Name: Biofuncionalizadas prusiana nanopartículas azul para Multimodal Molecular Aplicaciones de imágenes (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-04-28T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 28 s
Description: Aprende a sintetizar nanopartículas de azul de Prusia biofuncionalizadas para aplicaciones de imagen molecular multimodal mediante resonancia magnética y fluorescencia. Este método permite visualizar poblaciones celulares específicas con alta sensibilidad.

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Este trabajo fue apoyado por el Instituto Sheikh Zayed para la Innovación Quirúrgica Pediátrica (Premios RAC #30000174 y 30001489).

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Los autores no tienen nada que revelar.

Este artículo ha presentado los métodos para la síntesis de una nueva clase de agentes formadores de imágenes multimodales, moleculares basados ​​en nanopartículas azul de Prusia biofuncionalizadas. Las técnicas de imagen molecular incorporados en las nanopartículas son imágenes de fluorescencia y resonancia magnética molecular, debido a sus características complementarias. Las nanopartículas azul de Prusia biofuncionalizadas tienen un diseño de núcleo-corteza. Los pasos clave en la síntesis de estas nanopartículas son:...

La imagen molecular es la visualización no invasiva y precisa de los procesos biológicos a nivel celular, subcelular, y los niveles moleculares 1. La imagen molecular permite un espécimen a permanecer en su microambiente nativo mientras que sus vías y mecanismos endógenos son evaluados en tiempo real. Típicamente, la imagen molecular implica la administración de un agente de imagen exógeno en forma de una pequeña molécula, macromolécula, o nanopartículas para visualizar, objetivo, y trazar procesos fisiológicos pertinentes se está estudiando 2. Las diversas modalidades de imagen que se han explorado en imagen molecular incluyen MRI, CT, PET, SPECT, ultrasonido, photoacoustics, espectroscopia Raman, la bioluminiscencia, la fluorescencia y microscopía intravital 3. Multimodal de imágenes es la combinación de dos o más modalidades de imagen donde la combinación mejora la capacidad de visualizar y caracterizar diversos procesos y eventos 4 biológicos. Multimodal de imágenes explota las ventajas de las técnicas de formación de imágenes individuales, mientras que la compensación de sus limitaciones individuales 3. En este artículo se presenta el protocolo para la síntesis de nanopartículas azul de Prusia biofuncionalizadas (PB PN) - una nueva clase de agentes de imágenes multimodales, molecular. Los PN PB se utilizan para obtener imágenes de fluorescencia y resonancia magnética molecular. PB es un pigmento que consiste de la alternancia de hierro (II) y hierro (III) átomos en una red cúbica centrada en las caras (Figura 1). La celosía PB se compone de ligandos cianuro lineales en una Fe II - CN - vinculación Fe III que incorpora cationes para equilibrar las cargas dentro de su red tridimensional 5. La capacidad de PB incorporar cationes en su celosía se explota mediante la carga por separado gadolinio y iones de manganeso en los PN PB para el contraste de resonancia magnética. La razón fundamental para la consecución de un diseño de nanopartículas para el contraste RM es debidolas ventajas de este diseño ofrece en relación con los agentes de contraste MRI actuales. La gran mayoría de agentes de contraste MRI aprobados por la FDA de Estados Unidos son quelatos de gadolinio que son paramagnéticos en la naturaleza y proporcionan contraste positivo por el mecanismo de relajación 6,7,8-spin celosía. En comparación con un solo gadolinio-quelato