato dai cellule trasfettate con AQP4 che sono fissata sul biochip poi rilevata da un anticorpo secondario marcato con fluoresceina. Microscopia di fluorescenza è utilizzata per visualizzare la fluorescenza e l'intensità di fluorescenza viene valutato da almeno due esperti clinici. Una diagnosi finale di NMOSD può essere fatta basata sulla combinazione di risultati di rilevamento di IgG anti-AQP4, manifestazioni cliniche e risultati neuroradiological. Secondo studi precedenti, CBA è più sensibile e specifico rispetto ad altri metodi di rilevamento di IgG anti-AQP4 e può essere applicato alla diagnosi clinica e di studi di NMOSD. Il metodo presenta limitazioni; ad esempio, la scala internazionale per valutare i titoli di IgG del siero anti-AQP4 è ancora carente. Qui, un protocollo dettagliato per il rilevamento di IgG anti-AQP4 siero umano utilizzando CBA è descritto.
Introduction
Siero AQP4 IgG è un biomarcatore diagnostico di nucleo per neuromielite optica spettro disturbi (NMOSD)1. L'analisi basata sulle celle (CBA) è un metodo di rilevamento di IgG anti-AQP4 ampiamente usato con alta sensibilità e specificità. Qui, è stato introdotto un protocollo dettagliato per CBA.
AQP4, una proteina di canale di acqua, ha sei unità dimisurazione e due domini elicoidale che circonda uno acquosa2del poro. IgG anti-AQP4 è coinvolto nella patogenesi della NMOSD tramite l'associazione alla relativa destinazione AQP4, che si trova principalmente su endfeet di astrociti3. Esso ha dimostrato che le IgG anti-AQP4 è positivo in circa due terzi di NMOSD pazienti4. Nei più recenti criteri diagnostici internazionali per NMOSD, IgG anti-AQP4 è considerato essere un biomarcatore diagnostico core5. A questo proposito, è fondamentale stabilire un protocollo affidabile per rilevare siero umano IgG anti-AQP4 e facilitare la diagnosi clinica di NMOSD.
Attualmente, diversi metodi di rilevamento di IgG anti-AQP4 sono disponibili, come CBA, analisi tissutali, analisi enzima-collegata dell'immunosorbente e flusso cytometry6,7. CBA impiega celle EU90, che transfected con AQP4 umana, per catturare le IgG anti-AQP4. Le IgG anti-AQP4 catturato viene rilevata da fluorescenti anticorpi secondari e successivamente visualizzate da microscopia. Raccogliendo la prova ha dimostrato che CBA è più sensibile e specifico rispetto altri anti-AQP4 IgG rilevamento metodi6,7. Secondo una meta-analisi, la sensibilità e la specificità del CBA sono stati indicati per essere 76% e 99%, che erano superiori di tissutali e6di analisi enzima-collegata dell'immunosorbente. Inoltre, un confronto multicentrico di saggi diagnostici di IgG anti-AQP4 era condotto7. Un totale di 193 Studio soggetti da 15 centri diagnostici europei sono stati arruolati7. Quattro diversi metodi sono stati utilizzati per rilevare siero anti-AQP4 IgG7. È stato dimostrato che la CBA era più sensibile e specifico rispetto gli altri metodi7. AQP4 è espressa come due isoforme principali (AQP4-M1 e AQP4-M23), delle cellule di cattura di IgG anti-AQP4 sono trasfettate con AQP4-M1 o AQP4-M23. Tuttavia, quale tipo di cella di cattura è migliore rimane discutibile. Una ricerca ha sostenuto AQP4-M1 basata CBA8, mentre altri hanno indicato che l'AQP4-M23 basato CBA è meglio7,9,10. Tuttavia, basati su AQP4-M23 CBA può dare risultati falsamente positivi a causa di non specifico IgG associazione8. Jarius et al.. 11 ha riferito che non c'era differenza significativa nei tassi di rilevamento di IgG anti-AQP4 tra AQP4-M1 ed eventuali CBA AQP4-M23-basato.
