Waiting
Procesando inicio de sesión ...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

चूहों में कोलोप्रोक्टाइटिस कैंसर मॉडल की स्थापना और चीनी चिकित्सा के चिकित्सीय प्रभाव का मूल्यांकन

Published: October 13, 2023 doi: 10.3791/66045
Automatic Translation
1, 2, 1, 1, 1, 1, 3
1College of Traditional Chinese Medicine, Changchun University of Chinese Medicine, 2School of Clinical Medicine, Changchun University of Chinese Medicine, 3Department of Radiotherapy, Jilin Provincial Cancer Hospital

Summary

यह प्रोटोकॉल अल्सरेटिव कोलोप्रोक्टाइटिस से जुड़े कोलोरेक्टल कैंसर का एक माउस मॉडल प्रदान करता है जो डेक्सट्रान सल्फेट सोडियम के साथ संयुक्त एज़ोमेथेन द्वारा प्रेरित होता है। मॉडल का उपयोग कोलोरेक्टल कैंसर की रोकथाम और उपचार में पारंपरिक चीनी चिकित्सा यौगिकों की प्रभावकारिता का मूल्यांकन करने के लिए किया गया था।

Abstract

कोलोरेक्टल कैंसर (सीआरसी) पाचन तंत्र की एक आम घातकता है और दुनिया भर में तीसरी सबसे आम घातकता बन गई है और दुर्दमता से संबंधित मौत का दूसरा प्रमुख कारण है। अल्सरेटिव कोलोप्रोक्टाइटिस (यूसी) एक पूर्ववर्ती घाव है, और यूसी-संबद्ध सीआरसी (यूसी-सीआरसी) सीआरसी का सबसे आम उपप्रकार है। इसलिए, एक उचित यूसी-सीआरसी मॉडल नई दवा के विकास की आधारशिला और गारंटी है। पारंपरिक चीनी चिकित्सा (टीसीएम) का व्यापक रूप से यूसी-सीआरसी के उपचार में इसकी अच्छी प्रभावकारिता के कारण उपयोग किया गया है। टीसीएम के क्लासिक टॉनिक पर्चे के रूप में, यूसी-सीआरसी के उपचार में लिजुन्ज़ी काढ़े (एलजेजेडडी) का व्यापक रूप से उपयोग किया गया है। इस अध्ययन में, एज़ोमेथेन और डेक्सट्रान सल्फेट सोडियम के संयोजन से एक यूसी-सीआरसी मॉडल स्थापित किया गया था, और एलजेजेडडी प्रशासित किया गया था। डेटा ने पुष्टि की कि एलजेजेडडी माउस शरीर के वजन, कोलोरेक्टल लंबाई, रोग और भड़काऊ कारकों, कोलोरेक्टल बाधा समारोह और कैंसर मार्करों का उपयोग करके यूसी-सीआरसी में कैंसर संक्रमण को प्रभावी ढंग से रोक सकता है। यह प्रोटोकॉल यूसी-सीआरसी की रोकथाम और उपचार में टीसीएम की प्रभावकारिता का मूल्यांकन करने के लिए एक प्रणाली प्रदान करता है।

Introduction

कोलोरेक्टल कैंसर (सीआरसी) एक आम गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल दुर्दमता है, तीसरा सबसे आम घातकता, और दुनिया में मृत्यु का दूसरा सबसे आम कारण है, जो वैश्विक कैंसर की घटनाओं का 10% और कुल कैंसर से संबंधित मृत्युका 9.4% 1,2 है। आनुवंशिक कारक, पुरानी सूजन, उच्च वसा वाले आहार, मधुमेह, और असामान्य आंतों के वनस्पति सीआरसी 3,4 के लिए जोखिम कारक हैं। उनमें से, सूजन आंत्र रोग, विशेष रूप से अल्सरेटिव कोलोप्रोक्टाइटिस (यूसी), सीआरसी 5,6 के लिए एक स्पष्ट जोखिम कारक है। यूसी-एसोसिएटेड सीआरसी (यूसी-सीआरसी) कोलोरेक्टम की पुरानी सूजन के आधार पर सूजन, एटिपिकल हाइपरप्लासिया और कैंसर की एक संक्रमण प्रक्रिया है, जो सीआरसी 7,8 के विशिष्ट एडेनोमा-एडेनोकार्सिनोमा विकास मॉडल से अलग है। सामान्य आबादी की तुलना में, सीआरसी का जोखिम सूजन आंत्र रोग9 वाले रोगियों में लगभग 10-40 गुना अधिक है।

वर्तमान में, सर्जरी अभी भी सीआरसी के लिए मानक उपचार है, और स्थान और ट्यूमर के चरण के आधार पर, विकिरण चिकित्सा, प्रणालीगत दवा चिकित्सा, या दोनों का एक संयोजन संभव10 कर रहे हैं. हालांकि इन पारंपरिक उपचार के तौर-तरीकों ने सीआरसी की उच्च विविधता और पुनरावृत्ति दर के कारण बहुत प्रगति की है, रोग का निदान खराब है, और उपचार प्रभावआदर्श 11,12 नहीं है। इसलिए, सीआरसी रोगियों की उत्तरजीविता दर में सुधार के लिए प्रारंभिक पहचान, शीघ्र निदान और व्यापक उपचार महत्वपूर्ण हैं, और यूसी से सीआरसी के परिवर्तन पर ध्यान देना विशेष रूप से महत्वपूर्ण है। वर्षों से, पारंपरिक चीनी चिकित्सा (टीसीएम) ने अपने सीमित दुष्प्रभावों और महत्वपूर्ण प्रभावकारिता के कारण यूसी-सीआरसी या क्रोनिक गैस्ट्र्रिटिस के उपचार में बहुत ध्यान आकर्षित किया है। द्वंद्वात्मक उपचार के आधार पर, विभिन्न पीढ़ियों के प्रसिद्ध चीनी चिकित्सा चिकित्सकों ने बड़ी संख्या में क्लासिक नुस्खे बनाए हैं, जैसे कि हुआंगकी जियानझोंग काढ़ा13, सिजुंजी काढ़ा14, और सिशेन गोली15।

Liujunzi काढ़ा (LJZD) मिंग राजवंश में संकलित यी Xue झेंग ज़ुआन के कार्यों से उत्पन्न हुआ और TCM16 में एक क्लासिक नुस्खा है। जैसा कि तालिका 1 में दिखाया गया है, एलजेजेडडी में छह पारंपरिक जड़ी-बूटियां शामिल हैं, जिनमें कोडोनोप्सिस पिलोसुला (फ्रेंच) शामिल हैं। नैनफ। (डांगशेन), पोरिया कोकोस (श्व) वुल्फ (फुलिंग), एट्रैक्टिलोड्स मैक्रोसेफला कोइड्ज़। (बैज़ू), ग्लाइसीर्रिज़ा यूरेलेंसिस फिश। (गनकाओ), साइट्रस रेटिकुलाटा ब्लैंको (चेनपी) और पिनेलिया टेरनाटा (थुनब। ब्रेइट (बैंक्सिया), जिसमें क्यूई को फिर से भरने और प्लीहा को मजबूत करने, नमी सूखने और कफ को हल करने का प्रभाव होता है। आधुनिक नैदानिक अभ्यास में, इसका उपयोग अक्सर पुरानी गैस्ट्रिटिस, गैस्ट्रिक अल्सर और ग्रहणी संबंधी अल्सर के इलाज के लिए किया जाता है। आधुनिक औषधीय अनुसंधान एलजेजेडडी और संशोधित एलजेजेडडी यूसी और पाचन तंत्र कैंसर 17,18,19 के सहायक उपचार में उच्च आवेदन मूल्य है कि पता चला है.

