Inducción de un infarto agudo de protuberancia en un modelo de rata mediante estimulación eléctrica

Asegure una rata anestesiada en una unidad estereotáxica.

Retire el pelaje del cuero cabelludo y desinfecte el sitio de la incisión. Haga una incisión en la línea media y retraiga la piel para exponer el cráneo.

Retire el tejido conectivo para evitar interferencias con el taladro. Identificar el bregma como punto de referencia para determinar las coordenadas de la protuberancia, una estructura ubicada en el tronco encefálico.

Perfora un agujero en el cráneo.

Inserte una sonda a través del orificio para llegar a la protuberancia.

A continuación, conecte los electrodos a un estimulador eléctrico, conectando el ánodo a la sonda para la estimulación cerebral y el cátodo a la oreja de la rata para completar el circuito.

Administra un pulso eléctrico a la protuberancia, induciendo daño tisular localizado o infarto.

Después de la estimulación, deje la sonda en su lugar brevemente para estabilizar el efecto de estimulación.

Luego, retire lentamente la sonda y selle el sitio quirúrgico con cemento óseo.

Sutura la incisión y devuelve la rata a su jaula para su recuperación y análisis neurológico.

Precaliente la almohadilla térmica a 37 grados centígrados inmediatamente antes de la anestesia y coloque el taladro de cráneo en el soporte del marco estereotáxico. Confirme una falta de respuesta al reflejo del pedal en la primera rata anestesiada y monte la rata en el marco estereotáxico en posición prona sobre la almohadilla térmica. Coloque las barras de los oídos sobre el canal auditivo para asegurar la cabeza, teniendo cuidado de que el cráneo se mantenga horizontal para evitar cualquier sesgo de la inyección.

Aplique ungüento en los ojos del animal y use una microafeitadora para eliminar el pelo del cráneo. Use un marcador para dibujar una línea de 3 centímetros a lo largo de la línea media del cráneo desde la línea del canto lateral bilateral hasta 0,5 centímetros detrás de la fontanela posterior, y use un bisturí para hacer una incisión en la línea media a lo largo de la línea marcada. Use un hisopo de algodón para extraer la sangre y coloque un trozo de cinta quirúrgica a cada lado del colgajo de piel para exponer el cráneo.

Use un hisopo nuevo empapado con cloruro de sodio al 0.9% para eliminar suavemente cualquier tejido conectivo del cráneo y localizar el bregma. Use un rotulador de punta fina para indicar el punto central del bregma como punto de origen. Coloque la fresa a 6 milímetros antero-posterior, 2 milímetros medial-lateral. Use el taladro para realizar cuidadosamente una craneotomía de 1 milímetro de diámetro. A continuación, reemplace el taladro con una sonda de calibre 22 con una funda aislada, con la punta colocada 2 milímetros por encima del extremo proximal de la funda.

Inserte la vaina 7 milímetros en el cerebro y avance la sonda a lo largo de la vaina hasta que la parte superior de la sonda esté 9 milímetros por debajo de la superficie del cerebro. Conecte los electrodos a un estimulador eléctrico y conecte el ánodo a la sonda. Luego, conecte el cátodo a la oreja de la rata. A continuación, encienda el estimulador eléctrico y ajuste el ancho de pulso único a 4.050 milisegundos, el voltaje a 50 voltios y la corriente a 4 miliamperios.

Deje la sonda en posición durante cinco minutos después de la estimulación, antes de retirar el dispositivo del cerebro. Cubra la craneotomía con cemento óseo y deje que el cemento se seque antes de usar filamentos de sutura de poliamida 4-0 para cerrar la herida. Después de tres o cuatro puntos, haga nudos quirúrgicos estándar 2-1-1. Luego, inyecte intraperitonealmente a la rata con 250 microlitros de penicilina y controle a la rata cada 15 minutos hasta que esté completamente despierta antes de devolver al animal a su jaula.