Name: Lesión de isquemia-reperfusión de órganos mediante la simulación de cambios hemodinámicos en el modelo de trasplante de hígado de rata (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-03-06T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 7 s
Description: Aprende a simular cambios hemodinámicos en un modelo de trasplante hepático en ratas para investigar la lesión por isquemia-reperfusión. Este método permite estudiar el impacto de la fase anhepática en órganos extrahepáticos.

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Nos gustaría reconocer las sugerencias útiles dadas por el Dr. Wen-tao Li y el Dr. Ji-hua Wu del Segundo Hospital Afiliado de la Universidad Médica de Guangxi. Los autores quieren agradecer a nuestros compañeros de equipo por comentarios y discusiones útiles. Los autores también quieren agradecer a los críticos anónimos y editores de JoVE por sus comentarios. Un agradecimiento especial debería ir a los padres del Dr. Yuan por su continuo apoyo y aliento. El trabajo fue apoyado por la Fundación de Ciencias Naturales de Ningbo (2014A610248).

El Comité de Ética Animal aprobó el experimento de la Universidad Médica guangxi (nº20190920). Todos los animales fueron suministrados por el Centro de Experimentación Animal de la Universidad Médica de Guangxi. Utilizamos ratas Sprague Dawley macho Sprague (200-250 g, 10-12 semanas), mantenidas bajo la temperatura ambiente de 25 ± 2°C y humedad de 50 ± 10%. La alimentación se detuvo 24 horas antes de la operación; sin embargo, se proporcionó agua.
NOTA: Un operador puede realizar todas las operaciones sin una base de microcirugía o microscopio quirúrgico.
1. Operación
<ol><li>Después de pesar, anestesiar a las ratas con isoflurano (5%) utilizando una máquina de anestesia animal.</li>
	<li>Después de 1-2 minutos, sujete suavemente los dedos de los dedos de los dedos de la rata con pinzas. Si la rata no responde después de pellizcar, ha entrado en un estado de anestesia. Utilice ungüento veterinario en los ojos para evitar la sequedad. Utilice lámparas de calefacción animal para mantener la temperatura corporal de las ratas a 37-38 °C.</li>
	<li>Después de la desinfección abdominal (solución de yodo povidone), fije la rata en la mesa de disección animal. Haga una incisión mediana de 3 cm por debajo del proceso xifoide utilizando fórceps y tijeras.</li>
	<li>Abra la cavidad abdominal, exponga el hígado con un retractor y movilice el ligamento hepatogástrico. Use hisopos de algodón para voltear suavemente el lóbulo medio del hígado y girarlo hacia arriba para exponer los hepatis porta. Identifique el CBD, pv y HA.</li>
	<li>Empuje el intestino delgado hacia la cavidad abdominal inferior izquierda usando hisopos de algodón, cúbralo con gasa húmeda y mueva el cava de vena intraháptica a la vena renal derecha.</li>
	<li>Aísle la vena del portal, la arteria hepática y el cava de vena inferior por encima de la vena renal derecha con una lente intraocular y fórceps marcados con hilo de seda 3-0, cada uno con un nudo deslizante.</li>
	<li>Abra la piel de las extremidades inferiores izquierda y derecha y exponga la vena femoral con fórceps oftálmicos. Inyectar lentamente heparina de bajo peso molecular 625 UI/kg a través de la vena femoral para heparinizar todo el cuerpo.</li>
	<li>Ligar la vena del portal, la arteria hepática y el cava de vena inferior por encima de la vena renal derecha con suturas no. 3-0, con una duración de 45 minutos(Figura 1). Reemplace el intestino delgado en la cavidad abdominal y cúbralo con gasa. Reduzca la anestesia por inhalación durante estos períodos.</li>
	<li>Después de 45 minutos, libere la vena del portal, la arteria hepática y el cava de vena inferior por encima de la vena renal derecha.</li>
	<li>Suturar el músculo y la piel, capa por capa, y terminar la anestesia inhalacional. Proporcionar analgesia postoperatoria utilizando morfina subcutánea de 5 mg/kg cada 4 horas.</li>
	<li>Observe a la rata hasta que esté despierta y alimente bajo una temperatura de 25 ± 2 °C y humedad de 50 ± 10%. Las lámparas de calefacción de animales son necesarias.</li>
</ol>

<ol><li>Dar, W. A., Sullivan, E., Byon, J. S., Eltzschig, H., Ju, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischaemia+reperfusion+injury+in+liver+transplantation%3A+Cellular+and+molecular+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+International%22%5BJournal%5D)">Ischaemia reperfusion injury in liver transplantation: Cellular and molecular mechanisms.</a> Liver International. 39 (5), 788-801 (2019).</li>