वर्तमान में, यूसी-सीआरसी माउस मॉडल बनाने के कई तरीके हैं, लेकिन एज़ोक्सीमेथेन (एओएम) / डेक्सट्रान सल्फेट सोडियम (डीएसएस) प्रेरित माउस मॉडल सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल किया जाने वाला यूसी-सीआरसी मॉडल है; नैदानिक लक्षणों, रूपात्मक और रोग संबंधी टिप्पणियों ने साबित कर दिया है कि मॉडल मानव यूसी-सीआरसी20,21के समान है। मूल सिद्धांत पहले रासायनिक कार्सिनोजेन एओएम के साथ कार्सिनोजेनेसिस को प्रेरित करना है और फिर आंतों के म्यूकोसल एपिथेलियम की निरंतर क्षति और मरम्मत का अनुकरण करने के लिए डीएसएस के भड़काऊ उत्तेजना वातावरण में चूहों को लगातार उजागर करना है, जिससे यूसी-सीआरसी माउस मॉडल22का निर्माण होता है। इस अध्ययन का उद्देश्य अल्पावधि में एओएम के इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन और डीएसएस के चक्रीय उत्तेजना द्वारा यूसी-सीआरसी का एक माउस मॉडल स्थापित करना है और यूसी-सीआरसी के उपचार के लिए वैज्ञानिक आधार प्रदान करने के लिए यूसी-सीआरसी पर दवा और एलजेजेडडी के आणविक तंत्र के प्रभाव का मूल्यांकन करना है।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

पशु प्रक्रिया को चांगचुन यूनिवर्सिटी ऑफ चाइनीज मेडिसिन (रिकॉर्ड संख्या: 2021214) की आचार समिति द्वारा अनुमोदित किया गया है। विशिष्ट रोगज़नक़ मुक्त C57BL/6J चूहों (8-10 सप्ताह, वजन 18-22 ग्राम), नर और मादा, 22 डिग्री सेल्सियस और 65% सापेक्ष आर्द्रता पर स्वतंत्र रूप से हवादार पिंजरों में रखे गए थे। चूहों ने अनुकूली खिला के 7 डी के बाद प्रयोग शुरू किया, जिसके दौरान उनके पास पानी और आहार तक मुफ्त पहुंच थी।

1. दवा तैयार करना

  1. एलजेजेडडी की तैयारी
    नोट: इस्तेमाल की गई चीनी दवा चांगचुन विश्वविद्यालय के संबद्ध अस्पताल से खरीदी गई थी और इसे वास्तविक चीनी दवा के रूप में पहचाना गया था ( तालिका 1 देखें)।
    1. Dangshen (12 ग्राम), Baizhu (12 ग्राम), Gancao (6 ग्राम), Chenpi (12 ग्राम), Jiangbanxia (9 ग्राम) को एक विशेष सिरेमिक पॉट में डालें ( सामग्री की तालिकादेखें)। आसुत जल के 1000 एमएल जोड़ें और 1 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर भिगोएँ ( चित्रा 1 ए देखें)।
    2. पाउडर 12 ग्राम एक ग्राइंडर के साथ ठीक पाउडर में फुलिंग और कमरे के तापमान पर 1 घंटे के लिए एक और कंटेनर में आसुत जल के 300 एमएल में भिगोएँ।
    3. उपरोक्त चीनी दवा को विशेष सिरेमिक पॉट में मिलाएं। मिश्रण को उबालें और फिर मध्यम आंच पर रखें जब तक कि केवल 300 एमएल काढ़ा न रह जाए। फ़िल्टरिंग के लिए चिकित्सा धुंध का उपयोग करें और कमरे के तापमान पर छानना संरक्षित करें।
    4. आसुत जल के 1000 एमएल जोड़ें और उपरोक्त काढ़े के ऑपरेशन को एक बार फिर दोहराएं। चिकित्सा धुंध का उपयोग करके फिर से फ़िल्टर करें। छानना और केवल 150 एमएल रहता है जब तक यह उबाल लें.
    5. 5 मिन के लिए 10,000 x ग्राम पर केंद्रित तरल को सेंट्रीफ्यूज करें, और आगे मध्यम गर्मी पर 30 एमएल तक प्राप्त सतह पर तैरनेवाला ध्यान केंद्रित करें। अंतिम ध्यान को एक डिश में स्थानांतरित करें और इसे इलेक्ट्रिक सुखाने वाले ओवन का उपयोग करके तब तक सुखाएं जब तक कि केवल विलेय पाउडर के रूप में न रह जाए।
    6. उपरोक्त ठोस का वजन करें और इसे बाँझ आसुत जल में भंग करके 22.85 मिलीग्राम दवा प्रति 0.2 एमएल (114.16 मिलीग्राम / एमएल) युक्त समाधान प्राप्त करें, जो चूहों की दैनिक खुराक है।
  2. 5-एमिनो सैलिसिलिक एसिड की तैयारी
    नोट: 5-एमिनो सैलिसिलिक एसिड (5-एएसए; सामग्री की तालिकादेखें) का यूसी-सीआरसी पर एक अच्छा निवारक प्रभाव पड़ता है, और इसे इस अध्ययन23 में एक सकारात्मक दवा के रूप में इस्तेमाल किया गया था।
    1. 1.82 मिलीग्राम/एमएल 5-एएसए समाधान प्राप्त करने के लिए 200 एमएल बाँझ आसुत जल में 64 मिलीग्राम 5-एएसए पाउडर घोलें। एक माउस के लिए दैनिक खुराक 0.2 एमएल था.
  3. एओएम इंजेक्शन समाधान की तैयारी
    1. 25 मिलीग्राम एओएम पाउडर ( सामग्री की तालिकादेखें) में बाँझ आसुत जल के 2.5 एमएल जोड़ें, और भंवर मिक्सर द्वारा मिश्रण ( सामग्री की तालिकादेखें) 10 मिलीग्राम / एमएल एओएम स्टॉक समाधान बनाने के लिए, उपयोग तक -20 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।
    2. 10:1 (1 मिलीग्राम/एमएल) पर बाँझ आसुत जल के साथ एओएम स्टॉक समाधान को पतला करके एओएम इंजेक्शन समाधान तैयार करें।

2. यूसी-सीआरसी मॉडल की स्थापना

नोट: प्रयोग को 4 समूहों में विभाजित किया गया था: नियंत्रण, मॉडल, एलजेजेडडी, और 5-एएसए समूह, प्रत्येक समूह में 10 चूहे। नियंत्रण समूह को छोड़कर, अन्य समूहों को एओएम और डीएसएस के साथ इलाज किया गया था।

