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DOI: 10.3791/51339-v
Francisco-Jose Fernandez-Gomez1, Fanny Jumeau1,2, Maxime Derisbourg1, Sylvie Burnouf1, Hélène Tran1, Sabiha Eddarkaoui1, Hélène Obriot1, Virginie Dutoit-Lefevre3, Vincent Deramecourt4, Valérie Mitchell2, Didier Lefranc3, Malika Hamdane1, David Blum1, Luc Buée1, Valérie Buée-Scherrer1, Nicolas Sergeant1
1Team Alzheimer & Tauopathies, Jean-Pierre Aubert Research Centre,Inserm UMR 837, 2EA 4308-Department of Reproductive Biology-Spermiology-CECOS,CHRU-Lille, 3EA2686-Laboratorie d'Immunologie,Faculté de Médecine - Pôle Recherche, 4Department of Neurology,CHRU-Lille
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Un protocolo de extracción de proteína común utilizando tampón de urea / tiourea / SDS para el tejido cerebral de ratones humana y permite indentification de proteínas mediante 2D-DIGE y su posterior caracterización en mini inmunotransferencia 2DE. Este método le permite a uno obtener resultados más reproducibles y fiables a partir de biopsias humanas y modelos experimentales.
El objetivo general del siguiente experimento es extraer proteínas de tejido cerebral humano y de ratón para su análisis proteómico. Esto se logra mediante el uso de un tampón de lisis común para obtener la misma extracción de proteínas adaptada para enfoques de electroforesis bidimensional. A continuación, la electroforesis en gel de diferencia de fluorescencia bidimensional se utiliza para separar proteínas para la identificación por espectrometría de masas.
A continuación, se realiza una electroforesis en gel 2D en miniatura con inmunotransferencia para identificar las modificaciones postraduccionales. Los resultados pueden mostrar la expresión global de proteínas. El huésped cambia la traducción de todos los productos de ligamentización y catalíticos en función de las diferencias en el punto isoeléctrico y el peso molecular.
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