<li>Qiao, P. F., Yao, L., Zhang, X. C., Li, G. D., Wu, D. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heat+shock+pretreatment+improves+stem+cell+repair+following+ischemia-reperfusion+injury+via+autophagy%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Heat shock pretreatment improves stem cell repair following ischemia-reperfusion injury via autophagy.</a> World Journal of Gastroenterology. 21 (45), 12822-12834 (2015).</li>
<li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+YAP+attenuates+hepatic+damage+and+fibrosis+in+liver+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Activation of YAP attenuates hepatic damage and fibrosis in liver ischemia-reperfusion injury.</a> Journal of Hepatology. 71 (4), 719-730 (2019).</li>
<li>Hirao, H., Dery, K. J., Kageyama, S., Nakamura, K., Kupiec-Weglinski, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heme+Oxygenase-1+in+liver+transplant+ischemia-reperfusion+injury%3A+From+bench-to-bedside%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radical+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">Heme Oxygenase-1 in liver transplant ischemia-reperfusion injury: From bench-to-bedside.</a> Free Radical Biology and Medicine. 157, 75-82 (2020).</li>
<li>Motiño, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+role+of+hepatocyte+cyclooxygenase-2+expression+against+liver+ischemia-reperfusion+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Protective role of hepatocyte cyclooxygenase-2 expression against liver ischemia-reperfusion injury in mice.</a> Hepatology. 70 (2), 650-665 (2019).</li>
<li>Guo, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+search+for+a+magic+bullet+to+fight+multiple+organ+failure+secondary+to+ischemia%2Freperfusion+injury+and+abdominal+compartment+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">The search for a magic bullet to fight multiple organ failure secondary to ischemia/reperfusion injury and abdominal compartment syndrome.</a> Journal of Surgical Research. 184 (2), 792-793 (2013).</li>
<li>Elham, M., Mahmoudi, M., Nassiri-Toosi, M., Baghfalaki, T., Zeraati, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post+liver+transplantation+survival+and+related+prognostic+factors+among+adult+recipients+in+tehran+liver+transplant+center%3B+2002-2019%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Iranian+Medicine%22%5BJournal%5D)">Post liver transplantation survival and related prognostic factors among adult recipients in tehran liver transplant center; 2002-2019.</a> Archives of Iranian Medicine. 1 (23), 326-334 (2020).</li>
<li>Kim, E. H., Ko, J. S., Gwak, M. S., Lee, S. K., Kim, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+and+clinical+significance+of+hyperfibrinolysis+during+living+donor+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Coagulation+and+Fibrinolysis%22%5BJournal%5D)">Incidence and clinical significance of hyperfibrinolysis during living donor liver transplantation.</a> Blood Coagulation and Fibrinolysis. 29 (3), 322-326 (2018).</li>
<li>Czigány, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+research+practice+in+rat+orthotopic+and+partial+orthotopic+liver+transplantation%3A+a+review%2C+recommendation%2C+and+publication+guide%5BTitle%5D)+AND+%22European+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Improving research practice in rat orthotopic and partial orthotopic liver transplantation: a review, recommendation, and publication guide.</a> European Surgical Research. 55 (1-2), 119-138 (2015).</li>
<li>Kamada, N., Calne, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+liver+transplantation+in+the+rat.+Technique+using+cuff+for+portal+vein+anastomosis+and+biliary+drainage%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Orthotopic liver transplantation in the rat. Technique using cuff for portal vein anastomosis and biliary drainage.</a> Transplantation. 28 (1), 47-50 (1979).</li>
<li>Zimmermann, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+for+orthotopic+liver+transplantation+in+the+rat+and+some+studies+of+the+immunologic+responses+to+fully+allogeneic+liver+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation+Proceedings%22%5BJournal%5D)">Techniques for orthotopic liver transplantation in the rat and some studies of the immunologic responses to fully allogeneic liver grafts.</a> Transplantation Proceedings. 11 (1), 571-577 (1979).</li>
