Este protocolo proporciona un procedimiento paso a paso para analizar la carga aterosclerótica en ratones. Los investigadores pueden usar este protocolo para comparar la abundancia, la ubicación y el tamaño de las lesiones ateroscleróticas en diferentes animales.
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Artículo de método
Imágenes y análisis de lesiones de aorta entera teñidas de O de color rojo aceite en un modelo de ratón con hiperlipidemia por aneurisma
En este artículo
Resumen
Resumen
Los ratones hiperlipidémicos deficientes en apolipoproteína E (Apoe) o receptores de lipoproteínas de baja densidad (Ldlr) son los dos modelos más utilizados para la investigación de la aterosclerosis. Se utilizan para estudiar el impacto de varios factores genéticos y diferentes tipos de células en la formación de lesiones ateroscleróticas y también para probar el desarrollo de nuevas terapias. El aislamiento, la escisión de toda la aorta y la cuantificación de las lesiones ateroscleróticas teñidas de O rojo aceite son métodos morfométricos básicos utilizados para evaluar la carga aterosclerótica. El objetivo de este protocolo es describir un método quirúrgico optimizado y paso a paso para diseccionar, perfusar-fijar, aislar, teñir, visualizar y analizar lesiones ateroscleróticas en aortas de ratón con Oil Red O. Debido a que las lesiones ateroscleróticas pueden formarse en cualquier parte de todo el árbol aórtico, este método de tinción de aceite de aorta roja O tiene la ventaja de evaluar las placas cargadas de lípidos en toda la aorta y todas las ramas en un solo ratón. Además de la tinción Oil Red O, se pueden utilizar aortas enteras frescas aisladas para una variedad de experimentos in vitro e in vivo y aislamientos celulares.
Introducción
La enfermedad de las arterias coronarias, una de las principales causas de mortalidad en los Estados Unidos, generalmente es causada por la aterosclerosis, un proceso que conduce a la acumulación de placa dentro de las paredes arteriales1. Los ratones con deficiencia de Apoe y Ldlr propensos a la hiperlipidemia son fundamentales para las investigaciones de la aterosclerosis y sus complicaciones y el desarrollo de terapias2,3,4,5. La cuantificación de las lesiones ateroscleróticas de una aorta en la c....
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Protocolo
Los ratones mT/mG (stock no. 007676) y Apoe-/- (stock no. 002052) fueron comprados en el Laboratorio Jackson. Los ratones Myh11-CreERT2 fueron un regalo de Stefan Offermanns (disponible en el Laboratorio Jackson como stock no. 019079). Los ratones Tgfbr2fl/fl se obtuvieron de Harold L. Moses (Universidad de Vanderbilt). Todos los procedimientos con animales se realizaron utilizando protocolos aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad de Yale.
1. Ratones
- Producir MYH11-CreERT2;mT/mGf/f; ....
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Resultados
En este protocolo, se analizaron lesiones ateroscleróticas en ratones TGFβR2iSMC-Apoe después de 4 meses con una dieta HCHF7. Además de la aterosclerosis extensa, estos ratones desarrollaron aneurismas aórticos torácicos y abdominales, como se informó anteriormente. En comparación con los ratones Apoe-/-, las paredes aórticas de los ratones TGFβR2iSMC-Apoe mostraron aterosclerosis severa, lo que dificulta la disección de las lesiones (Figura 2C
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Discusión
Los ratones deficientes en apolipoproteína E (Apoe) y receptor de lipoproteínas de baja densidad (Ldlr) son útiles para estudiar el desarrollo y el tratamiento de la aterosclerosis. Los investigadores pueden evaluar el impacto de las manipulaciones genéticas y terapéuticas en la iniciación, progresión y regresión de enfermedades relacionadas con la aterosclerosis utilizando la tinción Oil Red O de toda la aorta9. La tinción y cuantificación de lesiones con aceite de aorta Rojo O .......
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Divulgaciones
Los autores no declaran intereses financieros contrapuestos.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado, en parte, por una microsubvención del Consorcio Conjunto de Biología proporcionada bajo la subvención P30AR070253 de los NIH (P.-Y.C.) y HL135582 (MS). Estamos agradecidos a R. Webber y L. Coon por mantener los ratones utilizados en este estudio.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Tubo Eppendorf de 1,5 mL | DENVILLE | C2170 | |
| Jeringa de 10 mL | BD | 302995 | |
| 16% Formaldehído | Polysciences | 18814-10 | |
| 70% etanol | VWR | RC2546.70-5 | Para limpiar las herramientas de disección |
| Cera de disección negra | CR Scientific | C3541 | |
| Aceite de maíz | Sigma | C8267 | Solvente para Tamoxifeno |
| DNeasy Blood & Kit de tejidos | QIAGEN | 69506 | Para aislar el ADN de la oreja de ratón |
| Dulbecco' s Solución salina tamponada con fosfato (1X DPBS), pH 7.4 | Gibco | 14190-144 | |
| Tijeras finas | Fine Science Tools | 14059-11 | Para cortar la piel del ratón y abrir la caja torácica |
| Fisherbrand Economy Portaobjetos de microscopio de vidrio liso | Fisher Scientific | 12-550-A3 | |
| Dieta alta en colesterol y alta en grasas | Dietas de investigación | D12108 | Para inducir la aterosclerosis |
| Imágenes software Institutos | Nacionales de Salud | Imagen J | Cuantificación de lesiones aórticas |
| Isopropanol | VWR JT9079-5 | ||
| Kimwipes | Fisher Scientific | 06-666A | Para limpiar los portaobjetos de microscopio de vidrio |
| McPherson-Vannas Micro Disecting Spring Tijeras | ROBOZ | RS-5602 | Para separar el corazón y la aorta y para cortar las ramas |
| de la aorta y la aortasoftware de control de microscopio | Olympus | DP Controller | Para la obtención de imágenes de aorta |
| Pines de minuciosa | Fine Science Tools | 26002-10 | |
| Needle-25G | BD | 305124 | |
| Esponja no tejida | McKesson | 94442000 | |
| Aceite Rojo O | Sigma | O-0625 | Para teñir las lesiones de la aterosclerosis |
| Jeringa estéril Pall Acrodisc Filtros con supermembrana | VWR | 28143-312 | Para filtrar el aceite de trabajo Solución Red O |
| Tijeras de resorte | Fine Science Tools | 15021-15 | Para diseccionar y limpiar la aorta |
| Software estadístico | GraphPad | Prisma 8 | Análisis estático |
| Microscopio estereoscópico | Nikon | SMZ1000 | Para la disección de aorta |
| Microscopio estereoscópico | Olympus | SZX16 | Para la obtención de imágenes de aorta |
| Tamoxifeno | Sigma | T5648 | Para inducir la recombinación de Cre-loxP |
| Compuesto Tissue-Tek O.C.T, Sakura Finetek | VWR | 25608-930 | |
| Pinza Estilo 4 | Ciencias de Microscopía Electrónica | 0302-4-PO | Para cortar la piel del ratón y abrir la caja torácica |
| Pinza Estilo 5 | Ciencias de la Microscopía Electrónica | 0302-5-PO | Para diseccionar y limpiar La aorta |
Referencias
- Lusis, A. J. Atherosclerosis. Nature. 407, 233-241 (2000).
- Emini Veseli, B., et al. Animal models of atherosclerosis. European Journal of Pharmacology. 816, 3-13 (2017).
- Plump, A. S., et al.
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Reimpresiones y permisos