que proporciona baja intensidad de señal por sí mismo, la incorporación de múltiples iones de gadolinio dentro de la red PB de las nanopartículas proporciona una mayor intensidad de la señal (contraste positivo) 3,9. Además, la presencia de múltiples iones de gadolinio dentro de la red PB aumenta la densidad de espín general y la magnitud de paramagnetismo de las nanopartículas, que perturba el campo magnético local en su vecindad, generando de ese modo contraste negativo por el mecanismo de relajación espín-espín. Así, las nanopartículas que contienen gadolinio funcionar tanto como T 1 (positivo) y T 2 agentes de contraste (negativo) 10,11. En un subgrupo de pacientes con insuficiencia renal, la administración de agentes de contraste con gadolinio se ha relacionado con el desarrollo de fibrosis sistémica nefrogénica 8,12, 13. Esta observación ha llevado a investigaciones sobre el uso de iones paramagnéticos alternativos como agentes de contraste para MRI. Por lo tanto, el diseño versátil de las nanopartículas está adaptado para incorporar iones de manganeso dentro de la red PB. Similar a gadolinio quelatos, manganeso quelatos también son paramagnéticos y se utilizan normalmente para proporcionar una intensidad de señal positiva en la RM 7,14. Al igual que con gadolinio PB PN, las PB PN contienen manganeso también funcionan como T 1 (positivo) y T 2 agentes de contraste (negativo). Para incorporar capacidades de formación de imágenes de fluorescencia, la nanopartícula &quot;núcleos&quot; se recubren con una cáscara &quot;biofuncional&quot; que consiste en la avidina marcada con fluorescencia-glicoproteína (Figura 1). Avidina no sólo permite imágenes de fluorescencia, sino que también sirve como una plataforma de acoplamiento para ligandos biotinilados que se dirigen a las células y tejidos específicos. La unión de avidina-biotina es una de las más fuertes enlaces conocidos, no covalentes caracterizadas por extremadamente fuerte afinidad de unión entre avidina y biotina 15. La unión de ligandos biotinilados a la avidina-revestido PB PN confiere posibilidades de marketing moleculares a los PN PB. La motivación para la búsqueda de imágenes de fluorescencia y MR usando PB PN se debe a que estas técnicas de imagen poseen características complementarias. Imágenes de fluorescencia es una de las técnicas de imagen molecular óptica más utilizado, y permite la visualización simultánea de múltiples objetos a altas sensibilidades 1,16,17. Imágenes de fluorescencia es una modalidad segura, no invasiva, pero se asocia con bajas profundidades de penetración y resoluciones espaciales 1,3,16. Por otro lado, MRI genera un alto temporald resolución espacial de forma no invasiva y sin necesidad de radiación ionizante 1,3,16. Sin embargo MRI sufre de baja sensibilidad. Por lo tanto, imágenes de fluorescencia y la RM fueron seleccionadas como las técnicas de imagen molecular, debido a sus características complementarias de penetración de profundidad, sensibilidad y resolución espacial. En este artículo se presenta el protocolo para la síntesis y biofuncionalización de los PN PB, PB PN (GdPB), y que contiene gadolinio-PB PN (MnPB) 10,11 que contiene manganeso. Los siguientes métodos se describen: 1) medición del tamaño, la carga y la estabilidad temporal de las nanopartículas, 2) Evaluación de la citotoxicidad de las nanopartículas, 3) de medición de relaxividades MRI, y 4) la utilización de las nanopartículas para la fluorescencia y la RM molecular de una población de células diana in vitro. Estos resultados demuestran el potencial de los NPs para uso como agentes de formación de imágenes multimodales, moleculares in vivo.

