Summary
Cellebasert analysen er en brukte metoden å oppdage serum anti-aquaporin-4 immunglobulin G. Denne metoden kan brukes til klinisk diagnose og vitenskapelige undersøkelser av neuromyelitis optisk spektrum lidelser.
Abstract
Anti-aquaporin-4 (AQP4) immunglobulin G (IgG) er kjernen diagnostiske biomarkør for neuromyelitis optica spektrum lidelser (NMOSD). Cellebasert analysen (CBA) er en mye brukt til å oppdage anti-AQP4 IgG i humant serum med høy sensitivitet og spesifisitet. Kort, serum anti-AQP4 IgG fanges opp av AQP4-transfekterte cellen som er fast på biochip så oppdaget av et fluorescein-merkede sekundære antistoff. Fluorescens mikroskopi er benyttet for å visualisere fluorescensen og intensiteten av fluorescens vurderes ved minst to erfarne klinikere. NMOSD siste diagnosen kan gjøres basert på en kombinasjon av anti-AQP4 IgG søkeresultatene, kliniske manifestasjoner og neuroradiological funn. Ifølge tidligere studier CBA er mer følsom og spesifikk enn andre anti-AQP4 IgG gjenkjenningsmetoder, og det kan brukes til både klinisk diagnose og studier av NMOSD. Metoden har begrensninger; for eksempel mangler fortsatt internasjonal målestokk å evaluere serum anti-AQP4 IgG titers. Her er en detaljert protokoll for humant serum anti-AQP4 IgG oppdagelsen med CBA beskrevet.
Introduction
Serum AQP4 IgG er en kjerne diagnostiske biomarkør for neuromyelitis optica spektrum lidelser (NMOSD)1. Cellebasert analysen (CBA) er en mye brukt anti-AQP4 IgG gjenkjennings-metoden med høy sensitivitet og spesifisitet. Her er en detaljert protokoll for CBA innført.
AQP4, en vann kanal protein, har seks membran-spenner enheter og to spiralformede domener rundt en vandig pore2. Anti-AQP4 IgG er involvert i patogenesen av NMOSD gjennom binding til målet AQP4, som er hovedsakelig lokalisert på endfeet av astrocyttene3. Det har vist at anti-AQP4 IgG er positive i omtrent to tredjedeler av NMOSD pasienter4. I de siste internasjonale diagnostiske kriteriene for NMOSD anses anti-AQP4 IgG å være en kjerne diagnostiske biomarkør5. I denne forbindelse er det viktig å etablere en protokoll som er pålitelig for å oppdage humant serum anti-AQP4 IgG og tilrettelegge kliniske diagnosen NMOSD.
Foreløpig er ulike anti-AQP4 IgG gjenkjenningsmetoder tilgjengelige, for eksempel CBA, vev-basert analysen, enzym knyttet immunosorbent analysen og flyt cytometri6,7. CBA benytter EU90 celler, som er transfekterte med menneskelige AQP4, å fange anti-AQP4 IgG. Fanget anti-AQP4 IgG oppdages av fluorescerende sekundære antistoffer og senere visualisert ved mikroskopi. Samler bevis har vist at CBA er mer følsom og spesifikk enn andre anti-AQP4 IgG gjenkjenning metoder6,7. Ifølge en meta-analyse, sensitivitet og spesifisitet av CBA ble vist å være 76% og 99%, noe som var høyere enn vev-basert og enzym knyttet immunosorbent søk6. Videre var en multicenter sammenligning av diagnostiske analyser av anti-AQP4 IgG gjennomført7. Totalt 193 studien fag fra 15 europeiske diagnostiske sentre var registrert7. Fire forskjellige metoder ble benyttet for å oppdage serum anti-AQP4 IgG7. Det ble demonstrert at CBA var mer følsom og spesifikk enn de andre metoder7. Som AQP4 uttrykkes som to store isoformene (AQP4-M1 og AQP4-M23), anti-AQP4 IgG fange cellen er transfekterte med AQP4-M1 eller AQP4-M23. Hvilken type fange cellen er imidlertid bedre fortsatt kontroversielt. En undersøkelse har støttet AQP4-M1 basert CBA8, mens andre har indikert at AQP4-M23 basert CBA er bedre7,9,10. AQP4-M23-baserte CBA kan imidlertid gi falske positive resultater på grunn av uspesifikke IgG bindende8. Jarius et al. 11 rapporterte at det var ingen signifikant forskjell i anti-AQP4 IgG deteksjon priser mellom AQP4-M1 og AQP4-M23-baserte CBAs.