  1. एओएम इंजेक्शन समाधान का इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन
    नोट: 7 डी के लिए अनुकूली खिला के बाद, चूहों को इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन द्वारा एओएम इंजेक्शन समाधान (1 मिलीग्राम / एमएल) दिया गया था ( चित्र 1 बी देखें)।
    1. अपने पेट के साथ माउस पकड़ो और सिर थोड़ा नीचे. पेट की त्वचा को कसने के लिए पीठ की त्वचा को पकड़ें और 1 एमएल सिरिंज के साथ मध्य-पेट रेखा पर दोनों जांघों की जड़ रेखा के चौराहे के दाईं ओर त्वचा को लगभग 1 सेमी छेदें ( सामग्री की तालिकादेखें)।
    2. त्वचा के नीचे 3-5 मिमी की दूरी पर 1 एमएल सिरिंज सुई पुश, यह पेट midline के समानांतर रखने, और एक 45 डिग्री पर पेट गुहा में सुई 0.3-0.5 मिमी डालना.
    3. टिप पेट की मांसपेशियों से गुजरने के बाद, ऑपरेटर को प्रतिरोध का अचानक नुकसान होता है। इसके बाद, तरल रिसाव होता है या नहीं, यह देखने के लिए सिरिंज को बाहर और पीछे खींचें। यदि नहीं, तो एओएम इंजेक्शन समाधान को धीरे-धीरे चूहों में 0.1 एमएल/10 ग्राम पर धकेलें।
  2. 2% DSS समाधान की चक्रीय उत्तेजना
    नोट: प्रत्येक एओएम-प्रेरित माउस को सप्ताह 3, 6, और 9 पर डीएसएस समाधान के 500 एमएल दिए गए थे, और चूहों ने इस अवधि के दौरान स्वतंत्र रूप से पिया।
    1. 10 ग्राम डीएसएस में 500 एमएल बाँझ आसुत जल जोड़कर 2% डीएसएस समाधान तैयार करें ( सामग्री की तालिकादेखें)। एक भंवर मिक्सर के साथ मिलाएं और उपयोग होने तक 4 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।
    2. प्रत्येक एओएम-प्रेरित माउस एओएम प्रेरण के बाद सप्ताह 3, 6 और 9 पर 7 डी के लिए स्वतंत्र रूप से 2% डीएसएस समाधान के 500 एमएल पीता है।

3. दवा उपचार

नोट: वयस्क मनुष्यों को प्रति दिन 63 ग्राम LJZD की आवश्यकता होती है। प्रयोगात्मक माउस और मानव दवा खुराक के रूपांतरण सूत्र के अनुसार, चूहों (मिलीग्राम / किग्रा) = मानव खुराक (मिलीग्राम / किग्रा) / शरीर के वजन (60 किलो) x 9.1 के लिए समकक्ष प्रयोगात्मक खुराक, चूहों की दैनिक खुराक लगभग 9.6 ग्राम / किग्रा थी।

  1. एलजेजेडडी और 5-एएसए समूह को क्रमशः सप्ताह 7 और सप्ताह 15 में गैस्ट्रिक गैवेज द्वारा तैयार एलजेजेडडी के 0.1 एमएल/10 ग्राम और 5-एएसए समाधान के साथ इलाज करें।
    1. चूहों में इंट्रागैस्ट्रिक प्रशासन के लिए, निम्नलिखित प्रक्रिया करें। बाएं हाथ में माउस पकड़ो, और दाहिने हाथ में, पेट छिड़काव तंत्र पकड़ो. मुंह में सिरिंज सुई डालें और यह चूहों की ग्रसनी की पीछे की दीवार नीचे स्लाइड. ग्रसनी नीचे स्लाइड के रूप में चूहों निगलने और आगे बढ़ने के लिए जारी. जब प्रतिरोध की भावना थी, और सिरिंज को ग्रसनी में धकेल दिया जा सकता था, सुई को बाहर निकालें और इंजेक्शन पूरा करें।
  2. खारा की समान मात्रा के साथ नियंत्रण और मॉडल समूह का इलाज करें ( सामग्री की तालिकादेखें)।
  3. प्रशासन अवधि के दौरान एक ही समय में दिन में एक बार उपयुक्त दवा के साथ प्रत्येक समूह में चूहों का इलाज करें।

