Aislamiento de células madre de melanoma: un método para obtener células de melanoma positivas y negativas CD133 mediante la clasificación de células activadas magnéticamente

- El melanoma alberga una pequeña subpoblación de células madre cancerosas que poseen capacidades de autorrenovación e iniciación de tumores. CD133 o Prominin-1, una glicoproteína transmembrana pentaspan, es uno de los marcadores clave expresados por las células madre de cáncer de melanoma metastásico. Para aislar las células CD133 positivas, comience con una suspensión de las células primarias de melanoma en un tampón adecuado.

Incubar con un reactivo de bloqueo que contiene proteínas que bloquean los sitios de unión no específicos en la superficie celular. Tratar las células con anticuerpos primarios CD133 biotinilados. Estos anticuerpos se unen a los antígenos CD133 expresados en las células CD133 positivas. Ahora, agregue microperlas magnéticas anti-biotina a la suspensión. Incuba para que las microperlas se unan a las células marcadas con biotina.

Finalmente, pase la suspensión incubada a través de una columna colocada en un campo magnético. Con la influencia magnética, todas las células positivas para CD133 marcadas con las microperlas se adhieren a la columna, mientras que las células no marcadas pasan a través de ella. Recoja estas células CD133 negativas sin marcar. Retire