<table><tbody><tr><td>Hexacianoferrato de potasio (II) trihidrato (K4Fe(CN)6&middot; 3H2O)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9387</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro de manganeso (II) tetrahidratado (MnCl2&middot; 4H2O)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>221279</td><td></td></tr><tr><td>hexahidrato de nitrato de gadolinio (III) (Gd(NO3)3&middot; 6H2O)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>211591</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro de hierro (III) hexahidratado (FeCl3&middot; 6H2O)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>236489</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro de sodio (NaCl)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9888</td><td></td></tr><tr><td>Anti-NG2 Proteoglicano de sulfato de condroitina, anticuerpo conjugado de biotina</td><td>Millipore</td><td>AB5320</td><td></td></tr><tr><td>Biotinilado Anti-Eotaxina-3</td><td>humano Peprotech</td><td>500-P156GBT</td><td></td></tr><tr><td>Línea celular Neuro-2a</td><td>ATCC</td><td>CCL-131</td><td></td></tr><tr><td>Línea celular BSG D10 Stock</td> de <td>laboratorio</td><td>---</td><td></td></tr><tr><td>OE21 Línea celular</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>96062201</td><td></td></tr><tr><td>SUDIPG1 Neuroesferas Stock de</td><td>laboratorio</td><td>---</td><td></td></tr><tr><td>Eol-1 Línea celular</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>94042252</td><td></td></tr><tr><td>Hidrobromuro de poli(L-lisina)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1399</td><td></td></tr><tr><td>Formaldehído</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F8775</td><td></td></tr><tr><td>Albúmina sérica bovina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2153</td><td></td></tr><tr><td>Aminoactinomicina D</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9400</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X100</td><td></td></tr><tr><td>CellTrace Calceína Rojo-Naranja, AM</td><td>Life Technologies</td><td>C34851</td><td></td></tr><tr><td>Avidin-Alexa Fluor 488</td><td>Life Technologies</td><td>A21370</td><td></td></tr><tr><td>centrífuga</td><td>Eppendorf</td><td>5424</td><td></td></tr><tr><td>Bomba peristáltica</td><td>Instech</td><td>P270</td><td></td></tr><tr><td>Zetasizer Nano ZS</td><td>Malvern</td><td>ZEN3600</td><td></td></tr><tr><td>Sonicator</td><td>QSonica</td><td>Q125</td><td></td></tr><tr><td>Placa calefactora/agitador magnético</td><td>VWR</td><td>97042-642</td><td></td></tr><tr><td>Ultra Clean Papel de aluminio</td><td>VWR</td><td>89107-732</td><td></td></tr><tr><td>Vortex Mezclador</td><td>VWR</td><td>58816-121</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de microcentrífuga cónicos de 1,7 ml</td><td>VWR</td><td>87003-295</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de centrífuga cónicos de 15 ml</td><td>VWR</td><td>21008-918</td><td></td>Soportes de</tr><tr><td>tubo</td><td>VWR</td><td>82024-342</td><td></td></tr><tr><td>Cubetas de plástico desechables</td><td>VWR</td><td>7000-590 (/586)</td><td></td></tr><tr><td>Celda capilar Zetasizer</td><td>VWR</td><td>DTS1070</td><td></td></tr><tr><td>Filtros centrífugos, columna de centrifugación de 0,2 micrómetros</td><td>VWR</td><td>82031-356</td><td></td></tr><tr><td>bandeja de cultivo celular de 96 pocillos</td><td>VWR</td><td>29442-056</td><td></td></tr><tr><td>Solución de tripsina EDTA al 0,25 % 1x</td><td>JR Scientific</td><td>82702</td><td></td></tr><tr><td>PBS de grado de cultivo celular (1x)</td><td>Life Technologies</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>XTT Kit de ensayo de proliferación celular</td><td>Trevigen</td><td>4891-025-K</td><td></td></tr><tr><td>Frasco T75</td><td>89092-700</td><td>VWR</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle's Medium</td><td>Biowhitaker</td><td>12-604Q</td><td></td></tr><tr><td>Suero fetal bovino</td><td>Life Technologies</td><td>10437-010</td><td></td></tr><tr><td>Pen-Strep 1x</td><td>Life Technologies</td><td>15070063</td><td></td></tr><tr><td>Fluoview FV1200 Microscopio de barrido láser confocal</td><td>Olympus</td><td>FV1200</td><td></td></tr><tr><td>portaobjetos de microscopio con cámara</td><td>Thermo Scientific</td><td>154534</td><td></td></tr><tr><td>Micro cubreobjetos, cuadrados, n.º 1,5</td><td>VWR</td><td>48366-227</td><td></td></tr><tr><td>portaobjetos de microscopio</td><td>VWR</td><td>16004-368</td><td></td></tr><tr><td>RPMI</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R8758&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Agarosa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9539&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>FACSCalibur Citómetro de flujo</td><td>BD Biosciences</td> 3 T Imán de <td></td><td></td></tr><tr><td>resonancia magnética clínica</td><td>GE Healthcare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Matraz</td><td></td><td></td><td></td> de fondo redondo de 100 ml</tr></tbody></table>