4. यूसी-सीआरसी मॉडल का मूल्यांकन और एलजेजेडडी की प्रभावकारिता

  1. रोग गतिविधि सूचकांक स्कोर
    नोट: तालिका 2 के अनुसार, रोग गतिविधि सूचकांक (डीएआई) स्कोर का मूल्यांकन वजन घटाने, फेकल चिपचिपाहट, और चूहों के मल रक्तस्राव के संयोजन से किया गया था।
    1. दवा उपचार के अंत तक अनुकूली खिला की शुरुआत से दैनिक चूहों के वजन रिकॉर्ड.
    2. प्रत्येक प्रयोगात्मक माउस की फेकल स्थिरता को ध्यान से देखें और आंत्र आंदोलनों को तीन स्थितियों में से एक के रूप में रिकॉर्ड करें: सामान्य, ढीले मल, और पानी के दस्त।
    3. प्रयोगात्मक जानवरों के फेकल रक्तस्राव को तीन स्थितियों में से एक के रूप में रिकॉर्ड करें: कोई रक्तस्राव, थोड़ा रक्तस्राव और मल में दिखाई देने वाला रक्त।
  2. सीरम में आईएल -6 स्तर का पता लगाना
    1. 9 सप्ताह के लिए LJZD या 5-एएसए के साथ चूहों का इलाज करें। बाएं हाथ से माउस की गर्दन की त्वचा लोभी और धीरे पार्श्व decubitus स्थिति लेने के लिए प्रयोगात्मक मेज पर दबाने से चूहों को ठीक करें. कैंची के साथ चूहों की मूंछ काट लें. ध्यान से कैंची के साथ चूहों की मूंछ काट लें ( सामग्री की तालिकादेखें) रक्त संदूषण को रोकने के लिए.
      नोट: चूहे जो स्वतंत्र रूप से नहीं झूल सकते थे, उन्हें ठीक से तय किया गया माना जाता था। यदि ऐसा नहीं होता है, तो चूहों को ठीक किया जाना चाहिए।
    2. 2% isoflurane की साँस लेना द्वारा माउस anesthetize. इथेनॉल के साथ नेत्रगोलक के आसपास की त्वचा को स्टरलाइज़ करें ( सामग्री की तालिकादेखें)। नेत्रगोलक को भीड़भाड़ और फैला हुआ बनाने के लिए आंखों की त्वचा को धीरे से दबाएं।
    3. नेत्रगोलक को कोहनी चिमटी से जकड़ें और नेत्रगोलक को सही और जल्दी से हटा दें। रक्त केन्द्रापसारक ट्यूब में टपकने के लिए अनुमति ( सामग्री की तालिकादेखें). इस प्रक्रिया में, रक्त संग्रह को गति देने के लिए माउस के दिल को टैप करें।
    4. एकत्रित रक्त को 30 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर रखें और इसे 10 मिनट के लिए 3,500 x ग्राम पर अपकेंद्रित्र करें। सतह पर तैरनेवाला ले लीजिए और IL-6 सामग्री का पता लगाने किट निर्देशों के अनुसार IL-6 स्तर का पता लगाएं ( सामग्री की तालिकादेखें)।
  3. कोलोरेक्टल ऊतक को अलग करना
    1. पशु नैतिकता के अनुसार 5% ओवरडोज आइसोफ्लुरेन और ग्रीवा अव्यवस्था ( सामग्री की तालिकादेखें) साँस लेकर रक्त के नमूने के बाद चूहों को इच्छामृत्यु दें।
    2. एक क्रायोजेनिक शारीरिक वातावरण में चूहों रखें. एक लापरवाह स्थिति में चूहों को स्थिर करें। कैंची के साथ निचले पेट के बालों को काटें और इथेनॉल के साथ इसे निष्फल करें।
    3. दो जांघ जड़ों और पलक संदंश के साथ पेट midline के बीच चौराहे बिंदु चुटकी ( सामग्री की तालिकादेखें). कैंची के साथ 1-1.5 सेमी के बारे में एक अनुप्रस्थ चीरा काटें।
    4. xiphoid प्रक्रिया की ओर अनुप्रस्थ चीरा के मध्य बिंदु से पेट की मध्य रेखा के साथ एक अनुदैर्ध्य चीरा क्लिप.
    5. आसपास के ऊतक से कोलोरेक्टम को अलग करने के लिए गुदा की दिशा में पेरी-कोलोरेक्टल ऊतकों को हटा दें। सावधान रहें कि कोलोरेक्टम को नुकसान न पहुंचे।
    6. कोलोरेक्टम को पूरी तरह से उजागर करने के लिए पेट की त्वचा को पक्षों तक धकेलें। पलक संदंश के साथ पेट की गुहा से कोलोरेक्टम निकालें और गुदा से सीकुम (छोड़कर) तक खंडों को काट लें; कुल लंबाई लगभग 10 सेमी है। प्राप्त कोलोरेक्टल ऊतकों को 4 डिग्री सेल्सियस पर खारा में स्टोर करें।
  4. मलाशय की लंबाई और वजन का मूल्यांकन
    1. कोलोरेक्टम के अंदर फ्लश करने के लिए 5 एमएल सुई ( सामग्री की तालिकादेखें) के साथ 4 डिग्री सेल्सियस पर खारा निकालें। फिर, ऊतक की नमी को अवशोषित करने के लिए कोलोरेक्टम को शोषक कागज पर रखें।
    2. कोलोरेक्टल ऊतकों का वजन करें और फिर उनकी लंबाई मापने के लिए उन्हें A4 पेपर पर रखें।
  5. कोलोरेक्टम में ट्यूमर की संख्या को मापें
    1. कोलोरेक्टम को पूरी तरह से प्रकट करने के लिए लंबाई में काटें और कोलोरेक्टम में ट्यूमर की संख्या और आकार का निरीक्षण करें।
  6. कोलोरेक्टम का पैथोलॉजिकल विश्लेषण
    1. 24 घंटे के लिए 4% पैराफॉर्मेल्डिहाइड में कोलोरेक्टम को ठीक करें। पिघले हुए पैराफिन में निश्चित मलाशय ऊतक को एम्बेड करें और एक ऊतक ठंड माइक्रोटोम द्वारा 5 माइक्रोन की मोटाई के साथ लगातार अनुभाग करें।
    2. होउ एट अल.24की प्रक्रिया के अनुसार, जाइलीन में वर्गों को डीवैक्स करें और फिर इसे इथेनॉल के सीरियल सांद्रता के साथ निर्जलित करें। 5 मिनट के लिए हेमटोक्सिलिन समाधान के साथ धुंधला होने के बाद, शुद्ध पानी के साथ वर्गों कुल्ला। उसके बाद, 1 मिनट के लिए 0.5% ईोसिन समाधान के साथ दाग ( सामग्री की तालिकादेखें)।
    3. ढाल निर्जलीकरण और xylene पारदर्शी उपचार फिर से प्रदर्शन. वर्गों सील और ऑप्टिकल खुर्दबीन ( सामग्री की तालिकादेखें) और तस्वीर के तहत उन्हें निरीक्षण के रूप में ज़ी एट अल.25 द्वारा वर्णित.
  7. कोलोरेक्टम का इम्यूनोहिस्टोकेमिकल विश्लेषण
    1. उपरोक्त विधि के अनुसार वर्गों को डीवैक्स और निर्जलित करें। उच्च दबाव थर्मल मरम्मत तकनीक के साथ वर्गों में एंटीजन की मरम्मत, जैसा कि गोक एट अल.26द्वारा वर्णित है।
    2. 15 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर अंतर्जात peroxidase ब्लॉकर्स में वर्गों भिगोएँ. बकरी सीरम के साथ वर्गों को सील करें ( सामग्री की तालिकादेखें)।
    3. प्राथमिक एंटीबॉडी ZO-1 (1:1000), Occludin (1:1000) और KI67 (1:500; सामग्री की तालिकादेखें) वर्गों में जोड़ें और 4 डिग्री सेल्सियस पर रात भर सेते हैं। पीबीएस बफर ( सामग्री की तालिकादेखें) के साथ वर्गों को कुल्ला, सामान्य प्रयोजन माध्यमिक एंटीबॉडी (1:5000; सामग्री की तालिकादेखें) जोड़ें और 30 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट करें।
    4. रंग विकास के लिए अनुभागों में डीएबी समाधान ( सामग्री की तालिकादेखें) जोड़ें। हेमेटोक्सिलिन समाधान के साथ वर्गों का मुकाबला करें।
    5. निर्जलीकरण, पारदर्शी, और वर्गों को फिर से सील करें। ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप द्वारा प्रोटीन की अभिव्यक्ति का निरीक्षण करें।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

एलजेजेडडी का काढ़ा तालिका 1 में दवाओं की संरचना अनुपात और चित्रा 1 ए में टीसीएम की काढ़ा विधि के अनुसार तैयार किया गया था। चित्रा 1 बी में इंगित समय बिंदु के अनुसार, चूहों को 7वें दिन 1 मिलीग्राम / एमएल एओएम के साथ अंतःक्रियात्मक रूप से इंजेक्शन दिया गया था, और चूहों को 3, 6वें और 9वें सप्ताह में 2% डीएसएस युक्त पीने के पानी तक मुफ्त पहुंच दी गई थी। यूसी-सीआरसी माउस मॉडल 15वें सप्ताह में सफलतापूर्वक स्थापित किया गया था। इस बीच, चूहों को सप्ताह 7 से सप्ताह 15 तक एलजेजेडडी के साथ इलाज किया गया था। डेटा से पता चला है कि नियंत्रण समूह की तुलना में, यूसी-सीआरसी मॉडल समूह में एक महत्वपूर्ण वजन घटाने था, जिसे एलजेजेडडी उपचार (चित्रा 2 ए, पी < 0.01) द्वारा कम किया गया था। परीक्षण के अंत में, एलजेजेडडी उपचार ने यूसी-सीआरसी मॉडल समूह(चित्रा 2बी)की तुलना में डीएआई स्कोर में सुधार किया। नियंत्रण समूह की तुलना में, यूसी-सीआरसी मॉडल समूह में एक छोटी कोलोरेक्टल लंबाई थी, जिसे एलजेजेडडी उपचार(चित्रा 2सी, डी, पी< 0.01) द्वारा बढ़ाया गया था। शरीर के वजन के लिए कोलोरेक्टल वजन का अनुपात चूहों में सीआरसी के विकास को दर्शाता है, और एक उच्च अनुपात तीव्र ट्यूमरविकास 27 इंगित करता है. नियंत्रण समूह की तुलना में, मॉडल समूह के कोलोरेक्टल अंग सूचकांक में काफी वृद्धि हुई थी, और एलजेजेडडी उपचार ने कोलोरेक्टल अंग सूचकांक(चित्रा 2ई, पी < 0.05) को बहुत कम कर दिया था। इसके अलावा, एलजेजेडडी उपचार ने कोलोरेक्टल ट्यूमर (चित्रा 2 एफ, पी < 0.01) के गठन और सीरम प्रो-भड़काऊ कारक आईएल-6 28 (चित्रा 2 जी, पी < 0.05) के स्तर को भी रोक दिया।

पैथोलॉजिकल परिणामों ने पुष्टि की कि नियंत्रण समूह की तुलना में, यूसी-सीआरसी मॉडल समूह में चूहों में बड़े कोलोरेक्टल ट्यूमर थे और उन्होंने एडेनोकार्सिनोमा का गठन किया था, जबकि एलजेजेडडी उपचार ने ट्यूमर के आकार और ग्रेड को कम कर दिया था (चित्र 3)। इम्यूनोहिस्टोकेमिकल डेटा ने प्रदर्शित किया कि एलजेजेडडी उपचार ने यूसी-सीआरसी मॉडल चूहों में कोलोरेक्टल बाधा समारोह को बढ़ाया, जैसा कि ज़ो -1 और ऑक्लुडिन29 (चित्रा 4) की उन्नत प्रोटीन अभिव्यक्ति द्वारा इंगित किया गया है। समानांतर में, एलजेजेडडी उपचार ने कैंसर मार्कर केआई 6730 (चित्रा 4) के प्रोटीन अभिव्यक्ति स्तर को दबा दिया।

