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Biology

पूरे बीज के आकार राल अनुभाग और उसके अनुप्रयोगों को प्राप्त करने के लिए एक सरल सूखी अनुभाग विधि

Published: January 23, 2021 doi: 10.3791/61822
Automatic Translation
*1,2, *1,2, 1,2, 1,2, 1,2
1Key Laboratory of Crop Genetics and Physiology of Jiangsu Province/Jiangsu Key Laboratory of Crop Genomics and Molecular Breeding, Yangzhou University, 2Co-Innovation Center for Modern Production Technology of Grain Crops of Jiangsu Province/Joint International Research Laboratory of Agriculture & Agri-Product Safety of the Ministry of Education, Yangzhou University
* These authors contributed equally

Summary

यह तकनीक बीज के विभिन्न क्षेत्रों में कोशिकाओं, स्टार्च कणिकाओं और प्रोटीन निकायों के अवलोकन और विश्लेषण के लिए पूरे बीज के आकार के राल अनुभाग की तेज और सरल तैयारी के लिए अनुमति देती है।

Abstract

बीज में कोशिकाओं, स्टार्च कणिकाओं और प्रोटीन निकायों की आकृति विज्ञान, आकार और मात्रा बीज के वजन और गुणवत्ता का निर्धारण करती है। वे बीज के विभिन्न क्षेत्रों के बीच काफी अलग हैं। कोशिकाओं, स्टार्च कणिकाओं और प्रोटीन निकायों की मॉर्फोलोजी को स्पष्ट रूप से देखने के लिए, और मात्रात्मक रूप से उनके आकृति विज्ञान मापदंडों का सही विश्लेषण करने के लिए, पूरे बीज के आकार के अनुभाग की आवश्यकता होती है। हालांकि पूरे बीज के आकार के पैराफिन अनुभाग बीजों में भंडारण सामग्री के संचय की जांच कर सकते हैं, लेकिन मोटी धारा के कम संकल्प के कारण कोशिकाओं और भंडारण सामग्री के आकृति विज्ञान मापदंडों का मात्रात्मक विश्लेषण करना बहुत मुश्किल है। पतली राल अनुभाग में उच्च संकल्प है, लेकिन नियमित राल खंड विधि एक बड़ी मात्रा और उच्च स्टार्च सामग्री के साथ परिपक्व बीजों के पूरे बीज के आकार के खंड को तैयार करने के लिए उपयुक्त नहीं है। इस अध्ययन में, हम पूरे बीज के आकार के राल अनुभाग को तैयार करने के लिए एक सरल शुष्क खंड विधि प्रस्तुत करते हैं। यह तकनीक उच्च स्टार्च सामग्री वाले बड़े बीजों के लिए भी एलआर व्हाइट राल में एम्बेडेड विकासशील, परिपक्व, अंकुरित और पके हुए बीजों के क्रॉस और देशांतर पूरे बीज के आकार के वर्गों को तैयार कर सकती है। पूरे बीज के आकार के खंड को फ्लोरोसेंट ब्राइटनर 28, आयोडीन और कूमासी शानदार नीले R250 के साथ दाग दिया जा सकता है ताकि विशेष रूप से कोशिकाओं, स्टार्च कणिकाओं और प्रोटीन निकायों की आकृति विज्ञान को स्पष्ट रूप से प्रदर्शित किया जा सके। प्राप्त छवि का मात्रात्मक विश्लेषण भी किया जा सकता है ताकि बीज के विभिन्न क्षेत्रों में कोशिकाओं, स्टार्च कणिकाओं और प्रोटीन निकायों के आकृति विज्ञान मापदंडों को दिखाया जा सके।

Introduction

पौधों के बीजों में स्टार्च और प्रोटीन जैसी भंडारण सामग्री होती है और लोगों के लिए ऊर्जा और पोषण प्रदान करते हैं। आकार, आकार, और कोशिका और भंडारण सामग्री की मात्रा बीज के वजन और गुणवत्ता का निर्धारण। बीज के विभिन्न क्षेत्रों में कोशिकाओं और भंडारण सामग्रियों में काफी अलग-अलग मॉर्फोलोजी होते हैं, खासकर कुछ उच्च-एमीलोज अनाज फसलों के लिए स्टार्चब्रांचिंग एंजाइमआईआईबी 1,2,3के अवरोध के साथ। इसलिए, बीज के विभिन्न क्षेत्रों में कोशिकाओं और भंडारण सामग्री की मॉर्फोलोजी की जांच करना बहुत महत्वपूर्ण है।

पैराफिन सेक्शनिंग पूरे बीज के आकार के खंड को तैयार करने के लिए एक अच्छी विधि है और बीज की ऊतक संरचना और बीज4, 5, 6के विभिन्न क्षेत्रों में भंडारण सामग्री के संचय को प्रदर्शित करसकताहै। हालांकि, पैराफिन वर्गों में आमतौर पर कम रिज़ॉल्यूशन के साथ 6-8 माइक्रोन मोटाई होती है; इस प्रकार, सेल और भंडारण सामग्री की आकृति विज्ञान का स्पष्ट रूप से निरीक्षण और मात्रात्मक विश्लेषण करना बहुत मुश्किल है। राल के खंडों में आमतौर पर 1-2 माइक्रोन मोटाई और उच्च संकल्प होता है और यह कोशिका और भंडारण सामग्री की आकृति विज्ञान का निरीक्षण और विश्लेषण करने के लिए बहुत उपयुक्त होते हैं7. हालांकि, नियमित राल खंड विधि पूरे बीज के आकार के खंड को तैयार करने में कठिनाई होती है, विशेष रूप से बड़ी मात्रा और उच्च स्टार्च सामग्री वाले बीजों के लिए; इस प्रकार, बीज के विभिन्न क्षेत्रों में कोशिकाओं और भंडारण सामग्री की आकृति विज्ञान का निरीक्षण और विश्लेषण करने का कोई तरीका नहीं है। एलआर व्हाइट राल एक ऐक्रेलिक राल है और कम चिपचिपाहट और मजबूत पारमशीलता प्रदर्शित करता है, जिससे बीजों के राल अनुभाग को तैयार करने में इसके अच्छे अनुप्रयोग होते हैं, विशेष रूप से बड़ी मात्रा और उच्च स्टार्च सामग्री के साथ अनाज परिपक्व गुठली के लिए। इसके अलावा, एलआर व्हाइट राल में एम्बेडेड नमूने को प्रकाश या फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप7के तहत कोशिकाओं और भंडारण सामग्री की आकृति को स्पष्ट रूप से प्रदर्शित करने के लिए कई रासायनिक रंगों के साथ आसानी से दाग दिया जा सकता है। हमारे पिछले कागज में, हम परिपक्व अनाज राल में एंबेडेड के पूरे बीज के आकार के वर्गों को तैयार करने के लिए एक सूखी खंड विधि की सूचना दी है । विधि भी विकसित, अंकुरित और पकाया अनाज गिरी8के पूरे बीज के आकार के खंड तैयार कर सकते हैं । प्राप्त पूरे बीज के आकार के खंड में माइक्रोमॉर्फोलॉजी अवलोकन और विश्लेषण में कई अनुप्रयोग हैं, विशेष रूप से बीज8,9के विभिन्न क्षेत्रों में कोशिका और भंडारण सामग्री के आकृतिविज्ञान मतभेदों को स्पष्ट रूप से देखने और मात्रात्मक रूप से विश्लेषण करने के लिए।