<li>Miyata, M., Fischer, J. H., Fuhs, M., Isselhard, W., Kasai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+orthotopic+liver+transplantation+in+the+rat.+Cuff+technique+for+three+vascular+anastomoses%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">A simple method for orthotopic liver transplantation in the rat. Cuff technique for three vascular anastomoses.</a> Transplantation. 30 (5), 335-338 (1980).</li>
<li>Kamada, N. A., Calne, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+experience+with+five+hundred+thirty+liver+transplants+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Surgical experience with five hundred thirty liver transplants in the rat.</a> Surgery. 93 (1), 64-69 (1983).</li>
<li>Yang, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rat+model+of+orthotopic+liver+transplantation+using+a+novel+magnetic+anastomosis+technique+for+suprahepatic+vena+cava+reconstruction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A rat model of orthotopic liver transplantation using a novel magnetic anastomosis technique for suprahepatic vena cava reconstruction.</a> Journal of Visualized Experiments. 19 (133), e56933(2018).</li>
<li>Liu, L. X., He, C., Huang, T., Gu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+new+technique+for+reconstruction+of+hepatic+artery+during+liver+transplantation+in+sprague-dawley+rat%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Development of a new technique for reconstruction of hepatic artery during liver transplantation in sprague-dawley rat.</a> PLoS One. 10 (12), 0145662(2015).</li>
<li>Paller, M. S., Hoidal, J. R., Ferris, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxygen+free+radicals+in+ischemic+acute+renal+failure+In+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Oxygen free radicals in ischemic acute renal failure In the rat.</a> Journal of Clinical Investigation. 74 (4), 1156-1164 (1984).</li>
<li>Schmidt, J., Lewandrowsi, K., Warshaw, A. L., Compton, C. C., Rattner, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphometric+characteristics+and+homogeneity+of+a+new+model+of+acute+pancreatitis+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Pancreatology%22%5BJournal%5D)">Morphometric characteristics and homogeneity of a new model of acute pancreatitis in the rat.</a> International Journal of Pancreatology. 12 (1), 41-51 (1992).</li>
<li>Chui, C. J., McArdle, A. H., Brown, R., Scott, H. J., Gurd, F. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+mucosal+lesion+in+low-flow+states.+I.+A+morphological%2C+hemodynamic%2C+and+metabolic+reappraisal%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Intestinal mucosal lesion in low-flow states. I. A morphological, hemodynamic, and metabolic reappraisal.</a> Archives of Surgery. 101 (4), 478-483 (1970).</li>
<li>Kozian, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((One-lung+ventilation+induces+hyperfusion+and+alveolar+damage+in+the+ventilated+lung%3Aan+experimental+study%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Anaesthesia%22%5BJournal%5D)">One-lung ventilation induces hyperfusion and alveolar damage in the ventilated lung:an experimental study.</a> British Journal of Anaesthesia. 100 (4), 549-559 (2008).</li>
<li>Shimada, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heavy+water+%28D2O%29+containing+preservation+solution+reduces+hepatic+cold+preservation+and+reperfusion+injury+in+an+isolated+perfused+rat+liver+%28IPRL%29+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Medicine%22%5BJournal%5D)">Heavy water (D2O) containing preservation solution reduces hepatic cold preservation and reperfusion injury in an isolated perfused rat liver (IPRL) model.</a> Journal of Clinical Medicine. 8 (11), 1818(2019).</li>
<li>Nakamura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sirtuin+1+attenuates+inflammation+and+hepatocellular+damage+in+liver+transplant+ischemia%2Freperfusion%3A+from+mouse+to+human%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Sirtuin 1 attenuates inflammation and hepatocellular damage in liver transplant ischemia/reperfusion: from mouse to human.</a> Liver Transplantation. 23 (10), 1282-1293 (2017).</li>
<li>Blaire, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+Considerations+of+Hilar+Cholangiocarcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Surgical+Oncology+Clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">Surgical Considerations of Hilar Cholangiocarcinoma.</a> Surgical Oncology Clinics of North America. 28 (4), 601-617 (2019).</li>
</ol>

Los autores de este manuscrito no tienen conflictos de interés que revelar.