biofuncionalizadas prusiana nanopartículas azul para multimodal molecular aplicaciones de imágenes

Biofunctionalized Prussian Blue Nanoparticles for Multimodal Molecular Imaging Applications

Multimodal, la imagen molecular permite la visualización de los procesos biológicos a resoluciones celulares, subcelulares, ya nivel molecular utilizando múltiples técnicas de imagen complementarias. Estos agentes de formación de imágenes facilitan la evaluación en tiempo real de las vías y mecanismos in vivo, que mejoran tanto la eficacia diagnóstica y terapéutica. En este artículo se presenta el protocolo para la síntesis de nanopartículas azul de Prusia biofuncionalizadas (PB PN) - una nueva clase de agentes para su uso en aplicaciones de imágenes multimodales, molecular. Las técnicas de imagen incorporados en el nanopartículas, imágenes de fluorescencia y la resonancia magnética (MRI), tienen características complementarias. Los PN PB poseen un diseño de núcleo-corteza donde gadolinio y iones de manganeso incorporados dentro de los espacios intersticiales de la red PB generan contraste MRI, tanto en T1 y T2 y secuencias. Los PN PB están recubiertas con avidina fluorescente usando electrostática auto comoblea, que permite imágenes de fluorescencia. Las nanopartículas recubiertas con avidina se modifican con ligandos biotinilados que confieren posibilidades de marketing moleculares a las nanopartículas. La estabilidad y la toxicidad de las nanopartículas se miden, así como sus capacidades de relajación de MRI. Las capacidades de imágenes multimodales, moleculares de estas biofuncionalizadas PN PB luego se demostraron utilizándolos para imágenes de fluorescencia y resonancia magnética molecular in vitro.

Usando el esquema de síntesis en un solo recipiente, las nanopartículas de Pb NPs (diámetro medio de 78,8 nm, índice de polidispersidad (PDI) = 0,230; calculada por el instrumento de dispersión de luz dinámica), GdPB, o MnPB (diámetro de 164,2 nm, PDI = 0,102 significa) ( diámetro medio 122,4 nm, PDI = 0,124) que son monodispersas (medido por DLS) se puede sintetizar constantemente (Figura 2A). Los potenciales zeta medidos de las nanopartículas sintetizadas están a menos de -30 mV (Figura 2B),</...

Este protocolo describe la síntesis de nanopartículas biofuncionalizadas de azul de Prusia y su uso como agentes de imagen molecular multimodales. Las nanopartículas tienen un diseño de núcleo-carcasa en el que los iones de gadolinio o manganeso dentro del núcleo de la nanopartícula generan contraste de resonancia magnética. La cubierta biofuncional contiene fluoróforos para la obtención de imágenes de fluorescencia y ligandos dirigidos para la orientación molecular.

Biofuncionalizadas prusiana nanopartículas azul para Multimodal Molecular Aplicaciones de imágenes

Multimodal, molecular imaging allows the visualization of biological processes at cellular, subcellular, and molecular-level resolutions using multiple, ...