I sammendraget, serum anti-AQP4 IgG er en kjerne biomarkør for NMOSD. CBA har høyere spesifisitet og følsomhet enn andre anti-AQP4 IgG gjenkjenningsmetoder. Det er fortsatt kontroversielt om AQP4-M1 - eller AQP4-M23-baserte CBA er bedre. I denne artikkelen, er en detaljert protokoll for AQP4-M1-baserte CBA beskrevet, som kan gjelde for klinisk diagnose og studier av NMOSD.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Denne fremgangsmåten ble godkjent av den etiske komiteen ved første sykehuset i Jilin universitetet og ble utført på lag 1500 fag.
1. pasient innmelding og blod prøvetaking
- Bruke laboratorium påvisning av serum anti-AQP4 IgG klinikk pasienter med sjef klager og symptomer nedenfor. Utføre fysiske undersøkelser også.
Optisk nevritt: pasienter lider med visuelle underskudd, som tap av visuelle felt og reduksjon i synsskarphet.
Akutt myelitis: pasienter kan presentere lammelse, sensoriske underskudd og autonome dysfunksjon.
Området postrema syndrom: pasienter kan ha symptomer av uforklarlige hikken, kvalme og oppkast.
Akutt hjernestammen syndrom: hjernestammen lesjoner kan føre til symptomer og fysiske tegn avhengig av lesjoner.
Symptomatisk narkolepsi eller akutt diencephalic klinisk syndrom med NMOSD-typisk diencephalic Mr lesjoner.
Symptomatisk cerebral syndrom med NMOSD-typisk hjernen lesjoner.
Merk: I henhold til internasjonal konsensus diagnostiske kriterier for NMOSD5, en diagnose av NMOSD kan gjøres hvis pasienten er serum anti-AQP4 IgG-positiv og har minst ett av de viktigste kliniske egenskapene nevnt ovenfor. Vi anbefaler imidlertid ikke testing av anti-AQP4 IgG hos pasienter med optisk nevritt bare. -
Blod prøvetaking
Merk: pasienter trenger ikke å være faste.- Tegne 2-3 mL venøst blod i en 4 mL vakuum blod samling rør.
- Tillate serum å koagulere i 30 min ved romtemperatur (RT).
Merk: Langvarig clotting kan øke serum nivåer på grunn av lekkasje fra blodplater. - Sentrifuge 2100 x g for 5 min. overføre nøye serum til en ny tube.
- Analysere serum umiddelbart eller aliquot og lagre på -20 eller-80 ° C.
Merk: Lagring på 20 ° C er for lagring av måneder, mens-80 ° C er for lagring av år.
2. anti-AQP4 antistoff gjenkjenning
Forsiktig: Pasientprøvene og brukte kit reagenser bør vurderes smittsomme materialer. Natrium azide inneholder reagenser i kit er giftige. Et flytdiagram for protokollen tilbys i figur 1.
-
Forberedelse
- Bringe utstyret til RT før bruk.
Merk: Oppbevar utstyret på 2-8 ° C. - Forbered minst 200 mL PBS vaskebuffer 0,2 prosent mellom 20. Hell 100 mL vaskebuffer i et 500 mL beger.
- Fortynne serumprøver 10 x med vaskebuffer. Forberede de positive og negative kontrollene i henhold til instruksjonene av distributør.
- Bringe utstyret til RT før bruk.
-
Inkubasjon
- Legge til 30 µL av pre fortynnede prøver, positiv kontroll eller negativ kontroll feltene reaksjon av reagens skuffen (figur 2).
Merk: Unngå luftbobler. - Fjern det beskyttende dekslet på biochip lysbildene.