यह तकनीक शोधकर्ताओं के लिए उपयुक्त है जो हल्के माइक्रोस्कोप का उपयोग करके बीज के विभिन्न क्षेत्रों में ऊतक के सूक्ष्म संरचना और कोशिकाओं, स्टार्च कणिकाओं और प्रोटीन निकायों के आकार और आकार का निरीक्षण करना चाहते हैं। कोशिकाओं, स्टार्च कणिकाओं, और प्रोटीन निकायों के प्रदर्शन के लिए विशेष रूप से दाग पूरे बीज के आकार के वर्गों की छवियों को बीज के विभिन्न क्षेत्रों में कोशिकाओं, स्टार्च कणिकाओं और प्रोटीन निकायों के आकृति विज्ञान मापदंडों को मात्रात्मक रूप से मापने के लिए आकृति विज्ञान विश्लेषण सॉफ्टवेयर द्वारा विश्लेषण किया जा सकता है। तकनीकी प्रयोज्यता और पूरे बीज के आकार के खंड अनुप्रयोगों को प्रदर्शित करने के लिए, हमने इस अध्ययन में मक्का और तिलहन बलात्कार के परिपक्व बीजों और चावल के विकासशील, अंकुरित और पकाई गई गुठली की जांच की है । प्रोटोकॉल में चार प्रक्रियाएं होती हैं। यहां, हम परिपक्व मक्का गिरी का उपयोग करते हैं, जो बड़ी मात्रा और उच्च स्टार्च सामग्री के कारण पूरे बीज के आकार के वर्गों को तैयार करने में सबसे कठिन है, एक नमूने के रूप में कदम से कदम प्रक्रियाओं को प्रदर्शित करने के लिए ।

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Protocol

1. राल एम्बेडेड बीज की तैयारी (चित्रा 1)

  1. 48 घंटे के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर 2.5% फॉस्फेट-बफर ग्लूटारल्डिहाइड (0.1 एम, पीएच 7.2) के 10 एमएल में छह मक्का परिपक्व गुठली को ठीक करें। शोधकर्ता अपने शोध उद्देश्यों और ऊतक प्रकारों के अनुसार अन्य फिक्सिव मिश्रण, फिक्सेटिव सांद्रता और निर्धारण की स्थिति चुन सकते हैं।
  2. गुठली निकालें और उन्हें एक तेज डबल-तरफा ब्लेड का उपयोग करके 2-3 मिमी मोटाई के लिए देशांतर या ट्रांसवर्ल रूप से टुकड़ा करें, और उन्हें 2.5% फॉस्फेट-बफर ग्लूटारल्डिहाइड (0.1 एम, पीएच 7.2) के 10 एमएल में फिर से 48 एच के लिए ठीक करें।
  3. हर बार 30 मिनट के लिए 0.1 मीटर फॉस्फेट बफर (पीएच 7.2) के 10 एमएल के साथ नमूनों को तीन बार धोएं।
  4. इथेनॉल जलीय समाधान (10 मिलीएल) के ग्रेड को 30% से बढ़ाकर 50%, 70%, 90% एक बार, और हर बार 30 मिनट के लिए 100% तीन बार के ग्रेड को निर्जलित करें।
  5. 10 एमएल में नमूनों में घुसपैठ एलआर व्हाइट राल समाधान के ग्रेड में 25% से 50%, 75% एक बार, और 100% दो बार 4 डिग्री सेल्सियस पर 12 घंटे के लिए हर बार पतला।
  6. एम्बेड करने से पहले नमूनों के लिए आसन तैयार करें। 2-एमएल सेंट्रलाइज ट्यूब में 100% एलआर व्हाइट राल का 0.25 एमएल जोड़ें, और इसे 48 घंटे के लिए 60 डिग्री सेल्सियस पर पॉलीमराइज करें।
  7. क्रमिक रूप से शुद्ध एलआर व्हाइट राल (0.5 एमएल) और एक आसन के साथ अपकेंद्रित्र ट्यूब में घुसपैठ नमूना जोड़ें। नमूनों को शारीरिक सुई से सीधा करें, और उन्हें 48 घंटे के लिए ओवन में 60 डिग्री सेल्सियस पर पॉलीमराइज करें।

2. पूरे बीज के आकार के खंड को तैयार करने के लिए शुष्क खंड(चित्रा 1)