El objetivo general de este procedimiento es sintetizar nanopartículas de azul de Prusia biofuncionalizadas para su uso como agentes de imagen molecular multimodal. Esto se logra primero sintetizando nanopartículas de azul de Prusia que contienen iones de gadolinio o manganeso, los cuales mejoran la señal de resonancia magnética. El segundo paso consiste en unir fluorocromo avadón a la superficie de las nanopartículas, lo que les confiere capacidad de imagen mediante fluorescencia.A continuación, las nanopartículas recubiertas con avadón se biofuncionalizan con los anticuerpos biotinilados deseados para el direccionamiento celular. Un paso final consiste en realizar un control de calidad de las nanopartículas biofuncionalizadas midiendo su tamaño, potencial zeta y estabilidad temporal. En última instancia, las nanopartículas biofuncionalizadas se utilizan en aplicaciones de imagen molecular multimodal para visualizar una población específica de células diana dentro de una mezcla mediante imágenes de fluorescencia y resonancia magnética (MRI).Los agentes de imagen comerciales actuales son típicamente unimodales y ofrecen resolución únicamente a nivel anatómico. Las nanopartículas de azul de Prusia combinan dos modos de imagen complementarios, resonancia magnética (RM) y fluorescencia, y permiten la obtención de imágenes moleculares y a niveles subcelulares. Las aplicaciones de las nanopartículas multimodales se extienden hacia el diagnóstico de cáncer y enfermedades inflamatorias, además del monitoreo de la respuesta a su tratamiento.Esto se debe a que las nanopartículas biofuncionalizadas pueden dirigirse y unirse a una población de células dentro de una región específica del cuerpo. Aunque este método puede proporcionar información sobre el diagnóstico de cáncer y enfermedades inflamatorias, así como sobre la respuesta al tratamiento, también puede aplicarse a otras condiciones patológicas que se beneficien de la sensibilidad y especificidad de la imagen molecular. Mediante el uso de fluorescencia y resonancia magnética, tuvimos inicialmente la idea de producir estas nanopartículas cuando determinamos que el azul de Prusia, un agente aprobado por la FDA para consumo oral humano, podía sintetizarse establemente mediante un esquema de síntesis en una sola etapa y biofuncionalizarse de forma robusta utilizando técnicas estándar de bioconjugación.Para comenzar, prepare una solución molar de 5 millones de hexacianoferriato dos de potasio en cinco mililitros de agua desionizada para obtener la solución A. A continuación, prepare la solución B que contiene 2,5 milimolar de cloruro de hierro tres y 2,5 milimolar de manganeso dos cloruro en 10 mililitros de agua desionizada para la síntesis de nanopartículas de azul prusiano de manganeso. Otras nanopartículas pueden sintetizarse según se indica en el protocolo del texto. Transfiera la solución B a un matraz de fondo redondo y agite la solución a 1000 RPM a temperatura ambiente.Mediante una bomba peristáltica, agregue la solución A gota a gota al recipiente a una velocidad de 10 mililitros por hora. Una vez completada la adición de la solución A, agite la mezcla a 1000 rpm durante 30 minutos adicionales. Luego, transfiera alícuotas de un mililitro de la mezcla a tubos de microcentrífuga y agregue 0,2 mililitros de cloruro de sodio cinco milimolar a cada tubo.Centrifugue los tubos a 20.000 × g durante al menos 10 minutos y luego retire cuidadosamente el sobrenadante, dejando el sedimento de nanopartículas. A continuación, agregue un mililitro de agua desionizada a cada sedimento. Utilice una punta micrométrica para suspender uniformemente las nanopartículas en solución mediante sonicación.Lave las nanopartículas al menos tres veces más para eliminar los componentes de la reacción inicial del sobrenadante tras la última centrifugación; re suspenda las nanopartículas en un mililitro de agua desionizada tras recubrir las nanopartículas con den fluorescente como se describe en el protocolo del texto; retire los anticuerpos biotinilados del refrigerador. Aquí, utilice el antígeno neuronal glial dos y el anticuerpo anti-eotaxina humana tres. Transfiera el anticuerpo biotinilado a un filtro microc&uacute;fugo de nailon de 0,2 micrómetros y luego centrifugue el tubo a 14.000 ×g durante 10 minutos.A continuación, agregue menos de o igual a 0,05 miligramos del anticuerpo por miligramo de nanopartículas recubiertas con Aden y cubra los tubos con papel de aluminio para protegerlos de la luz. Incube los tubos con agitación suave durante dos a cuatro horas a cuatro grados Celsius. Después de unir los anticuerpos, agregue 10 microlitros de una muestra de nanopartículas de un miligramo por mililitro a 990 microlitros de agua desionizada en un vial plástico descartable, tape el vial y agítelo para mezclar.Luego, determine el tamaño promedio de las nanopartículas utilizando un sistema de dispersión dinámica de luz con un ángulo de medición de 173 grados. Comience preparando suspensiones de 10 mililitros de células en PBS a una concentración de aproximadamente 100 000 células por mililitro; para cultivos mixtos, deben prepararse tubos que contengan