Merk: Berør ikke biochips for å unngå avdeling og forurensning av fast celler. Hold lysbilde side-ved-side før du åpner dekslet. - Bruke biochip lysbildet reagens skuffen (figur 2). Starte en 30 min incubation på RT.
Merk: Hvert eksemplar skal en individuell slippverktøy koblet til den tilsvarende biochip uten å blande med andre dråper. - Forsiktig rense biochip lysbildet når med vaskebuffer. Fordype biochip lysbildet i 500 mL begeret fylt med 100 mL vaskebuffer i minst 5 min. sted begeret på en shaker hvis mulig.
- Ta ut biochip lysbildet fra vaske bufferen. Nøye tørke bort den gjenværende vaskebuffer utenfor feltene reaksjon med et papirhåndkle. Utsett biochip lysbildet i friluft i 1-2 min til å fordampe den gjenværende vaskebuffer på feltet reaksjon.
Merk: Ikke tørke ut feltene reaksjon. Berør ikke biochips med tørkepapir.
- Legge til 30 µL av pre fortynnede prøver, positiv kontroll eller negativ kontroll feltene reaksjon av reagens skuffen (figur 2).
-
Sekundær antistoff inkubasjon
- Forberede den sekundære antistoff løsningen i henhold til instruksjonene av distributør.
- Legg til 25 µL fluorescerende sekundære antistoff feltene reaksjon av en ren reagens brett.
- Bruke biochip lysbildet reagens skuffen lastet med sekundær antistoff. Inkuber i 30 min på RT.
-
Montering
- Helle ut den brukte vaskebuffer og Legg 100 mL frisk vaskebuffer i begeret. Gjenta vask som beskrevet i trinn 2.2.4 og 2.2.5.
- Forsiktig legge innebygging medium til feltene reaksjon på en biochip lysbilde (en dråpe reaksjon feltet). Forsegle biochip lysbildet med ett stykke dekke glass. Unngå luftbobler.
-
Fluorescens gjenkjenning
- Slå på lysrør mikroskop og pre varme i 15 min. Velg filtere 488 nm.
- Åpne bildet programvare. Ta bilder fra både transfekterte og untransfected av alle reaksjon felt med ulike forstørrelser. Først ta ett bilde med 4 x forstørrelse oversikt, så ta flere bilder med 10 x og 20 x forstørrelse.
Merk: Detaljert protokollen er vist i tabell 1. Tolkning av resultatene er omtalt i delen representant resultater.
3. diagnose av pasienter
- Hvis pasienten er serum anti-AQP4 IgG-positive og viser minst ett kjernen klinisk karakteristisk for NMOSD (se drøftingen), diagnostisere pasienten med NMSOD5. Men hvis pasienten er anti-AQP4 kan IgG-negativ, en diagnose av NMOSD ikke utelates.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Bruke fremgangsmåten som er beskrevet her, er bestemt anti-AQP4 IgG i serum synlig. Under inngrepet, ble pre fortynnede prøver, en positiv kontroll og en negativ kontroll lagt til feltene reaksjon, som inneholder transfekterte og untransfected områder (figur 2). Fluorescens for negative kontrollen i et transfekterte område angitt hovedsakelig uspesifikke binding av sekundær mot de transfekterte cellene i biochips (Figur 3). Homogent svak fluorescens var synlig (Figur 3). Som for positiv kontrollen, ble anti-AQP4 antistoff lagt til feltet reaksjon. Sterk fluorescens ble observert i transfekterte området, som angitt bestemte binding av anti-AQP4 IgG til AQP4-M1 i transfekterte cellene (Figur 4). Fluorescens for positiv kontrollen i et untransfected område viste hint av uspesifikke binding av anti-AQP4 IgG fast celler på biochips (Figur 4). For 10 x fortynnede prøver, anti-AQP4 IgG-negativ serum viste et fluorescerende mønster ligner på kontrollen negative mens positiv serum viste et mønster ligner på kontrollen positiv (figur 5). Intensiteten av fluorescens var assosiert med anti-AQP4 IgG titer. Eksempler på forskjellige intensiteten av fluorescens presenteres i figur 5. Figur 5 A og 5B var fra anti-AQP4 IgG-negativ prøver, mens figur 5C-H var fra anti-AQP4 IgG-positive eksempler. Så lenge heterogene og detaljert fluorescens dukket opp i transfekterte områder, prøven ble vurdert anti-AQP4 IgG-positive, uansett styrke til fluorescens. De diagnostiske kriteriene for NMOSD, som er basert på serum anti-AQP4 IgG, beskrives nærmere under diskusjon.