  1. अपकेंद्रित्र ट्यूब से एम्बेडेड गुठली बाहर ले लो और एक तेज ब्लेड का उपयोग कर नमूना चारों ओर अतिरिक्त राल बाहर काट दिया ।
  2. अल्ट्रामाइक्रोएम (ईएम यूसी7) के नमूना धारक में राल ब्लॉक को दबाएं, और नमूने की सतह पर और ब्लेड के साथ नमूने के आसपास अनावश्यक राल को ट्रिम करें।
  3. एक पूरा खंड बनने तक एक ग्लास चाकू के साथ बारीक नमूने की सतह पॉलिश करें।
  4. काटने से पहले ब्लेड किनारे के ऊपर 2 मिमी के बारे में एक छोटे से तांबे हुक रखो और एक 2 μm अनुभाग में नमूना काट दिया । हुक की भूमिका अनुभाग के ऊपर की ओर कर्लिंग से बचने के लिए है।
  5. अनुभाग लंबा हो जाता है जब इसे समर्थन करने के लिए अनुभाग के तहत हुक रखो।
  6. एक पूर्वपचारित स्लाइड पर 100 माइक्रोन पानी जोड़ें, और ध्यान से चिमटी के साथ पानी के लिए पूर्ण और अटूट अनुभाग स्थानांतरित करें।
  7. झुर्रियों वाले सेक्शन को चिकना करने के लिए, गर्मी और रात 50 डिग्री सेल्सियस पर सपाट मेज पर नमूना सूखी।
    1. यदि अनुभाग टूटने या आंसू हो जाता है, तो नमूने की प्रत्येक राल घुसपैठ के लिए समय 12 घंटे से 24 घंटे या 48 घंटे तक बढ़ाएं।
    2. यदि अनुभाग में चाकू के समानांतर कुछ लाइनें हैं, तो नमूना ब्लॉक को कसकर दबाएं। यदि अनुभाग में चाकू के लिए कुछ लाइनें ऊर्ध्वाधर हैं, तो कृपया एक नए चाकू का उपयोग करें।

3. धारा का धुंधला और अवलोकन

नोट: कोशिकाओं, स्टार्च कणिकाओं और प्रोटीन निकायों की ऊतक संरचना और आकृति विज्ञान का निरीक्षण करने के लिए, अनुसंधान के उद्देश्य के अनुसार विशिष्ट दाग के साथ वर्गों को दाग दें। यहां, हम क्रमशः सेल दीवारों, स्टार्च कणिकाओं और प्रोटीन निकायों को दाग देने के लिए फ्लोरोसेंट ब्राइटनर 28, आयोडीन समाधान और कूमासी शानदार नीले R250 का उपयोग करते हैं।

  1. कोशिकाओं की आकृति विज्ञान को देखने के लिए, 10 मिनट के लिए 45 डिग्री सेल्सियस पर 70 एमएल कॉम्पैक्ट ग्लास धुंधला जार में 0.1% (w/v) फ्लोरोसेंट ब्राइटनर 28 जलीय समाधान के 40 एमएल के साथ अनुभाग को दाग दें, और फिर इसे 5 मिनट के लिए पानी के साथ कुल्ला करें। सीसीडी कैमरे से लैस फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोप के तहत अनुभाग का निरीक्षण और फोटोग्राफ करें।
  2. स्टार्च कणिकाओं की आकृति विज्ञान को देखने के लिए, आयोडीन समाधान (0.07% (w/v) I2 और 0.14% (w/v) KI के 40 माइक्रोन के साथ खंड को 1 मिनट के लिए 25% (v/v) ग्लिसरोल में दाग दें, और एक कवर के साथ आयोडीन समाधान युक्त नमूना कवर करें। सीसीडी कैमरे से लैस हल्के माइक्रोस्कोप के नीचे नमूने को देखें और फोटोग्राफ करें।
  3. प्रोटीन निकायों की आकृति विज्ञान को देखने के लिए, 45 डिग्री सेल्सियस पर 10 मिनट के लिए 70 एमएल कॉम्पैक्ट ग्लास धुंधला जार में 10% (v/v) एसिटिक एसिड के 40 एमएल के साथ अनुभाग विसर्जित करें, और फिर इसे 1% (w/v) कूमासी ब्रिलियंट ब्लू R250 के 40 एमएल में 25% (v/v) आइसोप्रोपेनॉल और 10% (v/v) एसिटिक एसिड में 15 मिनट के लिए 45 डिग्री सेल्सियस पर दाग । दाग वाले वर्गों को 5 मिनट के लिए बहते पानी से धोएं, और इसे सुखा लें। सीसीडी कैमरे से लैस हल्के माइक्रोस्कोप के नीचे अनुभाग का निरीक्षण और फोटोग्राफ करें।

4. आकृति विज्ञान मापदंडों का मात्रात्मक विश्लेषण

  1. प्रक्रिया और मात्रात्मक रूप से क्षेत्र के लिए फोटो छवियों का विश्लेषण, लंबी/छोटी धुरी, और कोशिकाओं की गोलाई, स्टार्च कणिकाओं, और प्रोटीन निकायों के बीज के विभिन्न क्षेत्रों में आकृति विज्ञान विश्लेषण सॉफ्टवेयर (छवि-प्रो प्लस ६.० सॉफ्टवेयर) का उपयोग कर Zhao et al.9 बिल्कुल की प्रक्रियाओं का पालन ।

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Representative Results

एक पूरे बीज के आकार के खंड को प्राप्त करने के लिए सरल शुष्क अनुभाग विधि
हम एलआर-व्हाइट राल(चित्रा 1)में एम्बेडेड बीज के एक पूरे बीज के आकार के खंड को तैयार करने के लिए एक सरल शुष्क खंड विधि स्थापित करते हैं। विधि ट्रांसवर्सल और देशांतर पूरे बीज के आकार के वर्गों को 2 माइक्रोन(चित्रा 2-5,अनुपूरक चित्रा 1-4)की मोटाई के साथ तैयार कर सकती है। उदाहरण के लिए, तिलहन बलात्कार के परिपक्व बीज को ट्रांसवर्ण और देशांतर(चित्रा 2)अनुभागित किया जा सकता है। अनाज फसलों के लिए, उनकी परिपक्व गुठली स्टार्च कणिकाओं से भरी हुई होती है, जिसके कारण पूरे बीज के आकार के खंड को तैयार करना बहुत मुश्किल होता है। वर्तमान तकनीक का उपयोग करते हुए, बड़ी मात्रा के साथ परिपक्व मक्का के ट्रांसवर्सल और अनुदैर्ध्य संपूर्ण बीज आकार के वर्गों को भी तैयार किया जा सकता है(चित्रा 4,अनुपूरक चित्रा 1)। इसके अलावा, विकासशील गिरी(अनुपूरक चित्रा 2),अंकुरित गिरी(अनुपूरक चित्रा 3)और चावल की पकी हुई गिरी(अनुपूरक चित्रा 4)विधि का उपयोग करके जांच की जा सकती है ।

