Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Beginnen Sie mit der Auswahl einer dritten Instar Larve, die größte der Larven formen, aus dem Kulturmedium, und waschen Sie es mit Wasser, um jede Nahrung zu entfernen. Da die Larvenaugen, oder Bolwig-Organe, in der oberen Vorderseite der Larve befinden, legen Sie die Larve in der Mitte einer Agarplatte mit der Lichtquelle über dem Tier. Schalten Sie den Raum Licht und lassen Sie die Larve an die Dunkelheit zu akklimatisieren.
Da die Larve an einem Lichtfleck, der durch sichtbares Licht gemacht wird, kaum nachweisbar ist, schalten Sie Infrarot-LED-Leuchten ein, um das Tier für die Kamera zu beleuchten. Warten Sie, bis das Tier beginnt, direkt zu kriechen, um seinen Weg zu kontrollieren. Und drehen Sie dann die Platte so, dass die Larve direkt zum Lichtfleck kriecht.
Im folgenden Beispiel führen wir den Lichtfleck-Assay durch, um die Fähigkeit verschiedener genetischer Stämme von Drosophila-Larven zu testen, lichtzuentkommen.
- Bevor Sie die Larve in das Bildgebungs-Setup einführen, erfassen Sie ein kurzes Video der Lichtposition und nennen Sie das ungefilterte Steuerhintergrundvideo "lightarea1". Legen Sie den Filter wieder auf die Kameralinse und schalten Sie ein Licht weit vom Versuchsgerät bei einer möglichst niedrigen Einstellung ein, während die Larven dennoch deutlich beobachtet werden können. Verwenden Sie einen Löffel, um einige Larven aus dem Kulturmedium zu entfernen, und wählen Sie vorsichtig ein drittes instar larva aus.
Waschen Sie die Larve in destilliertem Wasser, und legen Sie die Larve in die Mitte der Agarplatte. Entfernen Sie vorsichtig überschüssiges Wasser aus der Larve, und schalten Sie das Raumlicht aus. Lassen Sie die Larve für zwei Minuten in der dunklen Umgebung akklimatisieren, bevor Sie das Infrarot-LED-Licht einschalten.
Bürsten Sie die Larve vorsichtig in die Mitte der Platte. Wenn die Larve gerade zu kriechen beginnt, drehen Sie die Platte, um die Larve zum Lichtfleck zu führen. Klicken Sie auf Erfassen, Setup und Videoaufnahme, um den Speicherpfad auszuwählen. Und klicken Sie auf Aufnahme starten, um aufzunehmen. Lassen Sie die Lava kriechen, betreten und lassen Sie den Lichtfleck, bis er fast aprioriviert ist, und klicken Sie dann auf Aufnahme stoppen.
Bewegen Sie den Filter von der Kamera weg und erfassen Sie ein kurzes Video von der Position des Lichtflecks. Benennen Sie dann den Beitrag als ungefiltertes Video, "lightarea2", und vergleichen Sie dieses Video mit dem "lightarea1"-Video, um sicherzustellen, dass die Lichtfleckposition nicht geändert wird.