Figure 1
चित्रा 1: एलजेजेडडी की तैयारी और कोलोप्रोक्टाइटिस कैंसर के माउस मॉडल की स्थापना। ए) डांगशेन (12 ग्राम), बैज़ू (12 ग्राम), गनकाओ (6 ग्राम), चेनपी (12 ग्राम) और अदरक-संसाधित बान ज़िया (9 ग्राम) का मिश्रण 1 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर 1000 एमएल आसुत जल में डूबा हुआ था। 12 ग्राम फुलिंग पाउडर को 1 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर 300 एमएल आसुत जल में भिगोया गया था। उपरोक्त छह जड़ी बूटियों का मिश्रण 40 मिनट के लिए 100 डिग्री सेल्सियस पर काढ़ा गया था। (बी) 7 दिन, सी 57 बीएल / 6 जे चूहों को इंट्रापेरिटोनली 1 मिलीग्राम / एमएल एओएम के साथ इंजेक्शन दिया गया था। चूहों को 3, 6वें और 9वें सप्ताह में 2% डीएसएस एड लिबिटम युक्त पानी दिया गया था। 7 से 15 सप्ताह तक, चूहों को नलिका द्वारा LJZD दिया गया था। संक्षिप्ताक्षर: एओएम, एज़ोमेथेन; डीएआई, रोग गतिविधि सूचकांक; डीएसएस, डेक्सट्रान सल्फेट सोडियम; एलजेजेडडी, लिजुन्ज़ी काढ़ा; डब्ल्यू, सप्ताह। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 2
चित्रा 2: यूसी-सीआरसी मॉडल का मूल्यांकन और एलजेजेडडी की प्रभावकारिता। (ए) एलजेजेडडी ने यूसी-सीआरसी मॉडल चूहों में शरीर के वजन में सुधार किया। (बी) एलजेजेडडी ने यूसी-सीआरसी मॉडल चूहों में डीएआई स्कोर को कम किया। (सी, डी) एलजेजेडडी ने यूसी-सीआरसी मॉडल चूहों में कोलोरेक्टम की लंबाई बढ़ा दी। (ई) एलजेजेडडी ने यूसी-सीआरसी मॉडल चूहों में कोलोरेक्टम के अंग सूचकांक को कम कर दिया। (एफ) एलजेजेडडी ने कोलोप्रोक्टाइटिस कैंसर मॉडल चूहों में कोलोरेक्टल ट्यूमरजेनेसिस को रोक दिया। (जी) एलजेजेडडी ने यूसी-सीआरसी मॉडल चूहों में सीरम आईएल -6 स्तर को दबा दिया। #नियंत्रण समूह की तुलना में पी< 0.05 और ##पी< 0.01; *मॉडल समूह की तुलना में पी < 0.05 और **पी< 0.01। डेटा मानक विचलन (एन = 10) ± माध्य के रूप में व्यक्त किए गए थे और टुकी के परीक्षण के बाद विचरण (एनोवा) के एक तरफा विश्लेषण द्वारा विश्लेषण किया गया था। पी < 0.05 ने सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण अंतर का संकेत दिया। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 3
चित्रा 3: हेमटोक्सिलिन-ईोसिन धुंधला द्वारा चूहों में कोलोरेक्टल ऊतकों की रोग संबंधी विशेषताओं का मूल्यांकन। नियंत्रण समूह में कोई पैथोलॉजिकल क्षति नहीं थी। यूसी-सीआरसी मॉडल समूह का ट्यूमर ऊतक बड़ा था और उसने एडेनोकार्सिनोमा और उच्च श्रेणी के नियोप्लासिया का गठन किया था, जबकि एलजेजेडडी उपचार समूह ने स्थानीय एडेनोमा और निम्न-ग्रेड नियोप्लासिया की थोड़ी मात्रा के साथ ट्यूमर ऊतक को कम कर दिया था। काला तीर पूर्ववर्ती डिस्प्लास्टिक ट्यूमर ग्रंथि का प्रतिनिधित्व करता है। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 4
चित्रा 4: यूसी-सीआरसी मॉडल चूहों में कोलोरेक्टल बाधा समारोह और कैंसर मार्कर पर एलजेजेडडी का प्रभाव। (ए) ज़ो -1, ऑक्लुडिन और केआई 67 की इम्यूनोहिस्टोकेमिकल छवियां। (बी) ज़ो -1, ऑक्लुडिन और केआई 67 की प्रोटीन अभिव्यक्ति के सांख्यिकीय परिणाम। LJZD उपचार ने कोलोरेक्टल बाधा कार्यात्मक प्रोटीन ZO-1 और Occludin, जबकि UC-CRC मॉडल चूहों में कैंसर मार्कर KI67 के स्तर में कमी आई। ## नियंत्रण समूह की तुलना में पी 0.01 <; ** मॉडल समूह की तुलना में पी 0.01 <। डेटा मानक विचलन (एन = 10) ± माध्य के रूप में व्यक्त किए गए थे और टुकी के परीक्षण के बाद विचरण (एनोवा) के एक तरफा विश्लेषण द्वारा विश्लेषण किया गया था। पी < 0.05 ने सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण अंतर का संकेत दिया। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

घटक पिनयिन वजन (छ)
कोडोनोप्सिस मूलांक डांगशेन 12
पोरिया कोकोस फुलिंग 12
Atractylodis macrocephalae राइजोमा बैज़ू 12
नद्यपान गनकाओ 6
सूखे संतरे का छिलका चेनपी 12
राइजोम पिनेलिया प्रीपरटा जियांगबैंक्सिया 9

तालिका 1: एलजेजेडडी में दवाओं की संरचना और अनुपात।

आइटम ग्रेड या लक्षण स्कोर
वजन घटना < 1% 0
1%-5% 1
5%-10% 2
10%-15% 3
≥15% 4
मल मनोगत रक्त परीक्षण नेगटिव 0
पॉज़िटीव 2
नग्न आंखों से मल में दिखाई देने वाला रक्त 4
फेकल स्थिरता सामान्य 0
ढीला मल 2
पानी जैसा दस्त 4

तालिका 2: चूहों में यूसी-सीआरसी मॉडल के लिए रोग गतिविधि सूचकांक स्कोर।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

सीआरसी दुनिया भर में सबसे आम कैंसर में से एक है, जिसमें लगभग 1,148,000 नए मामले और हर साल 576,000 से अधिक मौतें होती हैं। सीआरसी को वंशानुगत, छिटपुट और यूसी-सीआरसी31 सहित विभिन्न कारणों के अनुसार तीन प्रकारों में विभाजित किया जा सकता है। यूसी जैसे सूजन आंत्र रोगों वाले रोगियों में सीआरसी की घटना सामान्य आबादी की तुलना में काफी अधिक है। यूसी भड़काऊ-कैंसर मार्ग के माध्यम से सीआरसी के विकास को उत्तेजित करता है, जो विशिष्ट एडेनोमा-एडेनोकार्सिनोमा मार्ग6 से अलग है। वर्तमान में, यूसी-सीआरसी का कारण अज्ञात है, मुख्य रूप से लंबे समय तक आवर्तक पुरानी सूजन के कारण होता है, जिसमें मृत्यु दर 60%32,33 तक होती है। यूसी-सीआरसी के लिए कोई प्रभावी उपचार नहीं है, जो हाल के वर्षों में अनुसंधान का हॉटस्पॉट रहा है। यूसी-सीआरसी के आणविक तंत्र को समझना यूसी-सीआरसी के शुरुआती पता लगाने और सटीक उपचार के लिए महत्वपूर्ण है।