OLT en ratas es un modelo ideal para estudiar la preservación de órganos en trasplante de hígado, IRI, rechazo de trasplante, tolerancia inmune, patología de trasplante y farmacología, homotransplantación y xenotrasplantación. En la actualidad, es ampliamente utilizado en la investigación experimental del trasplante de hígado.
Durante los estudios piloto, primero administramos anestesia intraperitoneal de sodio pentobarbital y encontramos que esto condujo a una alta mortalidad postoperatoria y...

La lesión por isquemia y reperfusión (IRI) es una complicación común después del trasplante de hígado. Hepatic IRI es un proceso patológico que implica daño celular mediado por isquemia y deterioro anormal de la reperfusión hepática. El IRI hepático y la respuesta inmune innata local se pueden dividir en IRI caliente y frío, según las diferencias en el entorno clínico1. Hot IRI es inducido por lesión de células madre, generalmente como resultado de trasplante de hígado, shock, y trauma2. Cold IRI es una complicación del trasplante hepático causado por células endoteliales y circulación periférica3. Los informes clínicos han demostrado que la IRI hepática está asociada con el 10% de las fallas tempranas de órganos y puede aumentar la incidencia de rechazo agudo y crónico4,5. Además, la IRI hepática también puede inducir múltiples síndromes de disfunción orgánica o síndrome de respuesta inflamatoria sistémica, con alta mortalidad6. Los pacientes con afectación extrahéptica de órganos tienden a permanecer más tiempo en el hospital, gastan más dinero y tienen un peor pronóstico7. El desarrollo de complicaciones está estrechamente relacionado con la duración de la fase anháptica del trasplante hepático8.
El trasplante ortotópico de hígado (OLT) en ratas fue reportado por primera vez por el profesor estadounidense Lee en 1973. La operación experimental simuló los pasos del trasplante clínico de hígado y la anastomosis de los vasos sanguíneos y el conducto biliar común (CBD) utilizando el método de sutura. El procedimiento es difícil y requiere mucho tiempo con una baja tasa de éxito9. En 1979, Kamada et al. realizaron una mejora significativa de la OLT en ratas mediante el uso creativo del "método de dos puños" para la anastomosis de la vena del portal para controlar la fase anhepatica dentro de 26 minutos10. En el mismo año, Zimmermann propuso el "método único de stent biliar". Sobre la base del trabajo de Lee, Zimmermann utilizó tubos de polietileno para anastomosar directamente el CBD del donante y receptor, simplificó la reconstrucción del CBD y conservó la función del esfínter, y este método se convirtió en el estándar para la reconstrucción biliar de los modelos11de OLT. En 1980, Miyata et al. propusieron el «método de tres puños» en el que la vena portal (PV), el cava de vena supraháptica (SVC) y el cava vena intraháptico (CIV) eran anastomosados por el método del manguito. Sin embargo, existe el riesgo de distorsión de la cánula con este método, que puede conducir a la obstrucción del reflujo inferior de vena cava12. En 1983, se propuso el «método de dos puños» utilizando el método del manguito para la anastomosis de la PV y el CIV, pero adoptando el método de sutura para el SVC13. Este método fue adoptado por académicos a nivel mundial para establecer modelos OLT. Desde entonces, se han mejorado los pasos de anastomosis del manguito para acortar la fase anhepática y mejorar la tasa de supervivencia de las ratas14. Del mismo modo, métodos mejorados se utilizan en la práctica clínica para acortar la fase anhepática15. Sin embargo, la investigación básica sobre la IRI después del trasplante hepático ha demostrado que la tasa de supervivencia está inversamente relacionada con el grado de lesión en los órganos extrahápticos. Por lo tanto, se requiere más investigación, y se necesita un modelo animal simple y reproducible para simular IRI después del trasplante de hígado.
Basándonos en la definición de la fase anhepática, simulamos los cambios hemodinámicos en el trasplante de hígado que resultan en IRI de órganos extrahápticos en ratas. En este documento, proporcionamos una descripción detallada de cómo construir un modelo animal de la fase anhepatica (isquemia hepática) en ratas para facilitar la investigación básica en IRI después del trasplante hepático.

