Inducir miointimal Hiperplasia Versus aterosclerosis en ratones: una introducción de dos modelos válidos

El objetivo general del siguiente experimento es introducir dos modelos animales válidos que conduzcan al estrechamiento de la aorta a través de diferentes mecanismos. El primer modelo es el cateterismo con balón de la aorta para crear el desarrollo de hiperplasia miointimal. En primer lugar, se expone y se pinza la aorta abdominal infrarrenal.

A continuación, se abre la aorta con una incisión transversal y se introduce el catéter con balón. A continuación, se desnuda el endotelio de la aorta con el catéter inflado y se completa la cirugía. El segundo modelo es una manipulación dietética de ratones transgénicos APOE nulos para crear placas ateroscleróticas.

Estos ratones se alojan en condiciones estándar y se alimentan con una dieta occidental alta en lípidos durante cuatro a seis meses. En última instancia, el análisis histológico de la hiperplasia mioíntima inducida quirúrgicamente y el modelo de restricción dietética muestra que dan lugar a un estrechamiento luminal diferente. Hoy te mostraremos dos modelos diferentes para inducir el estrechamiento luminal: el modelo de ratón utilizando un catéter de balón para inducir lesión vascular y el modelo de esclerosis arterial.

Utilizando ratones transgénicos en la dieta occidental, el modelo de catéter con balón puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la estenosis. El modelo de ratón transgénico homocigoto con mutación E superior se utiliza para estudiar la fisiopatología de la aterosclerosis. Para el modelo de hiperplasia intimal, obtenga ratones C 57 black six J que pesan unos 25 gramos.

Mantenerlos en condiciones normales con una dieta normal. Después de anestesiar al ratón con un 2% de flúor, recortar el vello abdominal, proporcionar carprofeno por inyección subcutánea para la analgesia. A continuación, alternativamente, desinfecte la piel con yodo Provo y etanol al 80% en dos ciclos.

Ahora verifique la ausencia de reflejos con un pellizco en el dedo del pie. Comience la cirugía separando la piel y el músculo a lo largo de la alba lineal. A continuación, envuelva los intestinos en un guante humedecido con solución salina y, a continuación, limpie atentamente el tejido graso, cubriendo la aorta abdominal.

Ahora exponga la aorta infrarrenal hasta su bifurcación. Teniendo cuidado de no dañar ningún vaso de rama. Ahora pinza la aorta.

Primero coloque una pinza microquirúrgica en la aorta infrarrenal proximal para cerrar el flujo sanguíneo. En segundo lugar, aplique una segunda pinza distal junto a la bifurcación aórtica. Cuando se interrumpe el flujo sanguíneo, haga una pequeña incisión en la aorta cerca de la pinza proximal.

Insertar el catéter hacia la pinza distal de la aorta para producir una lesión endotelial. Desnudar la aorta inflando el globo del catéter con cuidado y tirando lentamente del catéter en la dirección de la pinza proximal. Repita esto, maniobre dos veces para un total de tres inflados de aorta.

Ahora retire el catéter y cierre la incisión aórtica con suturas corridas de 10 au prolina. Con las suturas colocadas, abra con cuidado la pinza distal si hay sangrado en el sitio de la autotomía AOR. Vuelva a cerrar la pinza, localice el sangrado y deténgalo con puntos interrumpidos adicionales.

Cuando no haya sangrado, abra lentamente la pinza proximal. El pulso aórtico debe ser visible distal a la incisión. Ahora coloque los intestinos en C dos.

A continuación, cierre la pared abdominal comenzando por la capa muscular utilizando seis suturas de prolina OTT. A continuación, cierre la piel con cinco suturas OTT y transfiera al ratón de vuelta a su jaula. Durante los tres primeros días postoperatorios, suministre metrazol al agua potable para el control del dolor.

Monitorizar al animal durante toda su recuperación, que dura unos 28 días. Para el modelo de aterosclerosis, obtenga ratones con deficiencia de POE A de cuatro semanas de edad. Aloje a estos ratones en condiciones estándar con una dieta occidental alta en lípidos durante cuatro a seis meses.

Mantener esta dieta durante todo el experimento. Seis horas antes de la extracción de la aorta, retire el acceso a los alimentos. A continuación, prepare el ratón para la cirugía como se describe en la sección anterior.

Comience la cirugía abriendo el tórax. A continuación, corte el ápice del corazón y perfundítelo bajo una suave presión con tres mililitros de aldehído al 4%Paraform a través de la raíz aórtica para fijar la aorta. A continuación, libere la aorta desde la raíz hasta su bifurcación.

Trate de eliminar la mayor cantidad posible de tejido graso. A continuación, corte el arco aórtico y guárdelo en formaldehído al 4%. Ahora transfiera el corazón y el árbol aórtico a un plato de silicona con PBS en el plato.

Corta un extremo del árbol aórtico y fíjalo a la capa de silicona con alfileres finos. Abra la aorta longitudinalmente y deje que el tejido aórtico permanezca en PBS a temperatura ambiente durante unos minutos. A continuación, enjuague el pañuelo una vez con etanol al 50% y sumérjalo en un baño de Sudán.

Tres, solución de tinción durante unos 15 minutos. Después de teñir, enjuague rápidamente el pañuelo con etanol al 50% durante unos segundos para eliminar solo el exceso de Sudán. Tres enjuagues excesivos eliminarán demasiada mancha, enjuague inmediatamente el tejido con agua destilada y proceda con la obtención de imágenes Para el modelo de hiperplasia mioíntima, se recolectaron aortas de ratón denudadas, se incrustaron parafina y se tiñeron con cromo. Las proporciones Im se calcularon a partir de las secciones de tinción tricromática midiendo el espesor de la íntima y el medio.

Utilizando análisis computarizado seguido del cálculo de la proporción, el espesor máximo de la placa se midió como el espesor máximo de la íntima en el lumen por morfoárbol computarizado. El porcentaje de obliteración luminal se calculó como la relación entre el nuevo lumen interno y el lumen anterior. El área de la placa se calculó restando el nuevo lumen interno del lumen anterior.

Los mismos análisis se realizaron en secciones transversales teñidas con tricromo del modelo de aterosclerosis en la válvula aórtica, el arco aórtico y la aorta descendente solo para el modelo de aterosclerosis. La aorta descendente se abrió longitudinalmente y se tiñó con rojo Sudán. El área de la placa y el área aórtica total se midieron con la ayuda de una computadora para el análisis de ambos modelos.

Se pueden realizar otros métodos, como la histopatología y la microscopía de inmunofluorescencia confocal, para responder a preguntas como la oblación luminal, la morfología y la celularidad. Gracias por mirar y buena suerte con tus experimentos.