Ensayo de formación de colonias de queratinocitos: un ensayo in vitro para evaluar la capacidad de los queratinocitos para convertirse en colonias

- El ensayo de formación de colonias determina la capacidad de las células individuales para proliferar y formar colonias. Comience con una piel de dorsal de ratón extirpada en una placa de cultivo. Raspe el tejido subcutáneo y la grasa del lado ventral de la piel. Trate el tejido con una solución de digestión. Las enzimas proteolíticas de la solución degradan la matriz extracelular, induciendo la disociación de las células epidérmicas.

Raspe suavemente la capa epidérmica para liberar las células y los pelos disociados en un medio de recolección. Filtre la suspensión a través de un colador adecuado para atrapar pelos o cualquier residuo y obtener una suspensión unicelular de células epidérmicas. Transfiera el volumen deseado de esta suspensión celular a una placa recubierta de colágeno que contiene una capa adherente de células alimentadoras detenidas por el crecimiento. Suplementar con un medio adecuado que favorezca la supervivencia de los queratinocitos.

Durante el cultivo, los queratinocitos se adhieren a la capa alimentadora. Además, estas células alimentadoras secretan factores de crecimiento y sintetizan proteínas de la matriz extracelular que apoyan el crecimiento de los qu