diferentes proporciones de cada línea celular según se describe en el protocolo del texto. Añada dos mililitros de BSA al 5 % a cada tubo para bloquear las células y minimizar la unión no específica. A continuación, agregue un mililitro de nanopartículas biofuncionalizadas a una concentración de un miligramo por mililitro a cada tubo e incube la mezcla durante una hora.A continuación, lave las células para eliminar los nanopartículas no ligadas, centrifugando los tubos a 1000 ×g durante cinco minutos y resuspendiendo los precipitados en un mililitro de PBS. Repita este proceso al menos otras dos veces. Fije las células utilizando formaldehído al 10 % en PBS y luego agregue 10 microgramos por mililitro de siete amino actin y micina D en PBS para teñir las células, incube el tubo en hielo durante 30 minutos y luego lave las células con PBS.A continuación, cargue la muestra en el citómetro de flujo y analice 10.000 células seleccionadas de cada muestra. En el protocolo escrito se describe un procedimiento similar para obtener imágenes de células unidas a nanopartículas fluorescentes mediante microscopía confocal láser. Para comenzar, cultive las células en matraces T75 hasta alcanzar aproximadamente el 80 % de confluencia, y luego enjuague las células para eliminar el medio con cinco mililitros de PBS.Añada cinco mililitros de BSA al 1 % en PBS y bloquee las células durante una hora. Luego, añada cinco mililitros de nanopartículas recubiertas con anticuerpos a 0,5 miligramos por mililitro al matraz e incube las células durante una hora para permitir la unión de las nanopartículas. A continuación, enjuague las células tres veces con cinco mililitros de PBS para eliminar las nanopartículas no unidas.Luego, agregue dos mililitros de solución de tripsina-EDTA al 0,25 % y incube las células durante cinco minutos para desprenderlas del frasco. Añada ocho mililitros de DMEM para detener la tripsina y, a continuación, transfiera la suspensión celular a tubos de centrífuga. Centrifugue a 1000 ×g durante cinco minutos para formar el pellet celular.A continuación, aspire el sobrenadante y resuspenda las células en un mililitro de PBS. Añada un mililitro de formaldehído al 10 % en PBS para fijar las células y luego transfiera 100 microlitros de cada muestra a pozos separados de una placa de fondo plano de 96 pozos. Añada 100 microlitros de agarosa al 1 % fundida en agua desionizada a cada pozo y mezcle pipeteando hacia arriba y hacia abajo.Deje que el gel solidifique a cuatro grados Celsius durante 12 horas para obtener un fantasma. Una vez que el gel haya solidificado, coloque el fantasma junto a un bloque sólido cúbico de 150 centímetros de agar al 2% dentro de un imán clínico horizontal de tres T. A continuación, asegure el fantasma y el bloque de agar en el centro de una bobina cerebral HD de ocho canales para medir los tiempos de relajación, utilizando cortes coronales de 0,5 milímetros de espesor tomados a la altura media de la placa de 96 pocillos. Se utilizaron ensayos de dispersión dinámica de luz para determinar el diámetro hidrodinámico de las nanopartículas generadas. Estudios de estabilidad verificaron la estabilidad a largo plazo de las nanopartículas, que se utilizan tanto en experimentos basados en agua como en medios celulares.La microscopía confocal con láser mostró nanopartículas fluorescentes cargadas con anticuerpos para EOT tres que se unieron específicamente a la superficie de células EOL una. Cuando se utilizaron anticuerpos para un NG dos, estos se unieron específicamente a la superficie de neuroesferas BSG. Las nanopartículas biofuncionalizadas pudieron etiquetar con éxito mediante fluorescencia una población de células diana, según se midió por citometría de flujo.Además, las nanopartículas pudieron dirigirse a una subpoblación específica de células en una mezcla, incluso con relaciones bajas de células diana respecto a células de control. Finalmente, las nanopartículas biofuncionalizadas incrementaron el contraste en resonancia magnética de las células diana, células tratadas con nanopartículas cargadas con una nng. Dos anticuerpos mostraron hiperintensidad en las secuencias ponderadas en T uno en comparación con las células tratadas con partículas de control.En contraste, las dos nanopartículas A NNG produjeron una hipointensidad en las secuencias ponderadas en T2 en comparación con las partículas de control. Una vez maestros. La síntesis de nanopartículas de azul de presión biofuncionalizadas puede completarse en dos días si se realiza adecuadamente.De forma similar a este procedimiento, las nanopartículas pueden ser biofuncionalizadas con diferentes biopolímeros y ligandos de targeting para investigar nuevas enfermedades y nuevas condiciones. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo sintetizar nanopartículas de azul de Prusia para aplicaciones de fluorescencia y de imágenes destinadas a marcar poblaciones de células. No olvide seguir rigurosamente las directrices de seguridad y los procedimientos operativos estándar para realizar los estudios en el imán clínico de resonancia magnética.

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