In sintesi, siero anti-AQP4 IgG è un biomarcatore di nucleo per NMOSD. CBA ha maggiore specificità e sensibilità rispetto ad altri metodi di rilevamento di IgG anti-AQP4. Rimane controverso se AQP4-M1 AQP4 M23-basato o CBA è meglio. In questo articolo, è descritto un protocollo dettagliato per CBA AQP4-M1-base, che può essere applicato a diagnosi clinica e studi di NMOSD.
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Protocol
Questa procedura è stata approvata dal comitato etico dell'Università ospedale prima di Jilin ed è stata effettuata su circa 1.500 soggetti.
1. paziente iscrizione e raccolta campioni ematici
- Applicare il rilevamento in laboratorio del siero di che IgG anti-AQP4 ai pazienti della clinica con i reclami principali ed i sintomi elencati di seguito. Eseguire esami fisici pure.
Neurite ottica: pazienti soffrono di deficit visivi, come la perdita del campo visivo e riduzione dell'acuità visiva.
Mielite acuta: i pazienti possono presentare con paralisi, deficit sensoriali e disfunzione autonomica.
Sindrome di area postrema: i pazienti possono avere sintomi di inspiegabile singhiozzo, nausea o vomito.
Sindrome acuta del tronco cerebrale: lesioni del tronco cerebrale potrebbero causare diversi sintomi e segni fisici a seconda della posizione delle lesioni.
Narcolessia sintomatica o acuta Sindrome diencefalica clinica con le lesioni diencephalic NMOSD-tipici di MRI.
Sindrome cerebrale sintomatica con le lesioni di cervello NMOSD-tipiche.
Nota: Secondo i criteri diagnostici di un consenso internazionale per NMOSD5, una diagnosi di NMOSD può essere fatta se il paziente è siero anti-AQP4 IgG-positivo e ha almeno una delle caratteristiche cliniche principali di cui sopra. Tuttavia, si sconsiglia di test di IgG anti-AQP4 in pazienti con la neurite ottica solo. -
Raccolta campioni ematici
Nota: pazienti non è necessario essere a digiuno.- Disegnare 2-3 mL di sangue venoso in un tubo di raccolta sangue vuoto 4 mL.
- Consentire il siero coagulare per 30 min a temperatura ambiente (TA).
Nota: Coagulazione prolungato può aumentare i livelli del siero a causa di perdite dalle piastrine. - Centrifuga a 2100 x g per 5 min, trasferire con cautela il siero ad un nuovo tubo.
- Analizzare il siero immediatamente o aliquotare e conservare a -20 o -80 ° C.
Nota: Conservazione a-20 ° C è per l'archiviazione dei mesi, mentre è di-80 ° C per lo stoccaggio di anni.
2. anti-AQP4 rilevazione dell'anticorpo
Attenzione: Campioni e reagenti di kit usato dovrebbero essere considerati materiale infettivo. Sodio azide-contenente i reagenti sono tossici. Un diagramma di flusso del protocollo è fornito nella Figura 1.
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Preparazione
- Portare il kit a RT prima dell'uso.
Nota: Conservare il kit a 2-8 ° C. - Preparare almeno 200 mL di tampone di lavaggio PBS contenente 0,2% Tween 20. Versare 100 mL di tampone di lavaggio in un becher da mL 500.
- Diluire il siero campioni 10x con tampone di lavaggio. Preparare i controlli positivi e negativi secondo le istruzioni del distributore.
- Portare il kit a RT prima dell'uso.
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Incubazione del campione
- Aggiungere 30 µ l di campioni pre-diluiti, controllo positivo o controllo negativo per i campi di reazione del vassoio reagente (Figura 2).
Nota: Evitare le bolle d'aria. - Rimuovere il coperchio di protezione sulle diapositive biochip.
Nota: Non toccare il biochip per evitare il distacco e la contaminazione delle cellule fisse. Tenere la diapositiva side-by-side prima di rimuovere il coperchio. - Applicare la diapositiva di biochip al vassoio del reagente (Figura 2). Avviare un'incubazione di 30 minuti a TA.
