Un ensayo para medir la citotoxicidad inducida químicamente en cortes de pulmón humanos cortados con precisión

Tome una placa de varios pocillos que contenga cortes de pulmón humanos cortados con precisión, que mantienen la microarquitectura pulmonar nativa.

Retire los medios. Agregue concentraciones crecientes de agente de prueba a los pocillos e incube.

Dependiendo de su potencial citotóxico, el agente de prueba altera las membranas celulares, induciendo la muerte celular y reduciendo las células viables dentro de las rodajas.

Después de la incubación, retire el medio. Sumerja las rodajas en un medio que contenga sal de tetrazolio soluble en agua, o WST-1, y un reactivo de acoplamiento de electrones.

incubar. En las células metabólicamente activas, el sistema de transporte de electrones de la membrana plasmática transfiere electrones del NADH intracelular al reactivo de acoplamiento de electrones extracelular, reduciendo el colorante impermeable a las células WST-1 a formazán estable, de color amarillo oscuro y soluble en agua.

Después de la incubación, agite la placa para distribuir uniformemente el formazán y transfiéralo a una placa de pocillos múltiples.

Con un lector de microplacas, mida la absorbancia de formazán, indicativa de la viabilidad del tejido.

Una disminución en la absorba