वर्तमान में, यूसी-सीआरसी के पशु मॉडल बनाने के कई तरीके हैं, और गठन तंत्र अलग हैं। आईएल -10 या एमयूसी 2/4 जीन नॉकआउट, जिसके परिणामस्वरूप उपकला बाधा दोष होते हैं, चूहों में सहज कोलाइटिस को प्रेरित कर सकते हैं, इसलिए इसका उपयोग अक्सर यूसी34,35,36से जुड़े आनुवंशिक दोषों के आधार पर पशु सीआरसी मॉडल बनाने के लिए किया जाता है। फिर भी, जीन नॉकआउट द्वारा प्रेरित यूसी-सीआरसी का पशु मॉडल रोग के पूर्ण रोगजनन का अनुकरण नहीं कर सकता है, और इसकी संचालन विधि जटिल है, प्रयोग महंगा है, और इसकी स्पष्ट सीमाएं हैं। रासायनिक प्रेरण यूसी-सीआरसी पशु मॉडल37,38 के निर्माण के लिए शास्त्रीय और आम विधि है. डीएसएस, एओएम, और डाइमिथाइलहाइड्राज़ीन यूसी-सीआरसी के निर्माण के लिए आमतौर पर उपयोग किए जाने वाले रासायनिक संकेतक हैं। हालांकि, पशु मॉडल स्थापित करने के लिए अकेले इन रासायनिक अभिकर्मकों का उपयोग करने में लंबा समय लगता है और इसकी सफलता दर39 कम होती है। अध्ययनों से पता चला है कि एओएम और डीएसएस के संयोजन से प्रेरित यूसी-सीआरसी की घटना लगभग 100%40 तक पहुंच सकती है। अन्य तरीकों की तुलना में, एओएम/डीएसएस के संयोजन में सरल ऑपरेशन, मजबूत नियंत्रणीयता, लघु चक्र और उच्च प्रतिकृति दर के फायदे हैं, और पैथोलॉजी और आणविक तंत्र40,41,42के संदर्भ में मानव यूसी-सीआरसी को बेहतर ढंग से अनुकरण कर सकते हैं। हालांकि यूसी-सीआरसी मॉडल के निर्माण के लिए एओएम/डीएसएस चक्र उत्तेजना के उपयोग के कई फायदे हैं, लेकिन इसमें लंबे मॉडलिंग समय, महंगे मॉडलिंग अभिकर्मकों के नुकसान भी हैं, और फिर भी मानव यूसी-सीआरसी के रोगजनन का पूरी तरह से अनुकरण नहीं कर सकते हैं।

यूसी-सीआरसी के लिए संभावित चिकित्सीय लक्ष्य की तलाश करने के लिए, हमने यूसी-सीआरसी मॉडल स्थापित करने के लिए डीएसएस-प्रेरित चूहों के संयोजन में एओएम, एक रासायनिक कार्सिनोजेन का उपयोग किया। इस अध्ययन में, एओएम और डीएसएस की चक्रीय उत्तेजना के संपर्क में आने वाले चूहों ने यूसी-सीआरसी से संबंधित लक्षणों की अलग-अलग डिग्री दिखाई। नियंत्रण समूह की तुलना में, मॉडल समूह के डीएआई स्कोर में काफी वृद्धि हुई थी, जो वजन घटाने, रक्त मल, ढीले मल या पानी के दस्त के रूप में प्रकट हुआ था। जबकि LJZD ने DAI स्कोर को काफी कम कर दिया। छोटा कोलोरेक्टम लंबाई यूसी-सीआरसी43,44 में भड़काऊ प्रतिक्रिया का एक महत्वपूर्ण मार्कर है। इस अध्ययन में, मॉडल चूहों की कोलोरेक्टम लंबाई नियंत्रण समूह की तुलना में काफी कम थी, और एलजेजेडडी छोटे कोलोरेक्टम में सुधार कर सकता था। कोलोरेक्टल म्यूकोसा पुरानी सूजन विकसित करता है, जो धीरे-धीरे कोलोरेक्टल ऊतक के एटिपिकल हाइपरप्लासिया में विकसित होता है और अंततः कैंसर45 का कारण बनता है। इस अध्ययन में, मॉडल समूह में चूहों के कोलोरेक्टल ऊतक में ट्यूमर की संख्या नियंत्रण समूह की तुलना में काफी बढ़ गई, और तदनुसार, कोलोरेक्टल ऊतक वजन भी बढ़ गया। एलजेजेडडी उपचार के बाद, ट्यूमर की संख्या में काफी कमी आई, और कोलोरेक्टल वजन कम हो गया। यह सुझाव दिया जाता है कि यूसी द्वारा प्रेरित सीआरसी के गठन पर एलजेजेडडी का महत्वपूर्ण निरोधात्मक प्रभाव पड़ता है। पिछले अध्ययनों में पाया गया है कि एलजेजेडडी सूजन को कम कर सकता है और विवो16,28,46 में टीएनएफ-α, आईएल-6 और आईएल-1β के अभिव्यक्ति स्तर को कम कर सकता है। इस अध्ययन में, मॉडल समूह में चूहों के सीरम आईएल -6 स्तर में वृद्धि हुई थी, लेकिन एलजेजेडडी उपचार के बाद सीरम आईएल -6 का उत्पादन काफी बाधित था।

सूक्ष्म अवलोकन से मलाशय ऊतक की भड़काऊ घुसपैठ, म्यूकोसल बाधा का विनाश, बलगम स्राव में कमी, गॉब्लेट कोशिकाओं का अनियमित या गायब होना, आंतों के क्रिप्ट का विरूपण या शोष, और एओएम / डीएसएस-उपचारित चूहों में ग्रंथि संरचना का स्पष्ट विकार दिखाई दिया। एलजेजेडडी उपचार के बाद, कोलोरेक्टल ऊतक में गॉब्लेट कोशिकाओं की आकृति विज्ञान सामान्य था, अवकाश और ग्रंथि की संरचना नियमित थी, और म्यूकोसल बाधा को नुकसान में सुधार हुआ था। उपकला तंग जंक्शन (टीजे) सेल अखंडता और पारगम्यता बनाए रखने के लिए एक अनिवार्य यांत्रिक बाधा है, जिसमें मुख्य रूप से ज़ो -1 और ऑक्लुडिन29 शामिल हैं। यह यूसी सीआरसी रोगियों के कोलोरेक्टल ऊतक में इस तरह के ज़ो-1 के रूप में टीजे प्रोटीन की अभिव्यक्तिकाफी 47,48 कम हो गया है कि बताया गया है. इस अध्ययन से पता चला है कि यूसी-सीआरसी चूहों की कोलोरेक्टल म्यूकोसल ऊतक संरचना नष्ट हो गई थी, और ऊतक में ZO-1 और ऑक्लुडिन की अभिव्यक्ति कम हो गई थी, जबकि LJZD इस कमी को उलट सकता है, यह सुझाव देते हुए कि LJZD ZO-1 और Occludin. परमाणु जुड़े प्रतिजन (KI67) सेल चक्र विनियमन का एक अनिवार्य घटक है और व्यापक रूप से ट्यूमर कोशिकाओं30,49 के प्रसार गतिविधि का एक संकेतक के रूप में प्रयोग किया जाता है. इस अध्ययन में, नियंत्रण समूह की तुलना में मॉडल समूह में KI67 प्रोटीन अभिव्यक्ति में वृद्धि हुई थी, जो कोलोरेक्टल ऊतक में महत्वपूर्ण ट्यूमर सेल प्रसार का संकेत देती है। एलजेजेडडी उपचार के बाद, केआई 67 प्रोटीन की अभिव्यक्ति कम हो गई थी, जिससे पता चला कि एलजेजेडडी का यूसी-सीआरसी पर अच्छा प्रभाव था।