Nota: Ogni campione deve essere una gocciolina individuo collegata al biochip corrispondente senza miscelazione con altre goccioline. - Sciacquare delicatamente il vetrino di biochip una volta con tampone di lavaggio. Immergere il vetrino di biochip nel bicchiere graduato 500 mL riempita con 100 mL di tampone di lavaggio per almeno 5 min posto il becher su un agitatore se possibile.
- Prendere lo scivolo di biochip dal tampone di lavaggio. Accuratamente pulire il tampone di lavaggio residuo fuori i campi di reazione con un tovagliolo di carta. Esporre la diapositiva di biochip aria aperta per 1-2 min per far evaporare il tampone di lavaggio residua sul campo di reazione.
Nota: Non asciugare i campi di reazione. Non toccare il biochip con tovagliolo di carta.
- Aggiungere 30 µ l di campioni pre-diluiti, controllo positivo o controllo negativo per i campi di reazione del vassoio reagente (Figura 2).
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Incubazione dell'anticorpo secondario
- Preparare la soluzione di anticorpo secondario secondo le istruzioni del distributore.
- Aggiungere 25 µ l di anticorpo secondario fluorescente ai campi della reazione di un vassoio di reagente pulito.
- Applicare la diapositiva di biochip per vassoio reagente caricato con anticorpo secondario. Incubare per 30 minuti a TA.
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Montaggio
- Versare il tampone di lavaggio usate e aggiungere 100 mL di tampone di lavaggio fresco nel bicchiere graduato. Ripetere il lavaggio come descritto ai punti 2.2.4 e 2.2.5.
- Aggiungere con cautela il mezzo di inclusione per i campi di reazione in una diapositiva di biochip (una goccia per ogni campo di reazione). Sigillare la diapositiva di biochip con un pezzo di vetro di copertura. Evitare le bolle d'aria.
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Rilevazione della fluorescenza
- Accendere la lampada fluorescente di microscopio e pre-riscaldare per 15 min. Scegli filtro a 488 nm.
- Software di fotografia aperto. Scattare foto da trasfettate e untransfected di tutti i campi di reazione con ingrandimenti differenti. In primo luogo, prendere una foto con ingrandimento 4x per una panoramica, poi scattare altre foto con 10 x e 20 x ingrandimenti.
Nota: Il protocollo dettagliato è mostrato nella tabella 1. Interpretazione dei risultati è discussa nella sezione risultati rappresentativi.
3. diagnosi dei pazienti
- Se il paziente è siero anti-AQP4 IgG-positivo e mostra almeno una caratteristica clinica di nucleo di NMOSD (Vedi sezione discussione), diagnosticare il paziente con NMSOD5. Tuttavia, se il paziente è anti-AQP4 IgG negativo, una diagnosi di NMOSD non può essere esclusa.
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Representative Results
Utilizzando la procedura descritta qui, IgG specifiche anti-AQP4 nel siero è rilevabile. Durante la procedura, campioni pre-diluiti, un controllo positivo e un controllo negativo sono state aggiunte per i campi di reazione, che contengono aree trasfettate e untransfected (Figura 2). Fluorescenza del controllo negativo in una zona trasfettata principalmente indicato il legame non specifico dell'anticorpo secondario alle cellule trasfettate il biochip (Figura 3). In modo omogeneo debole fluorescenza era visibile (Figura 3). Per quanto riguarda il controllo positivo, anticorpi anti-AQP4 è stato aggiunto al campo di reazione. Forte fluorescenza è stata osservata nella zona transfettata, che indicava il grippaggio specifico di IgG anti-AQP4 AQP4-M1 in cellule trasfettate (Figura 4). Fluorescenza del controllo positivo in un'area untransfected ha mostrato sentori di associazione non specifico di IgG anti-AQP4 a celle fisse su biochip (Figura 4). Per 10 volte campioni diluiti, siero negativo IgG anti-AQP4 ha mostrato un modello fluorescente simile al controllo negativo, mentre il siero positivo ha mostrato un modello simile al controllo positivo (Figura 5). L'intensità di fluorescenza è stato associato con il titolo di IgG anti-AQP4. Esempi di diverse intensità di fluorescenza sono presentati nella Figura 5. Figura 5 A e 5B erano da campioni di IgG negativo anti-AQP4, mentre Figura 5C-H sono stati da campioni IgG positivi anti-AQP4. Come fluorescenza granulare ed eterogeneo è comparso nelle zone transfettate, il campione è stato considerato anti-AQP4 IgG-positivo, a prescindere dalla forza della fluorescenza. I criteri diagnostici per NMOSD, che si basa sul siero anti-AQP4 IgG, sarà ulteriormente descritto nella sezione discussione.