I noen eksempler, bare et lite antall celler var sterkt farget i transfekterte områder, og det var vanskelig å fastslå om serum anti-AQP4 IgG-positiv eller negativ (figur 6). I dette tilfellet kan "sannsynlig positiv" rapporteres. I sjeldne tilfeller var fluorescens av et utvalg i transfekterte områder homogent sterkere enn i untransfected områder (figur 7). I dette tilfellet bør prøven betraktes som anti-AQP4 IgG-negativ. Det kan hende at av høy intensitet for bakgrunnen fluorescens uspesifikke. For å opprette en pålitelig rapport, bør alle bildene blindt vurderes av minst to leger. Klinikere bør trenes før evaluering. Denne protokollen, de ble vist representant fotografier av ulike utvalg og ble informert om hvordan du evaluerer resultater. Deretter evalueres de fotografier sammen med en erfaren kliniker. Til slutt, de trent klinikere arbeidet uavhengig. I en ideell situasjon, bør det være alltid de samme klinikere som evaluerer resultater.
Figur 1 : Flytdiagram for anti-AQP4 IgG oppdagelsen protokollen. AQP4-M1-transfekterte eller untransfected EU 90 celler er festet på biochips. Når du legger til serum biochips, er anti-AQP4 IgG i serum tatt av fast transfekterte cellene. Fluorescein-merkede sekundære antistoff brukes deretter for å oppdage anti-AQP4 IgG. Fluorescensen kan visualiseres mikroskopi med ulike forstørrelser. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2 : Prøve inkubasjon. (A) ovenifra reagens skuffen. Hver reagens skuff inneholder fem personlige reaksjon. Den positive kontroll, prøver og negativ kontroll bør legges til feltene egen reaksjon. (B) ovenfra biochip lysbilde. Hver biochip innholder fem reaksjon felt, som har to deler. Transfekterte avsnittet inneholder fast AQP4-M1-transfekterte celler, mens untransfected avsnittet inneholder untransfected celler. (C) foran Vis reagens skuffen og biochip lysbilde. Reaksjon feltene reagens skuffen og biochip lysbildet er forbundet med hverandre. Prøven lagt til feltet reaksjon på reagens brett være koblet til feltet for tilsvarende reaksjon på biochip lysbildet. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3 : Representant tall for negativ kontroll. (A) en oversikt over transfekterte området i kontrollen negative ble innhentet av 4 x forstørrelse mikroskopi. Homogent svak fluorescens ble observert i hele området. (B, C) Mer ble observert i 10 x (B) og x (C) forstørrelse bilder. Vanligvis cellemembranen og plasma var litt farget, og cellekjernen var unstained kvinne. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 4 : Representant tall for positiv kontroll. (A, B) Transfekterte (A) og untransfected (B) områder for positiv vises. Homogent svak fluorescens ble observert i untransfected områder, som angir uspesifikke binding av anti-AQP4 IgG fast celler. Derimot ble heterogene sterk fluorescens observert i transfekterte områder, som viser bestemt binding av anti-AQP4 IgG til AQP4-M1 uttrykt på fast celler. (C-F) Flere detaljer om transfekterte (C, E) og untransfected (D, F) områder er observert med 10 x (C, D) eller 20 x (E, F) forstørrelsen. Svak og selv fluorescens dukket opp i untransfected områder. Men en stor andel av cellene i transfekterte områder viste intens fluorescens. I plasma sterkt farget celler viste anti-AQP4 IgG glatt og detaljert fluorescens. Cellekjernen var unstained kvinne eller litt farget. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 5 : Representant tall for anti-AQP4 antistoff negative eller positive eksempler. Prøvene var 10 x utvannet, og alle tall vises ble tatt med en 10 x målsetting. (A, B) Negativ fluorescens eksempel: fluorescensen var homogent svak i både (A) transfekterte og (B) untransfected områder. (C, D) Svak fluorescens eksempel: sammenlignet med untransfected områder (D), en liten mengde celler (ca 25% til 50%) i transfekterte områder (C) viste mer intense fluorescens. (E, F) Moderat fluorescens sample: i transfekterte områder (E), sterk detaljert fluorescens ble observert i en middels mengde celler (ca 50% til 75%). (G, H) Sterk fluorescens eksempel: celler i untransfected områder (H) var svakt farget. Men i transfekterte områder (G), granulerte fluorescens med høy intensitet dukket opp i en rekke celler (ca over 75%). Vanligvis som titer av anti-AQP4 IgG økt, både fluorescens intensitet og andelen sterkt farget celler opphøyet tilsvarende. Fluorescens untransfected områder var alltid homogent svak. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 6 : Representant tall for anti-AQP4 antistoffer "sannsynlige positiv" prøver. (A, B) Ingen betydelige forskjeller i fluorescens mønstre ble observert mellom transfekterte (A) og untransfected (B) områder på 4 x forstørrelse. (C-E) Med 10 x (C, D) eller 20 x (E, F) forstørrelse, noen celler i transfekterte områder (C, E) viste sterke detaljert fluorescens. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 7 : Eksempel på utypiske anti-AQP4 IgG-negativ eksempel. Både transfekterte (A) og untransfected (B) områder var homogent farget. Men var fluorescens i transfekterte områder sterkere enn i untransfected områder. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
| Forstørrelse | Transfekterte området | Untransfected området |
| 4 x | 1 bilde | 1 bilde |
| 10 x | 4 bilder | 1 bilde |
| 20 x | 5 bilder | 1 bilde |
Tabell 1: fluorescens mikroskopi. Det anbefales å bruke 4 x og 10 x 20 x mål for avbilding av transfekterte og untransfected.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Vi har beskrevet en allment tilgjengelig metode for å oppdage anti-AQP4 IgG i humant serum. Anti-AQP4 IgG er nært knyttet til NMOSD, og etablere en pålitelig anti-AQP4 IgG gjenkjennings-metoden er avgjørende for den kliniske diagnosen NMOSD. Første er anti-AQP4 IgG spesifikke for NMOSD. Multippel sklerose er også en immun-mediert sykdom i sentralnervesystemet og deler mange likheter med NMOSD12. Anti-AQP4 IgG er imidlertid bare positive i NMOSD13. Andre er anti-AQP4 IgG vanlig blant NMOSD pasienter. Omtrent to tredjedeler av NMOSD pasienter er serum anti-AQP4 IgG-positive4. Tredje siste diagnose kriteriene for NMOSD er basert på serum anti-AQP4 IgG testing5. Samlet kan serum anti-AQP4 IgG gjenkjenning lette den kliniske diagnosen NMOSD.
Blant ulike anti-AQP4 IgG gjenkjenningsmetoder, er CBA mye brukt for klinisk diagnose pga høy sensitivitet og spesifisitet6,7. Selv om CBA er en rask og enkel metode, skal noen viktige punkter rettes. Først bør forskere være forsiktig når du arbeider med biochips, som AQP4-M1-transfekterte og untransfected celler er festet på biochips. Under hele prosedyren, bør biochips ikke rørt for hånd eller tørket ut. I tillegg lysbilder med biochips skal håndteres forsiktig, ellers fast cellene i biochips kan falle ned eller blir forurenset, som kan føre til fluorescens defekt soner eller høy fluorescerende bakgrunn. Andre når prøver til feltene reaksjon på reagens skuffen, må forskere sikre at dråper prøver ikke blandes med hverandre. Luftbobler mellom prøver og biochips bør unngås.
