שיטה להערכת יעילות הדברה נגד פשפש מיטה, Cimex lectularius, ביצים ראשית Instars

המטרה הכוללת של ניסוי זה היא להעריך את יעילותם של קוטלי חרקים בהרג ביצי פשפש המיטה והכוכבים הראשונים. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום האנטומולוגיה, כגון ההשפעות של בדיקות טוקסיקולוגיות על ביצי פשפש המיטה ונימפות קטנות. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מיועדת לטיפול בשלב חיי חרקים קשה עם קוטלי חרקים, במיוחד שלב הביצים.

כדי להתחיל בניסוי, הוציאו חמש עד 10 נקבות פשפשים בוגרות מוזנות היטב ממושבה והניחו את הנקבות בצלחת פטרי עם נייר פילטר. הכן 10 שכפולים כדי להבטיח שיהיו מספיק ביצים לבדיקת קוטלי החרקים. בדוק את הכלים כל יום כדי לראות אם הנקבות הטילו ביצים.

לאחר שהנקבות הטילו ביצים, הוציאו את הנקבות מצלחת הפטרי והכניסו אותן לצלחות פטרי חדשות עם נייר סינון חדש מדי יום. רשום את הנתונים על צלחות הפטרי הישנות והחדשות. הניחו לביצים להתיישן ארבעה עד חמישה ימים לפני תחילת הבדיקה.

לאחר שהביצים התיישנו כראוי, הסר את ביצי פשפש המיטה בעדינות מניירות הסינון באמצעות מלקחיים רכים. מגרדים בעדינות את תחתית הביצה המחוברת לנייר הסינון בעזרת המלקחיים ולאחר מכן תופסים בעדינות את הביצה מבלי להפעיל לחץ רב מדי כדי להימנע מזריקת ביצי פשפש המיטה. מניחים את ביצי פשפש המיטה שהוסרו בקבוצות שלהן בתוך צלחות הפטרי מפלסטיק.

שפשפו את החלק התחתון של כל צלחת פטרי מבחוץ עם יריעת מרכך כביסה כדי להגביל את החשמל הסטטי מהשלכת ביצי פשפש המיטה. לאחר מכן, הכינו דילולים סדרתיים של קוטלי חרקים כדי לקבל טווח של חמישה ריכוזים שונים ותמיסת בקרה עם מי ברז בלבד כל אחד לנפח של 20 מ"ל. קח צינורות צנטריפוגה של 50 מ"ל חתוכים מראש בקו המ"ל ולאחר מכן חתוך רשת דקה לריבועים גדולים מספיק כדי להתאים למכסה.

הברג את הרשת בחוזקה ומבטל כל בליטה לתוך צינורות הצנטריפוגה באמצעות מכסה צינור הצנטריפוגה. לאחר מכן, בעזרת מברשת, הניחו קבוצה של ביצי פשפש המיטה על הרשת בתוך צינור צנטריפוגה. טובלים את קבוצת ביצי פשפש המיטה בתוך צינור הצנטריפוגה החתוך בריכוז קוטל חרקים למשך חמש שניות.

הסר את צינור הצנטריפוגה מתמיסת קוטל החרקים. הנח את צינור הצנטריפוגה ישירות על רקמת המעבדה כדי לייבש את הרשת עם הביצים בפנים. לאחר הייבוש, הוציאו את קבוצת הביצים מצינור הצנטריפוגה בעזרת מברשת צבע קטנה בעלת זיפים עדינים והניחו אותן בצלחת פטרי נקייה עם נייר סינון נקי.

רשום את תמותת הביצים במשך 14 יום כדי להבטיח שלכל הביצים היה מספיק זמן לבקוע. נכון לתמותה בטיפול הביקורת באמצעות הנוסחה של אבוט. הכנס תמותה מתועדת עם הריכוזים המתאימים לתוכנת הניתוח כדי לחשב ערכי LC50.

הפרד קבוצה של חמישה זכרים בוגרים וחמש נקבות פשפשים בוגרות שהואכלו ביום הקודם והכניס אותם לצלחת פטרי עם נייר פילטר. אפשרו לפשפשי המיטה הבוגרים להזדווג ולהטיל ביצים במשך שמונה ימים. לאחר מכן הסר את הבוגרים מצלחות הפטרי ואפשר לביצים לבקוע לכוכבים ראשונים בתוך צלחות הפטרי.

אספו את הכוכבים הראשונים שלא ניזונו מאותו גיל בעזרת מכחול, ואז הניחו אותם בצלחות פטרי נקיות חדשות עד לבדיקת קוטל החרקים. פיפט 150 מיקרוליטר של כל אחד מחמשת הדילולים המוכנים הקודמים של קוטלי חרקים ומים לקבוצת הביקורת על ניירות סינון בודדים. פזרו את קוטל החרקים באופן שווה על ידי מריחת טיפות סביב כל הקצה והמרכז של נייר המסנן.

הנח את ניירות הסינון המטופלים בנפרד על גבי לוחות לוח קשיח בודדים. שחררו קבוצות של כוכבי הבכורה על ניירות הסינון הבודדים בעודם רטובים בקוטל חרקים וכסו את הכוכבים הראשונים בתחתית צלחת פטרי הפוכה והניחו משקולת על גבי צלחת הפטרי כדי למנוע מפשפשי המיטה הראשונים לברוח. רשום את התמותה של פשפשי המיטה הראשונים לאחר 24 שעות של חשיפה לכל ריכוזי קוטלי החרקים.

נכון לתמותה בטיפול הביקורת באמצעות הנוסחה של אבוט. הכנס את התמותה והריכוזים המתועדים לתוכנת הניתוח כדי לחשב ערכי LC50. אחוז התגובה או התמותה של ביצי פשפש המיטה מזן הרלין לחמישה ריכוזים שונים של בטא-ציפלותרין מטוקלופריד גדל ככל שהמינון עלה.

התמותה הגיעה ל-100% בריכוז הגבוה ביותר שנבדק. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין טוב יותר כיצד להעריך את יעילות קוטלי החרקים כנגד ביצי פשפש המיטה והכוכבים הראשונים.