Preparación de segmentados microtúbulos para estudiar las mociones impulsadas por las que desmontan microtúbulos Ends

El objetivo general del siguiente experimento es estudiar los movimientos de las moléculas de proteínas y las perlas recubiertas de proteínas con los extremos de los microtúbulos despolimerizantes. Esto se logra ensamblando una cámara de flujo reutilizable con un cubreobjetos de tamaño limpio. A continuación, se preparan semillas de microtúbulos adheridas al cubreobjetos y se utilizan para nuclear microtúbulos, que luego se estabilizan temporalmente con tapas fotodestructibles.

A continuación, se introducen proteínas marcadas con GFP o perlas recubiertas de proteínas en la cámara de flujo y se unen a los microtúbulos segmentados. A continuación, se desencadena la despolimerización de la microtina mediante la eliminación de los tapones mediante fotoablación. Las imágenes se analizan con CH para determinar si las proteínas marcadas exhiben un comportamiento de seguimiento de la punta, que es el movimiento con los extremos de los microtúbulos despolimerizantes.