Denne metoden har begrensninger; for eksempel når du bruker CBA for å oppdage anti-AQP4 IgG, er det vanskelig å kvantifisere fluorescens intensitet og beskrive anti-AQP4 IgG titer i serum. Foreløpig rapporteres vårt diagnostic senter, intensiteten av fluorescens subjektivt av to leger etter sammenlignende bilder av prøver vs. kontroller. I de fleste tilfeller er det ikke vanskelig å avgjøre om serum er anti-AQP4 IgG-positiv eller negativ. Men i sjeldne tilfeller fluorescens fra prøver kan virke bare litt sterkere enn kontrollen negative og prøven anses å være "sannsynlig positiv". I denne situasjonen bør klinikere være mer forsiktig i å gjøre en diagnose. En annen mulig løsning er gjentatt CBA. En mer nøyaktig metode for å kvantifisere intensiteten av fluorescens og en internasjonal definisjon av "Anti-AQP4 IgG-positiv" er garantert. Spesielt positivt anti-AQP4 IgG i Cerebrospinalvæske er mye lavere enn i serum og testing for anti-AQP4 IgG i Cerebrospinalvæske er ikke informativ14,15.
CBA kan brukes til både klinisk diagnose og vitenskapelige studier av NMOSD. Kliniske diagnosen NMOSD er gjort basert på kombinasjonen av kliniske manifestasjoner, serum IgG anti-AQP4, og neuroradiological funn. Serum anti-AQP4 IgG-positive pasienter med minst en kjerne klinisk karakteristisk for NMOSD kan diagnostiseres med NMOSD5; men hvis pasienten er anti-AQP4 IgG-negativ, en diagnose av NMOSD bør ikke utelukket5, og klinikere bør videre vurdere kliniske manifestasjoner og neuroradiological funn5,16,17 . Serum myelin oligodendrocyte glykoprotein antistoff kan oppdages for å hjelpe diagnose18,19,20. Spesielt, selv om serum anti-AQP4 IgG titer kan endres med rituximab behandling21, er det ikke prediktiv sykdom selvfølgelig og svar på immunterapi22,23. CBA er også mye brukt for vitenskapelig forskning. For eksempel beskrevet Yang et al.24 den kliniske funksjoner i anti-AQP4 IgG-positive NMOSD pasienter. I tillegg analysert Kitley et al.25 prognostiske faktorer for anti-AQP4 IgG-positive NMOSD pasienter25. Både studier brukt CBA for å oppdage serum IgG anti-AQP4.
I sammendraget, CBA er en brukte metoden å oppdage anti-AQP4 IgG og kan brukes til klinisk diagnose og forskning i NMOSD.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne ikke avsløre.
Acknowledgments
Forfatterne er takknemlig for støtten fra tilskudd fra National Science Foundation i Kina (nr. 31600820), The helse og familieplanlegging kommisjonen i provinsen Jilin (nei 2016Q036), og vitenskap og teknologi planlegging prosjektet i provinsen Jilin (nr. 20180520110JH).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Anti-aquaporin-4 IIFT | Euroimmun | FA 1128-2005-50 | Contains biochip slides coated with AQP4-M1 transfected and untransfected EU 90 cells, fluorescein-labelled anti-human IgG, anti-AQP4 antibody as positive control, antibody negative sample, salt for PBS pH 7.2, Tween 20 and embedding medium. |
| CellSens Dimension | OLYMPUS | N/A | photograph software |
| Gel & clot activator tube | Improve medical | 623040202 | From a local Chinese company |
References
- Zekeridou, A., Lennon, V. A.
- Ho, J. D., et al. Crystal structure of human aquaporin 4 at 1.8 A and its mechanism of conductance. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (18), 7437-7442 (2009).
- Takeshita, Y., et al. Effects of neuromyelitis optica-IgG at the blood-brain barrier in vitro. in vitro.Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 4 (1), 311 (2016).
- Sato, D. K., et al. Distinction between MOG antibody-positive and AQP4 antibody-positive NMO spectrum disorders. Neurology. 82 (6), 474-481 (2014).