सारांश में, एओएम इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन और डीएसएस परिसंचरण उत्तेजना प्रभावी रूप से एक छोटी अवधि में यूसी-सीआरसी मॉडल स्थापित कर सकते हैं और हिस्टोपैथोलॉजी और गठन के आणविक तंत्र के संदर्भ में मानव यूसी-सीआरसी के समान हैं। शास्त्रीय पर्चे के रूप में, एलजेजेडडी डीएआई स्कोर, कोलोरेक्टल ऊतक वजन और भड़काऊ कारक के स्तर को कम कर सकता है, प्रभावी रूप से कोलोरेक्टल लंबाई को छोटा करने से रोकता है, और यूसी-सीआरसी चूहों में यूसी के चरण में भूमिका निभा सकता है। इसके साथ ही, यह टीजे प्रोटीन की अभिव्यक्ति को बढ़ा सकता है, कोलोरेक्टल ऊतक की रोग संबंधी क्षति में काफी सुधार कर सकता है, KI67 प्रोटीन की अभिव्यक्ति को कम कर सकता है, ऊतक ट्यूमर की घटनाओं को काफी कम कर सकता है, और यूसी से सीआरसी की परिवर्तन प्रक्रिया को रोक सकता है। यह अध्ययन यूसी-सीआरसी के उपचार के लिए एक नया विचार प्रदान करता है।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है।

Acknowledgments

इस काम को जिलिन प्रांतीय विज्ञान और प्रौद्योगिकी विभाग (YDZJ202201ZYTS181) द्वारा समर्थित किया गया था।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Azoxymethane Sigma A5486
5-amino salicylic acid Kuihua Pharmaceuticals Group Jiamusi Luling Pharmaceutical Co., Ltd 3819413
C57BL/6J mice Liaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd NO 210726210100853716
Cover slip Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd 10212432C
DAB color development kit Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd 2005289
Dewatering machine  Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd JJ-12J
Dextran sulfate sodium Dalian Meilun Biotechnology Co., Ltd MB5535
Embedding machine Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd JB-P5
Hematoxylin-eosin dye Wuhan Hundred Degree Biotechnology Co., Ltd B1000
IL-6 Jiangsu Meimian Industrial Co., Ltd MM-0163M2
Isoflurane RWD Life Science Co., Ltd R510-22-10
KI67 primary antibody Google Biotechnology Inc GB121141
Neutral gum Wuhan Hundred Degree Biotechnology Co., Ltd 10004160
Object slide Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd 10212432A
Occludin primary antibody Affnity DF7504
Orthostatic optical microscope Nikon Nikon Eclipse CI
Pathological microtome Shanghai Leica Instrument Co., Ltd RM2016
ZO-1 primary antibody Abcam ab221547