In alcuni campioni, solo un piccolo numero di cellule è stato fortemente macchiato nelle aree trasfettate ed era difficile determinare se il siero è stato anti-AQP4 IgG positivi o negativi (Figura 6). In questo caso, possa essere segnalato "probabile positivo". Nei casi più rari, la fluorescenza di un campione in aree transfettate era in modo omogeneo più forte nelle aree untransfected (Figura 7). In questo caso, il campione dovrebbe essere considerato anti-AQP4 IgG negativo. L'alta intensità di fluorescenza di fondo potrebbe essere non specifica. Per creare un rapporto affidabile, tutte le fotografie dovrebbero essere valutate alla cieca da almeno due medici. I clinici dovrebbero essere addestrati prima della valutazione. In questo protocollo, essi hanno mostrati fotografie rappresentative dei tipi di campioni diversi e sono stati informati su come valutare i risultati. Quindi, essi valutati fotografie insieme ad un clinico esperto. Infine, i clinici addestrati ha lavorato in modo indipendente. In una situazione ideale, dovrebbe essere sempre lo stessi clinici che valutano i risultati.
Figura 1 : Diagramma di flusso del protocollo di rilevamento IgG anti-AQP4. AQP4-M1-transfected o untransfected UE 90 cellule sono fissate il biochip. Quando si aggiunge del siero di biochip, IgG anti-AQP4 nel siero viene catturato dalle cellule trasfettate fisse. Quindi, anticorpo secondario marcato con fluoresceina viene applicato per rilevare IgG anti-AQP4. La fluorescenza possa essere visualizzata da microscopia con diversi ingrandimenti. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 2 : Campione incubazione. (A) vista dall'alto del vassoio reagenti. Ogni vassoio reagente contiene cinque campi di reazione individuale. Il controllo positivo, campioni e controllo negativo dovrebbe aggiungersi ai campi reazione separata. (B) vista dall'alto della diapositiva biochip. Ogni diapositiva di biochip contiene cinque campi di reazione, che hanno due sottosezioni. La sottosezione trasfettata contiene fisse cellule trasfettate con AQP4-M1, mentre la sottosezione untransfected contiene cellule untransfected. (C) la facciata dello scorrevole di vassoio e biochip di reagente. Campi di reazione sulla diapositiva reagente vassoio e biochip sono abbinati a vicenda. Il campione aggiunto al campo di reazione sul vassoio di reagente deve essere collegato al campo di reazione corrispondente sulla diapositiva biochip. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 3 : Figure rappresentative per il controllo negativo. (A) una panoramica della zona transfected del controllo negativo è stata ottenuta tramite microscopia di ingrandimento: 4x. In modo omogeneo debole fluorescenza è stata osservata in tutta l'area. (B, C) Maggiori dettagli sono stati osservati in 10 x (B) e x (C) fotografie di ingrandimento. Generalmente, la membrana cellulare e la plasma erano leggermente macchiate, e il nucleo delle cellule era senza macchia. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 4 : Figure rappresentative per controllo positivo. (A, B) Trasfettate (A) e untransfected (B) zone di controllo positivo sono mostrati. In modo omogeneo debole fluorescenza è stata osservata nelle aree untransfected, che indica associazione aspecifici di IgG anti-AQP4 a celle fisse. Al contrario, eterogeneo forte fluorescenza è stata osservata nelle aree transfettate, indicando il grippaggio specifico di IgG anti-AQP4 AQP4-M1 espresso sulle cellule fisse. (C-F) Maggiori dettagli su trasfettate (C, E) e untransfected (S, F) aree sono osservate con 10 x (C, D) o (E, F) ingrandimento: 20x. Fluorescenza debole e persino è comparso nelle zone untransfected. Tuttavia, una grande percentuale di cellule trasfettate aree ha mostrato intensa fluorescenza. Nel plasma di cellule fortemente marcate, IgG anti-AQP4 ha mostrato fluorescenza granulare e liscio. Il nucleo delle cellule è stato senza macchia o leggermente macchiato. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 5 : Figure rappresentative per campioni di positivo o negativo dell'anticorpo anti-AQP4. I campioni erano 10x diluito, e tutte le cifre riportate sono state scattate con un obiettivo 10x. (A, B) Campione di fluorescenza negativa: la fluorescenza era in modo omogeneo debole in entrambi (A) transfettate e untransfected (B) zone. (C, D) Campione di fluorescenza debole: quando confrontato con zone untransfected (D), una piccola quantità di cellule (circa il 25% al 50%) nelle aree trasfettate (C) ha mostrate più intensa fluorescenza. (E, F) Campione di fluorescenza moderata: nelle aree trasfettate (E), forte fluorescenza granulare è stata osservata in una quantità media di cellule (circa 50% a 75%). (G, H) Esempio di forte fluorescenza: cellule nelle aree untransfected (H) sono state macchiate debolmente. Tuttavia, nelle aree trasfettate (G), fluorescenza granulare ad alta intensità è apparso in un gran numero di cellule (circa oltre il 75%). In genere, come il titolo di IgG anti-AQP4 aumentato, l'intensità di fluorescenza e la percentuale di cellule fortemente marcate elevati corrispondentemente. La fluorescenza delle zone untransfected era sempre in modo omogeneo debole. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 6 : Figure rappresentative per campioni di "probabile positivi" anticorpo anti-AQP4. (A, B) Sono state osservate differenze significative nei modelli di fluorescenza tra trasfettate (A) e untransfected (B) zone con un ingrandimento 4x. (C-E) Con 10 x (C, D) o 20 x (E, F) ingrandimento, alcune cellule nelle aree trasfettate (C, E) ha mostrati forte fluorescenza granulare. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 7 : Esempio di campione IgG negativo atipico anti-AQP4. Trasfettate (A) sia untransfected (B) zone erano macchiate in modo omogeneo. Tuttavia, la fluorescenza in aree transfettate era più forte nelle aree untransfected. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
| Ingrandimento | Zona trasfettata | Zona untransfected |
| 4 x | 1 foto | 1 foto |
| 10 x | 4 foto | 1 foto |
| 00: | 5 foto | 1 foto |
Tabella 1: microscopia di fluorescenza. È consigliabile utilizzare 4x, 10x, obiettivi e 20 x per l'acquisizione delle aree trasfettate e untransfected.
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Discussion
Abbiamo descritto un metodo ampiamente accessibile per rilevare anti-AQP4 IgG nel siero umano. IgG anti-AQP4 è strettamente correlata alla NMOSD, e stabilire un metodo di rilevamento di IgG anti-AQP4 affidabile è fondamentale per la diagnosi clinica di NMOSD. In primo luogo, IgG anti-AQP4 è specifico per NMOSD. La sclerosi multipla è una malattia immune-mediata del sistema nervoso centrale e condivide molte somiglianze con NMOSD12. Tuttavia, IgG anti-AQP4 è solo positivo in NMOSD13. In secondo luogo, IgG anti-AQP4 è comune tra i pazienti NMOSD. Circa due terzi dei pazienti NMOSD sono siero anti-AQP4 IgG positivo4. In terzo luogo, i più recenti criteri di diagnosi per NMOSD si basa su siero anti-AQP4 IgG test5. Presi insieme, rilevamento di IgG del siero anti-AQP4 potrebbe facilitare la diagnosi clinica di NMOSD.
Tra i vari metodi di rilevamento IgG anti-AQP4, CBA è ampiamente usato per la diagnosi clinica grazie alla sua elevata sensibilità e specificità6,7. Anche se CBA è un metodo rapido e semplice, vi suggeriamo alcuni punti chiave. In primo luogo, gli sperimentatori dovrebbero essere attenzione quando si lavora con biochip, come cellule untransfected e AQP4-M1-transfettate sono fissi sul biochip. Durante l'intera procedura, biochip non deve essere toccato con mano o asciugato. Inoltre, diapositive con biochip devono essere maneggiati delicatamente, altrimenti le cellule fissate sul biochip potrebbero cadere o essere contaminate, che può provocare zone difettose di fluorescenza o un elevato background fluorescente. In secondo luogo, quando si aggiungono i campioni per i campi di reazione sul vassoio reagente, ricercatori devono garantire che le gocce di campioni non sono mescolate con a vicenda. Bolle d'aria tra i campioni e il biochip dovrebbe essere evitata.
Questo metodo presenta limitazioni; ad esempio, quando si utilizza CBA per rilevare IgG anti-AQP4, è difficile quantificare l'intensità di fluorescenza e descrivere il titolo di IgG anti-AQP4 nel siero. Attualmente, nel nostro centro diagnostico, l'intensità della fluorescenza è soggettivamente segnalato da due medici dopo il confronto di fotografie dei controlli di campioni vs. . Nella maggior parte dei casi, non è difficile da determinare se il siero è anti-AQP4 IgG-positivo o negativo. Tuttavia, in rari casi, la fluorescenza da campioni può sembrare solo leggermente più forte rispetto al controllo negativo, e il campione è considerato "probabile positivo". In questo caso, i clinici dovrebbero essere più attenti nella fabbricazione della diagnosi. Un'altra possibile soluzione è di ripetere il CBA. Un metodo più accurato per quantificare l'intensità della fluorescenza e una definizione internazionale di "Anti-AQP4 IgG-positivo" è coperti da garanzia. In particolare, il tasso positivo di IgG anti-AQP4 in liquido cerebrospinale è molto più basso nel siero, e test per IgG anti-AQP4 in liquido cerebrospinale non è informativo14,15.
CBA può essere applicato a studi scientifici di NMOSD e diagnosi clinica. Diagnosi clinica di NMOSD è fatta basata sulla combinazione di manifestazioni cliniche, siero anti-AQP4 IgG e neuroradiologici. Siero anti-AQP4 IgG positivi pazienti con caratteristica clinica almeno un nucleo di NMOSD possono essere diagnosticati con NMOSD5; Tuttavia, se il paziente è anti-AQP4 IgG negativo, una diagnosi di NMOSD non dovrebbe essere escluso5, e i medici dovrebbero valutare ulteriormente le manifestazioni cliniche ed i risultati neuroradiological5,16,17 . L'anticorpo del siero del myelin oligodendrocyte glicoproteina può essere rilevata per assistere le diagnosi18,19,20. In particolare, anche se il titolo di IgG del siero anti-AQP4 può essere cambiato con rituximab trattamento21, non è predittivo del decorso della malattia e la risposta alla immunoterapia22,23. CBA è anche ampiamente usato per la ricerca scientifica. Ad esempio, Yang et al.24 descritto le caratteristiche cliniche dei pazienti NMOSD positivo per IgG anti-AQP4. Inoltre, Kitley et al.25 analizzati i fattori prognostici per NMOSD positivo per IgG anti-AQP4 pazienti25. Entrambi gli studi utilizzati CBA per rilevare siero IgG anti-AQP4.
In sintesi, CBA è un metodo ampiamente usato per rilevare IgG anti-AQP4 e può essere applicata alla diagnosi clinica e di ricerca scientifica di NMOSD.
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Disclosures
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Acknowledgments
Gli autori sono grati per il sostegno da sovvenzioni dalla National Science Foundation of China (No. 31600820), la salute e Commissione di pianificazione familiare della provincia dello Jilin (No. 2016Q036) e la scienza e tecnologia pianificazione progetto della provincia di Jilin (No. 20180520110JH).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Anti-aquaporin-4 IIFT | Euroimmun | FA 1128-2005-50 | Contains biochip slides coated with AQP4-M1 transfected and untransfected EU 90 cells, fluorescein-labelled anti-human IgG, anti-AQP4 antibody as positive control, antibody negative sample, salt for PBS pH 7.2, Tween 20 and embedding medium. |
| CellSens Dimension | OLYMPUS | N/A | photograph software |
| Gel & clot activator tube | Improve medical | 623040202 | From a local Chinese company |
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