- Wingerchuk, D. M., et al. International consensus diagnostic criteria for neuromyelitis optica spectrum disorders. Neurology. 85 (2), 177-189 (2015).
- Ruiz-Gaviria, R., et al. Specificity and sensitivity of aquaporin 4 antibody detection tests in patients with neuromyelitis optica: A meta-analysis. Multiple Sclerosis and Related Disorders. 4 (4), 345-349 (2015).
- Waters, P., et al. Multicentre comparison of a diagnostic assay: aquaporin-4 antibodies in neuromyelitis optica. Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 87 (9), 1005-1015 (2016).
- Fryer, J. P., et al. AQP4 autoantibody assay performance in clinical laboratory service. Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 1 (1), 11 (2014).
- Long, Y., et al. Aquaporin-4 antibody in neuromyelitis optica: re-testing study in a large population from China. The International Journal of Neuroscience. 127 (9), 790-799 (2017).
- Pisani, F., et al. Aquaporin-4 autoantibodies in Neuromyelitis Optica: AQP4 isoform-dependent sensitivity and specificity. PloS One. 8 (11), 79185 (2013).
- Jarius, S., et al. Aquaporin-4 antibody testing: direct comparison of M1-AQP4-DNA-transfected cells with leaky scanning versus M23-AQP4-DNA-transfected cells as antigenic substrate. Journal of Neuroinflammation. 11, 129 (2014).
- Juryńczyk, M., Craner, M., Palace, J. Overlapping CNS inflammatory diseases: differentiating features of NMO and MS. Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 86 (1), 20-25 (2015).
- Chen, H., et al. Clinical Features of Patients with Multiple Sclerosis and Neuromyelitis Optica Spectrum Disorders. Chinese Medical Journal. 129 (17), 2079-2084 (2016).
- Majed, M., Fryer, J. P., McKeon, A., Lennon, V. A., Pittock, S. J. Clinical utility of testing AQP4-IgG in CSF: Guidance for physicians. Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 3 (3), 231 (2016).
- Jarius, S., et al. Cerebrospinal fluid antibodies to aquaporin-4 in neuromyelitis optica and related disorders: frequency, origin, and diagnostic relevance. Journal of Neuroinflammation. 7, 52 (2010).
- Asgari, N., et al. Disruption of the leptomeningeal blood barrier in neuromyelitis optica spectrum disorder. Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 4 (4), 343 (2017).
- Kim, H. J., et al. MRI characteristics of neuromyelitis optica spectrum disorder: an international update. Neurology. 84 (11), 1165-1173 (2015).
- Jarius, S., et al. MOG encephalomyelitis: international recommendations on diagnosis and antibody testing. Journal of Neuroinflammation. 15 (1), 134 (2018).
- Narayan, R., et al. MOG antibody disease: A review of MOG antibody seropositive neuromyelitis optica spectrum disorder. Multiple Sclerosis and Related Disorders. 25, 66-72 (2018).
- Ogawa, R., et al. MOG antibody-positive, benign, unilateral, cerebral cortical encephalitis with epilepsy. Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 4 (2), 322 (2017).
- Valentino, P., Marnetto, F., Granieri, L., Capobianco, M., Bertolotto, A. Aquaporin-4 antibody titration in NMO patients treated with rituximab: A retrospective study. Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 4 (2), 317 (2016).
- Kessler, R. A., et al. Anti-aquaporin-4 titer is not predictive of disease course in neuromyelitis optica spectrum disorder: A multicenter cohort study. Multiple Sclerosis and Related Disorders. 17, 198-201 (2017).
- Mealy, M. A., et al. Aquaporin-4 serostatus does not predict response to immunotherapy in neuromyelitis optica spectrum disorders. Multiple Sclerosis. , (2017).
- Yang, Y., et al. The role of aquaporin-4 antibodies in Chinese patients with neuromyelitis optica. Journal of Clinical Neuroscience. 20 (1), 94-98 (2013).
- Kitley, J., et al. Prognostic factors and disease course in aquaporin-4 antibody-positive patients with neuromyelitis optica spectrum disorder from the United Kingdom and Japan. Brain. 135 (6), 1834-1849 (2012).
