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Artículo de método

Un método de seccionamiento simple y seco para obtener la sección de resina de tamaño de semilla completa y sus aplicaciones

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DOI:

10.3791/61822

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23 de enero de 2021

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* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

Esta técnica permite la preparación rápida y sencilla de la sección de resina de tamaño de semilla entera para la observación y análisis de células, gránulos de almidón y cuerpos proteicos en diferentes regiones de la semilla.

Resumen

La morfología, el tamaño y la cantidad de células, gránulos de almidón y cuerpos proteicos en semillas determinan el peso y la calidad de las semillas. Son significativamente diferentes entre las diferentes regiones de semillas. Con el fin de ver claramente las morfologías de las células, gránulos de almidón y cuerpos proteicos, y analizar cuantitativamente sus parámetros morfológicos con precisión, se necesita la sección de tamaño de semilla completa. Aunque la sección de parafina de tamaño de semilla entera puede investigar la acumulación de materiales de almacenamiento en semillas, es muy difícil analizar cuantitativamente los parámetros morfológicos de las células y materiales de almacenamiento debido a la baja resolución de la sección gruesa. La sección de resina delgada tiene alta resolución, pero el método de seccionamiento rutinario de resina no es adecuado para preparar la sección de tamaño de semilla entera de semillas maduras con un gran volumen y alto contenido de almidón. En este estudio, presentamos un método de seccionamiento seco simple para preparar la sección de resina de tamaño de semilla completa. La técnica puede preparar las secciones transversales y longitudinales de tamaño integral de semillas en desarrollo, maduras, germinadas y cocidas incrustadas en resina LR White, incluso para semillas grandes con alto contenido de almidón. La sección de tamaño de semilla entera se puede teñir con brillo fluorescente 28, yodo y Coomassie azul brillante R250 para exhibir específicamente la morfología de células, gránulos de almidón y cuerpos proteicos claramente, respectivamente. La imagen obtenida también se puede analizar cuantitativamente para mostrar los parámetros morfológicos de las células, gránulos de almidón y cuerpos proteicos en diferentes regiones de semillas.

Introducción

Las semillas vegetales contienen materiales de almacenamiento como almidón y proteínas y proporcionan energía y nutrición a las personas. La forma, el tamaño y la cantidad de los materiales celulares y de almacenamiento determinan el peso y la calidad de las semillas. Las células y materiales de almacenamiento en diferentes regiones de semillas tienen morfologías significativamente diferentes, especialmente para algunos cultivos de cereales de alta amilasa con inhibición de la enzima ramificada de almidón IIb1,2,3. Por lo tanto, es muy importante investigar las morfologías de....

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Protocolo

1. Preparación de semillas incrustadas en resina (Figura 1)

  1. Fijar seis granos maduros de maíz en 10 ml de glutaraldehído con fosfato del 2,5% (0,1 M, pH7,2) a 4 oC durante 48 h. Los investigadores pueden elegir otras mezclas fijativas, concentraciones fijativas, y condiciones de fijación de acuerdo con sus objetivos de investigación y tipos de tejido.
  2. Saque los granos y los corte longitudinal o transversalmente a 2-3 mm de espesor utilizando una hoja afilada de doble cara, y fijelos en 10 ml de glutaraldehído con búfer de fosfato (0,1 M, pH 7,2) de nuevo durante 48 h.
  3. Lave las muestras tres veces con 10 ml de tampón de fosfato de 0,1 M (p....

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Resultados

Método de seccionamiento en seco simple para obtener una sección de tamaño de semilla completa
Establecemos un método de seccionamiento seco simple para preparar una sección de semillas de tamaño de semilla entera incrustada en resina LR-blanca (Figura 1). El método puede preparar secciones transversales y longitudinales de tamaño de semilla entera con espesor de 2 m(Figura 2-5, Figura Complementaria 1-4<.......

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Discusión

Las semillas son el recurso renovable más importante para alimentos, forraje y materia prima industrial, y son ricas en materiales de almacenamiento como el almidón y las proteínas. La morfología y cantidad de células y el contenido y configuración de los materiales de almacenamiento afectan al peso y la calidad de las semillas7,12. Aunque la estareología y la tecnología de análisis de imágenes pueden medir el tamaño y la cantidad de células en una región de teji.......

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Divulgaciones

Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

La financiación fue proporcionada por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (32071927), el Proyecto de Talento de la Universidad de Yangzhou y el Desarrollo del Programa Académico Prioritario de las Instituciones de Educación Superior de Jiangsu.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Ácido acéticoSangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.
Tarro de vidrio compacto (5 plazas)Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.
Coomassie azul brillante R-250Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.
CubreobjetosSangon Biotech (Shanghái) Co., Ltd.
Cuchilla de doble caraGillette Shanghai Co., Ltd.74-S
Absoluto de etanolSangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.
Mesa de aplanamientoLeicaHI1220
Microscopio de fluorescenciaOlympusBX60
Abrillantador fluorescente 28Sigma-Aldrich910090
Tiras de vidrioLeica840031
Solución de glutaraldehído al 50% en aguaSangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.
GlycerolSangon Biotech (Shanghái) Co., Ltd.
YodoSangon Biotech (Shanghái) Co., Ltd.
IsopropanolSangon Biotech (Shanghái) Co., Ltd.
MicroscopioOlympusBX53
LR Resina blancaAgar ScientificAGR1281A
OvenShanghai Jing Hong Laboratory Instrument Co., Ltd.9023A
Yoduro de potasioSangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.
SlideSangon Biotech (Shanghái) Co., Ltd.
PinzasF518101 Sangon Biotech (Shanghái) Co., Ltd.
Fosfato de sodio dibásico dodecahidratoSangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.
Fosfato de sodio monobásico dihidratadoSangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.
UltramicrótomoLeicaEM UC7
A501931E678013A100472F518211A500737A600875A600232A500538A507048 óptico A100512F519022A607793A502805

Referencias

  1. Cai, C., et al. Heterogeneous structure and spatial distribution in endosperm of high-amylose rice starch granules with different morphologies. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 62 (41), 10143-10152 (2014).
  2. He, W., et al.

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Reimpresiones y permisos

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