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Sung, H., et al. Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 Cancers in 185 Countries. CA Cancer J Clin. 71 (3), 209-249 (2021).
  2. Tsai, K. Y., et al. Novel heavily fucosylated glycans as a promising therapeutic target in colorectal cancer. J Transl Med. 21 (1), 505 (2023).
  3. Chen, X., et al. Smoking, genetic predisposition, and colorectal cancer risk. Clin Transl Gastroenterol. 12 (3), e00317 (2021).
  4. Keum, N., Giovannucci, E. Global burden of colorectal cancer: emerging trends, risk factors and prevention strategies. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 16 (12), 713-732 (2019).
  5. Sninsky, J. A., Shore, B. M., Lupu, G. V., Crockett, S. D. Risk factors for colorectal polyps and cancer. Gastrointest Endosc Clin N Am. 32 (2), 195-213 (2022).
  6. Rivera, A. P., et al. Ulcerative colitis-induced colorectal carcinoma: A deleterious concatenation. Cureus. 14 (2), e22636 (2022).
  7. Faye, A. S., Holmer, A. K., Axelrad, J. E. Cancer in inflammatory bowel disease. Gastroenterol Clin North Am. 51 (3), 649-666 (2022).
  8. Becker, W. R., et al. Single-cell analyses define a continuum of cell state and composition changes in the malignant transformation of polyps to colorectal cancer. Nat Genet. 54 (7), 985-995 (2022).
  9. Choi, J. K., Kim, D. W., Shin, S. Y., Park, E. C., Kang, J. G. Effect of ulcerative colitis on incidence of colorectal cancer: Results from the nationwide population-based cohort study (2003-2013). J Cancer. 7 (6), 681-686 (2016).
  10. Gallo, G., Kotze, P. G., Spinelli, A. Surgery in ulcerative colitis: When? How. Best Pract Res Clin Gastroenterol. 32-33, 71-78 (2018).
  11. Shah, S. C., Itzkowitz, S. H. Colorectal cancer in inflammatory bowel disease: Mechanisms and management. Gastroenterology. 162 (3), 715.e3-730.e3 (2022).
  12. Fabregas, J. C., Ramnaraign, B., George, T. J. Clinical updates for colon cancer care in 2022. Clin Colorectal Cancer. 21 (3), 198-203 (2022).
  13. Hu, J., et al. Pharmacological and molecular analysis of the effects of Huangqi Jianzhong decoction on proliferation and apoptosis in GES-1 cells infected with H. pylori.Front Pharmacol. 13, 1009705 (2022).
  14. Shang, L., et al. Mechanism of Sijunzi decoction in the treatment of colorectal cancer based on network pharmacology and experimental validation. J Ethnopharmacol. 302 (Pt A), 115876 (2023).
  15. Zhang, X. Y., et al. Sishen pill maintained colonic mucosal barrier integrity to treat ulcerative colitis via Rho/ROCK signaling pathway. Evid Based Complement Alternat Med. 2021, 5536679 (2021).
  16. Wu, X., Dai, Y., Nie, K. Research progress of Liujunzi decoction in the treatment of tumor-associated anorexia. Drug Des Devel Ther. 16, 1731-1741 (2022).
  17. Han, Y., et al. Liujunzi decoction exerts potent antitumor activity in oesophageal squamous cell carcinoma by inhibiting miR-34a/STAT3/IL-6R feedback loop and modifies antitumor immunity. Phytomedicine. 111, 154672 (2023).
  18. Chen, D., Zhao, J., Cong, W. Chinese herbal medicines facilitate the control of chemotherapy-induced side effects in colorectal cancer: Progress and perspective. Front Pharmacol. 9, 1442 (2018).
  19. Wang, M., Wang, S., Su, Q., Ma, T. Effect of combining early chemotherapy with Zhipu Liujunzi decoction under the concept of strengthening and consolidating body resistance for gastric cancer patients and nursing strategy. Contrast Media Mol Imaging. 2021, 2135924 (2021).
  20. Lin, Y., Koumba, M. H., Qu, S., Wang, D., Lin, L. Blocking NFATc3 ameliorates azoxymethane/dextran sulfate sodium induced colitis-associated colorectal cancer in mice via the inhibition of inflammatory responses and epithelial-mesenchymal transition. Cell Signal. 74, 109707 (2020).
  21. Yu, C. T., et al. Identification of significant modules and targets of Xian-Lian-Jie-Du decoction based on the analysis of transcriptomics, proteomics and single-cell transcriptomics in colorectal tumor. J Inflamm Res. 15, 1483-1499 (2022).
  22. Lin, L., Wang, D., Qu, S., Zhao, H., Lin, Y. miR-370-3p alleviates ulcerative colitis-related colorectal cancer in mice through inhibiting the inflammatory response and epithelial-mesenchymal transition. Drug Des Devel Ther. 14, 1127-1141 (2020).
  23. Qiu, X., Ma, J., Wang, K., Zhang, H. Chemopreventive effects of 5-aminosalicylic acid on inflammatory bowel disease-associated colorectal cancer and dysplasia: a systematic review with meta-analysis. Oncotarget. 8 (1), 1031-1045 (2017).
  24. Hou, Y., et al. Longzhibu disease and its therapeutic effects by traditional Tibetan medicine: Ershi-wei Chenxiang pills. J Ethnopharmacol. 249, 112426 (2020).
  25. Xie, N., et al. Rhodiola crenulate alleviates hypobaric hypoxia-induced brain injury via adjusting NF-κB/NLRP3-mediated inflammation. Phytomedicine. 103, 154240 (2022).
  26. Gok, A., et al. Role of reduced Bdnf expression in novel Apc mutant allele-induced intestinal and colonic tumorigenesis in mice. In Vivo. 37 (4), 1562-1575 (2023).
  27. Lin, Y., et al. Pou3f1 mediates the effect of Nfatc3 on ulcerative colitis-associated colorectal cancer by regulating inflammation. Cell Mol Biol Lett. 27 (1), 75 (2022).
  28. Xu, W., Zhao, R., Yuan, B. The therapeutic effect of traditional LiuJunZi decoction on ovalbumin-induced asthma in Balb/C mice. Can Respir J. 2021, 6406295 (2021).
  29. Kaihara, T., et al. Redifferentiation and ZO-1 reexpression in liver-metastasized colorectal cancer: possible association with epidermal growth factor receptor-induced tyrosine phosphorylation of ZO-1. Cancer Sci. 94 (2), 166-172 (2003).
  30. Lei, H. T., et al. Ki67 testing in the clinical management of patients with non-metastatic colorectal cancer: Detecting the optimal cut-off value based on the restricted cubic spline model. Oncol Lett. 24 (6), 420 (2022).
  31. Olén, O., et al. Colorectal cancer in ulcerative colitis: a Scandinavian population-based cohort study. Lancet. 395 (10218), 123-131 (2020).
  32. Arnold, M., et al. Global patterns and trends in colorectal cancer incidence and mortality. Gut. 66 (4), 683-691 (2017).
  33. Biller, L. H., Schrag, D. Diagnosis and treatment of metastatic colorectal cancer: A review. Jama. 325 (7), 669-685 (2021).
  34. Talero, E., et al. Expression patterns of sirtuin 1-AMPK-autophagy pathway in chronic colitis and inflammation-associated colon neoplasia in IL-10-deficient mice. Int Immunopharmacol. 35, 248-256 (2016).
  35. Qian, Z., et al. Mulberry fruit prevents LPS-induced NF-κB/pERK/MAPK signals in macrophages and suppresses acute colitis and colorectal tumorigenesis in mice. Sci Rep. 5, 17348 (2015).
  36. Pothuraju, R., et al. Depletion of transmembrane mucin 4 (Muc4) alters intestinal homeostasis in a genetically engineered mouse model of colorectal cancer. Aging. 14 (5), 2025-2046 (2022).
  37. Perše, M., Cerar, A. Dextran sodium sulphate colitis mouse model: traps and tricks. J Biomed Biotechnol. 2012, 718617 (2012).
  38. Zeng, B., et al. Dextran sodium sulfate potentiates NLRP3 inflammasome activation by modulating the KCa3.1 potassium channel in a mouse model of colitis. Cell Mol Immunol. 19 (8), 925-943 (2022).
  39. Parang, B., Barrett, C. W., Williams, C. S. AOM/DSS model of colitis-associated cancer. Methods Mol Biol. 1422, 297-307 (2016).
  40. Tanaka, T., et al. A novel inflammation-related mouse colon carcinogenesis model induced by azoxymethane and dextran sodium sulfate. Cancer Sci. 94 (11), 965-973 (2003).
  41. Suzuki, R., Kohno, H., Sugie, S., Nakagama, H., Tanaka, T. Strain differences in the susceptibility to azoxymethane and dextran sodium sulfate-induced colon carcinogenesis in mice. Carcinogenesis. 27 (1), 162-169 (2006).
  42. De Robertis, M., et al. The AOM/DSS murine model for the study of colon carcinogenesis: From pathways to diagnosis and therapy studies. J Carcinog. 10, 9 (2011).
  43. Song, J. L., et al. Dietary mixed cereal grains ameliorate the azoxymethane and dextran sodium sulfate-induced colonic carcinogenesis in C57BL/6J mice. J Med Food. 23 (4), 440-452 (2020).
  44. Zou, Y. F., et al. Effects of Huaier extract on ameliorating colitis-associated colorectal tumorigenesis in mice. Onco Targets Ther. 13, 8691-8704 (2020).
  45. Luo, X., et al. Obacunone reduces inflammatory signalling and tumour occurrence in mice with chronic inflammation-induced colorectal cancer. Pharm Biol. 58 (1), 886-897 (2020).
  46. Dai, Y., et al. Liujunzi Decoction ameliorated cisplatin-induced anorexia by inhibiting theJAK-STAT signaling pathway and coordinating anorexigenic and orexigenic neuropeptides in rats. J Ethnopharmacol. 285, 114840 (2022).
  47. Ghosh, D., Dutta, A., Kashyap, A., Upmanyu, N., Datta, S. PLP2 drives collective cell migration via ZO-1-mediated cytoskeletal remodeling at the leading edge in human colorectal cancer cells. J Cell Sci. 134 (18), jcs253468 (2021).
  48. Yan, S., et al. Berberine regulates short-chain fatty acid metabolism and alleviates the colitis-associated colorectal tumorigenesis through remodeling intestinal flora. Phytomedicine. 102, 154217 (2022).
  49. Ma, Y. L., et al. Immunohistochemical analysis revealed CD34 and Ki67 protein expression as significant prognostic factors in colorectal cancer. Med Oncol. 27 (2), 304-309 (2010).

Tags

कोलोप्रोक्टाइटिस कैंसर मॉडल चूहे चिकित्सीय प्रभाव चीनी चिकित्सा कोलोरेक्टल कैंसर पाचन तंत्र घातकता पूर्ववर्ती घाव यूसी से जुड़े सीआरसी नई दवा विकास पारंपरिक चीनी चिकित्सा लिजुन्ज़ी काढ़ा एज़ोमेथेन डेक्सट्रान सल्फेट सोडियम माउस शरीर का वजन कोलोरेक्टल लंबाई रोग कारक भड़काऊ कारक कोलोरेक्टल बैरियर फ़ंक्शन कैंसर मार्कर रोकथाम और उपचार
चूहों में कोलोप्रोक्टाइटिस कैंसर मॉडल की स्थापना और चीनी चिकित्सा के चिकित्सीय प्रभाव का मूल्यांकन
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Lyu, D., Wang, W., Xu, H., Li, P.,… More

Lyu, D., Wang, W., Xu, H., Li, P., Zhang, W., Meng, X., Liu, S. Establishment of Coloproctitis Cancer Model in Mice and Evaluation of Therapeutic Effect of Chinese Medicine. J. Vis. Exp. (200), e66045, doi:10.3791/66045 (2023).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter