Inyección intratorácica: administración de compuestos al corazón del pez cebra adulto

- Para empezar, coloca una esponja húmeda con una hendidura en una placa de Petri. A continuación, anestesia a un pez adulto con una solución de tricaína y transfiéralo cuidadosamente a la hendidura con el lado ventral hacia arriba. Coloque la placa de Petri bajo un microscopio estereoscópico y observe el movimiento del corazón latiendo debajo de la piel.

Coloque una aguja de mincroinyección en un ángulo de 45 grados con respecto al eje del cuerpo por encima del corazón latiendo ubicado entre el opérculo y la cintura pectoral. Suavemente, haga avanzar la aguja a través de la piel hasta el pericardio, una membrana delgada que rodea el corazón. Administre la mezcla inyectable en el pericardio.

La inyección contiene un tinte trazador, como el rojo de fenol, para rastrear el movimiento de las soluciones. Retire la aguja del tórax. Transfiera el pez inmediatamente al tanque de recuperación que contiene agua del sistema y controle para obtener una recuperación completa de la anestesia. En el siguiente protocolo, realizaremos una inyección intratorácica para administrar un compuesto de prueba y examinar sus efectos sobre la regeneración del corazón.

- Use una red para atrapar un pez adulto y transfiéralo a la solución anestésica. Después de uno o dos minutos, cuando el pez deje de nadar y el movimiento del opérculo se reduzca, toque el pez con una cuchara de plástico para asegurarse de que no reaccione a ningún contacto. A continuación, transfiera rápida y cuidadosamente el pescado a la ranura de la esponja húmeda con el lado ventral hacia arriba. La cabeza del pez debe apuntar en dirección opuesta a la mano dominante del operador.

Bajo el microscopio estereoscópico, observe cuidadosamente el movimiento del corazón latiendo debajo de la piel del pez. Visualmente, determine el punto de inyección por encima del corazón latiendo y en el centro del triángulo definido por las placas cartilaginosas ventrales. Inserte la punta del capilar en un ángulo entre 30 y 45 grados con respecto al eje del cuerpo. Penetrar suavemente en la piel con la punta del microcapilar hasta el pericardio.

Una vez que la aguja esté dentro del pericardio, presione el pedal del dispositivo microinyector para completar la inyección. Después de la inyección, retire suavemente el capilar del tórax e inmediatamente transfiera el pez a un tanque con agua del sistema para su recuperación. Monitoree a los peces hasta la recuperación total de la anestesia. Para analizar los efectos de la inyección, recoja el corazón en el momento deseado y prepárelo para un análisis posterior.