पूरे बीज के आकार के अनुभाग के आवेदन
बीज की ऊतक संरचना का अवलोकन
बीज के आकार के खंड का उपयोग बीजों की ऊतक संरचना का निरीक्षण करने के लिए किया जा सकता है। उदाहरण के लिए, तिलहन बलात्कार के भ्रूण में रेडिकल, हाइपोकॉइल, प्लंयूल और दो कोटिलेडन होते हैं। आंतरिक और बाहरी कोटिलेडॉन आधे में झुक जाते हैं, हाइपोकोटिल और रेडिकल को लपेटते हैं और भ्रूण गोलाकार(चित्रा 2 ए,सी)बनाते हैं। देशांतर और ट्रांसवर्सल पूरे भ्रूण के आकार के वर्गों को साफरानिन से सना हुआ स्पष्ट रूप से रेडिकल, हाइपोकोटाइल, इनर कोटिलेडन और बाहरी कोटिलेडन(चित्रा 2 बी,डी)प्रदर्शित किया गया। तिलहन बलात्कार के देशांतर पूरे भ्रूण आकार के खंड को ट्रांसवर्सल सेक्शन की तुलना में अधिक कठिनत तैयार किया जाता है । इसलिए, भ्रूण के ट्रांसवर्सल वर्गों का व्यापक रूप से उपयोग5,10के संदर्भ में भ्रूण की सूक्ष्मरूप विज्ञान की जांच करने के लिए किया जाता है।

बीज के विभिन्न क्षेत्रों में कोशिकाओं की आकृति विज्ञान और विश्लेषण
पूरे बीज के आकार के खंड का उपयोग बीज के विभिन्न क्षेत्रों में कोशिकाओं की आकृति विज्ञान का निरीक्षण और विश्लेषण करने के लिए किया जा सकता है। उदाहरण के लिए, तिलहन बलात्कार के ट्रांसवर्सल पूरे भ्रूण के आकार के वर्गों को फ्लोरोसेंट ब्राइटनर 28 से दाग दिया गया था, और सेल की दीवारों को विशेष रूप से दाग दिया गया था(चित्र 3 ए)। भ्रूण के किसी भी क्षेत्र में कोशिकाओं की माइक्रोमॉर्फोलॉजी को उच्च आवर्धन(चित्रा 3 बी,सी)पर स्पष्ट रूप से प्रदर्शित किया जा सकता है। रेडिकल में एपिडर्म, कॉर्टेक्स और वैस्कुलर ऊतक होते हैं। रेडिकल की सबसे बाहरी परत में स्थित एपिडर्मल कोशिकाओं को आयताकार और मूल रूप से व्यवस्थित किया गया था। कॉर्टिकल पैरेन्चिमा कोशिकाएं आकार में गोल और आकार में बड़ी थीं। कॉर्टिकल कोशिकाओं के बीच कुछ अलग-अलग स्थान देखे गए। कॉर्टिकल कोशिकाओं को अंदर से बाहर(चित्रा 3B)तक परतों में व्यवस्थित किया गया था। कोटिलेडन की एपिडर्मल कोशिकाएं वर्ग थीं और इसमें छोटी मात्रा थी। भीतरी और बाहरी कोटिलेडोन की बाहरी और भीतरी सतहों के बीच एपिडर्मल कोशिकाओं के आकार और आकार में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं था। कुछ संवहनी सिलेंडर भीतरी और बाहरी कोटिलेडोन के मेसोफिल ऊतकों के बीच में बिखरे हुए थे। मेसोफिल पैरेन्चिमा कोशिकाएं कोटिलेडन में एपिडर्मल कोशिकाओं और संवहनी सिलेंडर कोशिकाओं की तुलना में काफी बड़ी थीं। मेसोफिल पैरेन्चिमा कोशिकाओं ने बाहरी कोटिलेडॉन के भीतरी क्षेत्र और आंतरिक कोटिलेडन(चित्रा 3सी)के बाहरी क्षेत्र में एक विशिष्ट पैलिसेडिंग व्यवस्था दिखाई। परेंचिमा कोशिकाओं में भ्रूण के विभिन्न क्षेत्रों में काफी अलग मॉर्फोलोजी थे। आकृति विज्ञान में अपने मतभेदों को प्रकट करने के लिए, क्षेत्र 1, 2, 3, 4, और 5 को रेडिकल कॉर्टिकल ऊतक, आंतरिक कोटाइलडन के भीतरी क्षेत्र, आंतरिक कोटिलेडॉन के बाहरी क्षेत्र, बाहरी कोटिलेडॉन के भीतरी क्षेत्र और बाहरी कोटिलेडॉन के बाहरी क्षेत्र(चित्रा 3B,सी)में चुना गया था। उपरोक्त 5 क्षेत्रों में परेंचिमा कोशिकाओं के आकृति विज्ञान मापदंडों का मात्रात्मक रूप से आकृति विज्ञान विश्लेषण सॉफ्टवेयर(अनुपूरक तालिका 1)का उपयोग करके विश्लेषण किया गया था। क्षेत्र, लंबी धुरी लंबाई, छोटी धुरी लंबाई, और परेंचिमा कोशिकाओं की गोलाई भ्रूण के विभिन्न क्षेत्रों में कुछ अंतर दिखाया ।

एंडोस्पर्म में कोशिकाएं स्टार्च और स्टोरेज प्रोटीन से भरी हुई थीं । पूरे बीज के आकार के राल अनुभाग का उपयोग करके, एंडोस्पर्म के विभिन्न क्षेत्रों में कोशिकाओं को देखना और विश्लेषण करना आसान है। उदाहरण के लिए, मक्का एंडोस्पर्म के किसी भी क्षेत्र में कोशिकाओं की आकृति विज्ञान को ट्रांसवर्सल पूरे बीज के आकार के वर्गों के फ्लोरोसेंट ब्राइटनर 28 से दाग दिए जाने के बाद स्पष्ट रूप से देखा जा सकता है। एक ही गिरी में परिधीय, मध्य और केंद्रीय एंडोस्पर्म ने कोशिकाओं के आकार(अनुपूरक चित्रा 1)को काफी अलग-अलग आकारों और आकारों का प्रदर्शन किया। एंडोस्पर्म के विभिन्न क्षेत्रों में कोशिकाओं के आकृति विज्ञान मापदंडों का मात्रात्मक रूप से विश्लेषण करने के लिए, आकृति विज्ञान विश्लेषण सॉफ्टवेयर का उपयोग करके क्षेत्रों की छवियों का विश्लेषण किया गया; कोशिकाओं के आकृति विज्ञान मापदंडों अनुपूरक तालिका 2में प्रस्तुत कर रहे हैं . क्षेत्र 1 में एंडोस्पर्म कोशिकाओं में चार क्षेत्रों के बीच सबसे छोटा क्षेत्र था, क्षेत्र में वे 2 क्षेत्र 3 में उन लोगों की तुलना में बड़े थे, लेकिन 4 क्षेत्र में उन लोगों की तुलना में छोटे ।

बीज के विभिन्न क्षेत्रों में स्टार्च कणिकाओं का आकृति विज्ञान और विश्लेषण
अधिकांश पौधे संसाधनों से परिपक्व बीज, विशेष रूप से अनाज फसलों के लिए, उच्च स्टार्च सामग्री होते हैं। ग्रेन्यूल आकृति विज्ञान और स्टार्च के आकार का स्टार्च गुणों पर महत्वपूर्ण प्रभाव पड़ता है और बीज की गुणवत्ता में भूमिका निभाते हैं। बीज के राल खंड को बीज के विभिन्न क्षेत्रों में स्टार्च कणिकाओं की आकृति विज्ञान को प्रदर्शित करने के लिए आयोडीन समाधान से दाग दिया जा सकता है। उदाहरण के लिए, मक्का के ट्रांसवर्सल और देशांतर पूरे बीज के आकार के वर्गों को सफलतापूर्वक तैयार किया गया था । आयोडीन से सना वर्गों स्टार्च(चित्रा 4)की आकृति विज्ञान का प्रदर्शन किया । एंडोस्पर्म के विभिन्न क्षेत्रों में स्टार्च कणिका की आकृति विज्ञान दिखाने के लिए, चार क्षेत्रों और नौ क्षेत्रों को क्रमशः ट्रांसवर्सल और देशांतर पूरे बीज के आकार के वर्गों में चुना गया(चित्र 4)। विभिन्न क्षेत्रों में स्टार्च कणिकाओं ने एंडोस्पर्म कोशिकाओं में काफी अलग आकृति विज्ञान, आकार और मात्रा दिखाई। ट्रांसवर्सल सेक्शन के लिए, क्षेत्र 1 में गोलाकार स्टार्च कणिकाएं थीं, क्षेत्र 2 में बहुभुज कणिकाएं थीं, और दोनों क्षेत्रों में स्टार्च कणिकाएं 3 और 4 गोलाकार थीं। देशांतर खंड के लिए, 1, 4, 5 और 8 क्षेत्रों में बहुभुज आकार के साथ स्टार्च कणिकाएं 3, 7 और 9 क्षेत्रों में गोलाकार आकार वाले लोगों की तुलना में बड़ी थीं, और 2 और 6 क्षेत्रों में कुछ यौगिक स्टार्च कणिकाएं देखी गईं।

ट्रांसवर्सल सेक्शन के चार क्षेत्रों में स्टार्च कणिकाओं के रूपात्मक मापदंडों का मात्रात्मक विश्लेषण अनुपूरक तालिका 3में दिखाया गया था । क्षेत्र 1 में स्टार्च कणिकाओं का सबसे छोटा आकार था, क्षेत्र 2 में उन लोगों का सबसे बड़ा आकार था, और क्षेत्र 3 में वे 4 क्षेत्र की तुलना में बड़े थे।

बीज के विभिन्न क्षेत्रों में प्रोटीन निकायों की माइक्रोमॉर्फोलॉजी और विश्लेषण
उच्च भंडारण प्रोटीन के साथ पूरे बीज के आकार के खंड का उपयोग बीज के विभिन्न क्षेत्रों में प्रोटीन निकायों की आकृति विज्ञान को विकृत और विश्लेषण करने के लिए किया जा सकता है। उदाहरण के लिए, तिलहन बलात्कार के भ्रूण के ट्रांसवर्सल सेक्शन को कूमासी ब्रिलियंट ब्लू R250 से सना हुआ था, और स्टोरेज प्रोटीन को नीला(चित्रा 5)दाग दिया गया था। भ्रूण में भंडारण प्रोटीन के स्थानिक वितरण को कम आवर्धन(चित्रा 5A)पर स्पष्ट रूप से देखा जा सकता है। स्टोरेज प्रोटीन शरीर में मौजूद होता है। उच्च आवर्धन में, प्रोटीन शरीर ने कुछ काले कणिकाओं और कुछ अन दागदार पारदर्शी संरचना(चित्रा 5B)के साथ एक विषम मैट्रिक्स का प्रदर्शन किया। बीज में प्रोटीन निकायों में तीन प्रकार होते हैं: पहले प्रकार में एक सजातीय प्रोटीन मैट्रिक्स होता है और इसमें कोई समावेशन नहीं होता है, दूसरे प्रकार में गोलाकार क्रिस्टल होते हैं, और तीसरे प्रकार में गोलाकार क्रिस्टल और छद्म क्रिस्टल11होते हैं। प्रोटीन शरीर में गोलाकार क्रिस्टल फाइटेट और अन्य अकार्बनिक लवणों से बने होते हैं, जो दाग नहीं होते हैं। ये गोलाकार क्रिस्टल काले होते हैं जिसके कारण प्रकाश माइक्रोस्कोप के नीचे उनके माध्यम से नहीं गुजर सकता है। इसके अलावा, गोलाकार क्रिस्टल नाजुक और सुधारक और एम्बेडिंग एजेंट द्वारा प्रवेश करना मुश्किल है। जब अनुभाग बनाते हैं, गोलाकार क्रिस्टल कभी-कभी फट जाते हैं, जिसके परिणामस्वरूप प्रोटीन शरीर के अंदर एक पारदर्शी गुहा11 होताहै। तिलहन बलात्कार भ्रूण के प्रोटीन शरीर में इसके माइक्रोमॉर्फोलॉजी(चित्रा 5B)के अनुसार गोलाकार क्रिस्टल होते हैं । भ्रूण में प्रोटीन निकायों के स्थानिक वितरण की जांच करने के लिए, पूरे भ्रूण के आकार के खंड में पांच क्षेत्रों को रेडिकल कॉर्टिकल ऊतक, आंतरिक कोटाइलडन के भीतरी क्षेत्र, आंतरिक कोटिलेडॉन के बाहरी क्षेत्र, बाहरी कोटिलेडॉन के भीतरी क्षेत्र और बाहरी कोटिलेडॉन(चित्रा 5A,सी-जी)का प्रतिनिधित्व करने के लिए चुना गया था। भ्रूण के सभी क्षेत्रों में प्रोटीन शरीर गोलाकार, अंडाकार, और आकार में अनियमित थे(चित्रा 5C-G)।

उपरोक्त चुने हुए पांच क्षेत्रों में एपिडर्मिस के करीब पहली और दूसरी में प्रोटीन निकायों का मात्रात्मक विश्लेषण अनुपूरक तालिका 4में प्रस्तुत किया जाता है । प्रोटीन शरीर के क्षेत्र में चुने हुए पांच क्षेत्रों के बीच मामूली अंतर था। अन्य चार क्षेत्रों की तुलना में बाहरी कोटाइलडन के बाहरी क्षेत्र में प्रोटीन शरीर की गोलाई काफी कम थी, जो बाहरी कोटिलेडन में प्रोटीन शरीर को क्षेत्र के करीब था। कोशिका में प्रोटीन शरीर की संख्या और क्षेत्र सूचकांक कोटिलेडन परेंचिमा सेल(अनुपूरक तालिका 4)की तुलना में रेडिकल पैरान्चिमा सेल में काफी अधिक था।

Figure 1
चित्रा 1:शुष्क खंड विधि का उपयोग करके पूरे बीज के आकार के राल सेथिन अनुभाग की तैयारी। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 2
चित्रा 2:तिलहन बलात्कार किस्म Huashuang 5 के परिपक्व बीज में भ्रूण की ऊतक संरचना । (A)भ्रूण की आकृति विज्ञान। (ख)देशांतर पूरे भ्रूण के आकार के खंड की ऊतक संरचना । (ग)ट्रांसवर्सल पूरे भ्रूण आकार के खंड की आकृति विज्ञान । (घ)ट्रांसवर्सल पूरे भ्रूण आकार के खंड की ऊतक संरचना । धाराओं पर सैफरिन दाग रहे थे। एच, हाइपोकोटिल; आईसी, इनर कोटिलेडॉन; ओसी, बाहरी कोटिलेडॉन; आर, रेडिकल। स्केल बार = 1 मिमी. कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 3
चित्रा 3:तिलहन बलात्कार विविधता Huashuang 5 के भ्रूण में कोशिकाओं की आकृति विज्ञान । (क)ट्रांसवर्सल पूरे भ्रूण के आकार के खंड फ्लोरोसेंट ब्राइटनर 28 के साथ दाग । (ख)क्षेत्र बी इन(ए)का प्रवर्धन, जो कोशिका आकृति विज्ञान और रेडिकल की ऊतक संरचना को दिखाता है। (ग)क्षेत्र सी इन(ए)का प्रवर्धन, आंतरिक और बाहरी कोटिलेडन की कोशिका आकृति विज्ञान और ऊतक संरचना को दिखाता है। स्केल बार = 500 माइक्रोन के लिए(ए)और 100 माइक्रोन के लिए(बी, सी)। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 4
चित्रा 4:मक्का किस्म झेंग 58 की परिपक्व गिरी में स्टार्च कणिकाओं की आकृति विज्ञान। ट्रांसवर्सल (ए)और देशांतर(बी)पूरे बीज के आकार के वर्गों को आयोडीन समाधान से सना हुआ था, और उनके क्षेत्रीय प्रवर्धन एंडोस्पर्म के विभिन्न क्षेत्रों में स्टार्च कणिकाओं की आकृति विज्ञान प्रदर्शित करते हैं। स्केल बार = पूरे बीज के आकार के खंड के लिए 1 मिमी और क्षेत्रीय प्रवर्धन के लिए 20 माइक्रोन। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 5
चित्रा 5:तिलहन बलात्कार विविधता Huashuang 5 के भ्रूण में प्रोटीन शरीर की आकृति विज्ञान । (A)ट्रांसवर्सल पूरे भ्रूण के आकार के खंड Coomassie शानदार नीले R250 के साथ दाग । (ख)प्रोटीन निकायों का प्रवर्धन, उनके माइक्रोस्ट्रक्चर को दिखाता है । (C-G) क्षेत्र सी-जी(ए)का प्रवर्धन, रेडिकल(सी),आंतरिक कोटिलेडॉन(डी),आंतरिक कोटिलेडॉन(ई),बाहरी कोटिलेडॉन(एफ),आंतरिक कोटिलेडन(जी)के बाहरी क्षेत्र के भीतरी क्षेत्र में प्रोटीन शरीर की आकृति विज्ञान दिखाता है। स्केल बार = 500 माइक्रोन के लिए(ए),5 माइक्रोन के लिए(बी)और 50 माइक्रोन के लिए(सी-जी)। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

अनुपूरक चित्रा1: मक्का किस्म झेंग 58 की परिपक्व गिरी में कोशिकाओं की आकृति विज्ञान। ट्रांसवर्सल होल-सीड-आकार के खंड को फ्लोरोसेंट ब्राइटनर 28 से दाग दिया गया था, और इसके क्षेत्रीय प्रवर्धन (1-4) एंडोस्पर्म के विभिन्न क्षेत्रों में एंडोस्परम कोशिकाओं की आकृति विज्ञान प्रदर्शित करते हैं। स्केल बार = पूरे बीज के आकार के खंड के लिए 1 मिमी और क्षेत्रीय प्रवर्धन के लिए 100 माइक्रोन। इस फाइल को डाउनलोड करने के लिए यहां क्लिक करें।

अनुपूरक चित्र2- चावल की किस्म 9311 के विकास की आकृति विज्ञान। फूल (डीएएफ) के बाद विभिन्न दिनों में ट्रांसवर्सल होल-सीड आकार के सेक्शन सैफरानिन ओ और आयोडीन समाधान से दागदार थे। स्केल बार = 0.5 मिमी. कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहां क्लिक करें।

अनुपूरक चित्र 3: चावल की किस्म ते-किंग के अंकुरित गिरी की आकृति विज्ञान। आत्मसात होने के 8 दिनों के बाद देशांतर पूरे बीज के आकार के खंड को आवधिक एसिड-शिफ और टोलुइटीन ब्लू ओ के साथ दाग दिया गया था, और इसके क्षेत्रीय प्रवर्धन बीज के विभिन्न क्षेत्रों में एंडोस्पर्म के आकृति विज्ञान परिवर्तन प्रदर्शित करते हैं। स्केल बार = 20 माइक्रोन करें इस फाइल को डाउनलोड करने के लिए यहां क्लिक करें।

अनुपूरक चित्र4: चावल की किस्म ते-चिंग की पकी हुई गिरी की आकृति विज्ञान। ट्रांसवर्सल होल-सीड-आकार के सेक्शन को आयोडीन समाधान से सना हुआ था, और इसके बाहरी, मध्य और आंतरिक क्षेत्र प्रवर्धन 0, 10, 20 और 30 मिनट के लिए खाना पकाने की प्रक्रिया के दौरान बीज में स्टार्च कणिकाओं के आकृति विज्ञान परिवर्तन प्रदर्शित करते हैं। स्केल बार = 20 माइक्रोन करें इस फाइल को डाउनलोड करने के लिए यहां क्लिक करें।

अनुपूरक तालिका 1: तिलहन बलात्कार भ्रूण के विभिन्न क्षेत्रों में कोशिकाओं के आकृति विज्ञान मापदंडोंएक कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहां क्लिक करें ।

क डेटा का अर्थ है ± मानक विचलन(एन = 3), और विभिन्न अक्षरों वाले एक ही कॉलम में मूल्य काफी अलग हैं(पी एंड एलटी; 0.05)।

ख क्षेत्रों को चित्र 3बी,सी में दिखाया गयाहै।

ग लाल: लंबी धुरी लंबाई; साल: छोटी धुरी लंबाई; गोलाई: (परिधि 2)/(4×π×क्षेत्र) ।

अनुपूरक तालिका 2: मक्का एंडोस्पर्म के विभिन्न क्षेत्रों में कोशिकाओं के आकृति विज्ञान पैरामीटरइस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहां क्लिक करें।

क डेटा का अर्थ है ± मानक विचलन(एन = 3)। विभिन्न अक्षरों वाले एक ही कॉलम में मान काफी अलग हैं(पी एंड एलटी; 0.05)।

ख इन क्षेत्रों को अनुपूरक चित्र 1में मक्का गिरी के ट्रांसवर्सल खंड में दिखाया गया है ।

ग लाल: लंबी धुरी लंबाई; साल: छोटी धुरी लंबाई; गोलाई: (परिधि 2)/(4×π×क्षेत्र) ।

अनुपूरक तालिका 3: मक्का एंडोस्पर्म के विभिन्न क्षेत्रों में स्टार्च कणिकाओं के आकृति विज्ञान पैरामीटरइस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहां क्लिक करें।

क डेटा का अर्थ है ± मानक विचलन(एन = 3)। विभिन्न अक्षरों वाले एक ही कॉलम में मान काफी अलग हैं(पी एंड एलटी; 0.05)।

ख इन क्षेत्रों को मक्का गिरी के ट्रांसवर्सल खंड में चित्र 4 ए में दिखाया गया है।

ग लाल: लंबी धुरी लंबाई; साल: छोटी धुरी लंबाई; गोलाई: (परिधि 2)/(4×π×क्षेत्र) ।

अनुपूरक तालिका 4: तिलहन बलात्कार भ्रूण के विभिन्न क्षेत्रों में प्रोटीन निकायों के आकृति विज्ञान मापदंडोंएक कृपया इस मेज डाउनलोड करने के लिए यहां क्लिक करें ।

क डेटा का अर्थ है ± मानक विचलन(एन = 3), और विभिन्न अक्षरों वाले एक ही कॉलम में मूल्य काफी अलग हैं(पी एंड एलटी; 0.05)।

ख क्षेत्रों को चित्र 5 में दिखाया गयाहै ।

ग गोलाई: (परिधि 2)/(4×π×क्षेत्र); एरिया इंडेक्स प्रोटीन बॉडी से सेल का एरिया रेशियो होता है।

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Discussion

बीज भोजन, चारा, और औद्योगिक कच्चे माल के लिए सबसे महत्वपूर्ण नवीकरणीय संसाधन हैं, और स्टार्च और प्रोटीन जैसे भंडारण सामग्री में समृद्ध हैं । कोशिकाओं की आकृति विज्ञान और मात्रा और भंडारण सामग्री की सामग्री और विन्यास बीजों के वजन और गुणवत्ता को प्रभावित करते हैं7, 12,12. हालांकि स्टीरियोलॉजी और छवि विश्लेषण प्रौद्योगिकी एक ऊतक क्षेत्र में कोशिकाओं के आकार और मात्रा को माप सकते हैं, वे कई प्रयोगशालाओं में कमी है । पैराफिन और राल वर्ग एक दो आयामी (2D) तस्वीर देते हैं, जिससे कोशिकाओं के सही आकार और मात्रा का विश्लेषण करने में कोई रास्ता नहीं होता है। हालांकि, कोशिकाओं को उनके किसी भी विमान में बेतरतीब ढंग से काटा जाता है, ऊतक क्षेत्र के कम से कम तीन विभिन्न वर्गों से कई कोशिकाओं (100 से अधिक) का औसत आकार कोशिकाओं के 2डी आकृति विज्ञान मापदंडों (लंबाई, चौड़ाई और क्षेत्र) को प्रतिबिंबित कर सकता है, और सेल क्षेत्र का मतलब चुने गए क्षेत्र क्षेत्र का अनुपात कोशिकाओं की मात्रा को प्रतिबिंबित कर सकता है। इसलिए, बीज के विभिन्न क्षेत्रों में कोशिकाओं और भंडारण सामग्री की आकृति विज्ञान को देखने और विश्लेषण करने के लिए यह बहुत महत्वपूर्ण है। पैराफिन सेक्शन पूरे बीज के आकार के खंड को तैयार करने के लिए सबसे उपयुक्त है, विशेष रूप से बड़े आकार के बीज7के लिए। हालांकि, कोशिकाओं बीज विकास के साथ भंडारण सामग्री से भरे हुए हैं, जिसके कारण यह है कि देर से विकसित बीज और परिपक्व बीजों से अच्छे पूरे बीज के आकार के खंड को प्राप्त करने में बहुत मुश्किल है। इसके अलावा, पैराफिन अनुभाग स्पष्ट रूप से आकृति विज्ञान प्रदर्शित करने के लिए बहुत मोटा है, और केवल बीज7की ऊतक संरचना की जांच के लिए उपयुक्त है।

राल अनुभाग पतला है, और कोशिकाओं, स्टार्च कणिकाओं, और प्रोटीन निकायों की आकृति विज्ञान स्पष्ट रूप से7प्रदर्शित कर सकते हैं। हालांकि, नियमित राल पूरे बीज के आकार के खंड के लिए उपयुक्त नहीं है। यहां प्रस्तुत की गई तकनीक प्रकाश माइक्रोस्कोपी(चित्रा 2-5,अनुपूरक चित्रा 1)का उपयोग करके बीज के विभिन्न क्षेत्रों में कोशिकाओं, स्टार्च कणिकाओं और प्रोटीन निकायों के विभिन्न क्षेत्रों में एम्बेडेड परिपक्व बीजों के ट्रांसवर्सल और देशांतर पूरे बीज के आकार के वर्गों को तैयार करने की दिशा में एक तेज, सरल और उत्सुक दृष्टिकोण का प्रतिनिधित्व करती है। इसके अलावा, तकनीक बीज के विभिन्न क्षेत्रों में कोशिका, स्टार्च और प्रोटीन निकायों के आकृति विज्ञान परिवर्तनों की जांच करने के लिए बीज विकसित करने, अंकुरित और पके हुए बीजों के खंड को भी तैयार कर सकती है। 

एक और अलग लाभ है कि इस तकनीक प्रदान करता है पूरे बीज के आकार के वर्गों के आवेदन है । फेनोमिक्स और मेटाबोलोमिक्स के नए युग में, बीजों के विभिन्न क्षेत्रों में कोशिकाओं, स्टार्च कणिकाओं और प्रोटीन निकायों के आकृति विज्ञान मापदंडों को मात्रात्मक रूप से मापना महत्वपूर्ण है। नई तकनीक, आकृति विज्ञान विश्लेषण सॉफ्टवेयर के साथ संयोजन के रूप में, शोधकर्ता को बीज के विभिन्न क्षेत्रों(अनुपूरक तालिका 1-4)में कोशिकाओं, स्टार्च कणिकाओं और प्रोटीन निकायों के आकृति विज्ञान मापदंडों का मात्रात्मक रूप से विश्लेषण करने की अनुमति देती है।

हालांकि वर्तमान शुष्क खंड विधि सफलतापूर्वक पूरे बीज के आकार के राल अनुभाग तैयार कर सकते हैं, यह कुछ सीमाएं और कमियां हैं । पैराफिन सेक्शन के लिए, पैराफिन को अनुभाग से आसानी से हटाया जा सकता है; लेकिन राल अनुभाग के लिए, राल को अनुभाग से नहीं हटाया जा सकता है, जिससे राल में एम्बेडेड पौधे का नमूना होता है। इसलिए, पैराफिन सेक्शन की तुलना में, वर्तमान पूरे बीज के आकार का राल अनुभाग हिस्टोकेमिस्ट्री और इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री को पूरा करने के लिए उपयुक्त नहीं है। इसके अलावा, नियमित राल खंड विधि छोटे मात्रा के साथ नमूना ब्लॉक के कारण 0.5-2 माइक्रोन चिकनी वर्गों में नमूनों में कटौती कर सकते हैं। लेकिन वर्तमान शुष्क खंड विधि 2 माइक्रोन से कम मोटाई के साथ चिकनी वर्गों को तैयार करना मुश्किल है, विशेष रूप से बड़ी मात्रा और उच्च स्टार्च सामग्री वाले परिपक्व बीजों के लिए।

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Disclosures

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

वित्त पोषण चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (३२०७१९२७), यांगझोउ विश्वविद्यालय की प्रतिभा परियोजना और जियांग्सू उच्च शिक्षा संस्थानों के प्राथमिकता अकादमिक कार्यक्रम विकास द्वारा प्रदान किया गया था ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Acetic acid Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. A501931
Compact glass staining jar (5-Place) Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. E678013
Coomassie brilliant blue R-250 Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. A100472
Coverslip Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. F518211
Double-sided blade Gillette Shanghai Co., Ltd. 74-S
Ethanol absolute Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. A500737
Flattening table Leica HI1220
Fluorescence microscope Olympus BX60
Fluorescent brightener 28 Sigma-Aldrich 910090
Glass strips Leica 840031
Glutaraldehyde 50% solution in water Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. A600875
Glycerol Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. A600232
Iodine Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. A500538
Isopropanol Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. A507048
Light microscope Olympus BX53
LR White resin Agar Scientific AGR1281A
Oven Shanghai Jing Hong Laboratory Instrument Co.,Ltd. 9023A
Potassium iodide Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. A100512
Slide Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. F518101
Tweezers Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. F519022
Sodium phosphate dibasic dodecahydrate Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. A607793
Sodium phosphate monobasic dihydrate Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. A502805
Ultramicrotome Leica EM UC7

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References

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पूरे बीज के आकार राल अनुभाग और उसके अनुप्रयोगों को प्राप्त करने के लिए एक सरल सूखी अनुभाग विधि
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Qiu, J., Ren, Y., Zhao, L., Zhang, B., Wei, C. A Simple Dry Sectioning Method for Obtaining Whole-Seed-Sized Resin Section and Its Applications. J. Vis. Exp. (167), e61822, doi:10.3791/61822 (2021).

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