<table><tbody><tr><td>Solución de paraformaldehído al 4%</td><td>Shanghai Macklin Biochemical Co., Ltd</td><td>P804536</td><td></td></tr><tr><td>horno de secado de aire</td><td>Shanghai Binglin Electronic Technology Co., Ltd.</td><td>BPG</td><td></td></tr><tr><td>Alanina aminotransferasa (ALT)Kit</td><td>Elabscience Biotechnology Co., Ltd</td><td>E-BC-K235-S</td><td></td></tr><tr><td>amoníaco</td><td>Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd</td><td>10002118</td><td></td></tr><tr><td>kit de amilasa</td><td>Elabscience Biotechnology Co., Ltd</td><td>E-BC-K005-M</td><td></td></tr><tr><td>etanol anhidro</td><td>Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd</td><td>100092183</td><td></td></tr><tr><td>Animal máquina de anestesia</td><td>Shenzhen Ruiwode Life Technology Co. Ltd</td><td>R640</td><td></td></tr><tr><td>aspartato aminotransferasa (AST)kit</td><td>Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd.</td>Analizador bioquímico automático <td>S03040</td><td></td></tr><tr><td>.</td><td>SIEMENS AG FWB:SIE, NYSE:SI Co., Ltd.</td><td>2400</td><td></td></tr><tr><td>Biosystems (cuando sea necesario)</td><td>Chengdu Taimeng Electronics Co., Ltd.</td><td>Centrífuga BL-420F</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Baiyang Medical Instrument Co., Ltd.</td><td>BY-600A</td><td></td></tr><tr><td>cubreobjetos Jiangsu</td><td>Shitai Experimental Equipment Co. Ltd</td><td>10212432C</td><td></td></tr><tr><td>Kit de creatinina</td><td>Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd.</td><td>S03076</td><td></td></tr><tr><td>máquina de deshidratación</td><td>Hungría 3DHISTECH Co., Ltd</td><td>Donatello Serie 2</td><td></td></tr><tr><td>máquina de incrustación</td><td>Hubei Xiaogan Kuohai Medical Technology Co., Ltd.</td><td>Máquina congelada KH-BL1</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td><td>JB-L5</td><td></td></tr><tr><td>solución de colorante de hematoxilina-eosina</td><td>Wuhan Saiwell Biotechnology Co., Ltd</td><td>G1005</td><td></td></tr><tr><td>cera de parafina de alta eficiencia</td><td>Shanghai huayong cera de parafina co., Ltd</td><td>Q / YSQN40-91</td><td></td></tr><tr><td>ácido clorhídrico</td><td>Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd</td><td>10011018</td><td></td></tr><tr><td>pinzas para lentes intraoculares (LIO)</td><td>Guangzhou Guangmei Medical Equipment Co., Ltd.</td><td>JTZRN</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Shenzhen Ruiwode Life Technology Co. Ltd</td><td>&mdash;</td><td></td></tr><tr><td>micro tijeras (cuando necesario)</td><td>Fábrica de instrumentos quirúrgicos de Shanghái</td><td>WA1010</td><td></td></tr><tr><td>portaagujas</td><td>Fábrica de instrumentos quirúrgicos de Shanghái</td><td>J32010</td><td></td></tr><tr><td>goma neutra</td><td>Shanghái Huashen Healing Equipment Co., Ltd.</td><td>&mdash;</td><td></td></tr><tr><td>microscopio óptico normal</td><td>Nikon Instrument Shanghai Co., Ltd</td><td>Nikon Eclipse CI</td><td></td></tr><tr><td>pinzas oftálmicas</td><td>Fábrica de instrumentos quirúrgicos de Shanghái</td><td>J3CO30</td><td></td></tr><tr><td>pinzas oftálmicas</td> rectas <td>Fábrica de instrumentos quirúrgicos de Shanghái</td><td>JD1060</td><td></td></tr><tr><td>tijeras oftálmicas</td> de flexión <td>Fábrica de instrumentos quirúrgicos de Shanghái</td><td>J1E0</td><td></td></tr><tr><td>cortadora patológica</td><td>Shanghai Leica Instrument Co., Ltd</td><td>RM2016</td><td></td></tr><tr><td>pipetas</td><td>Dragon Laboratory Instruments Co., Ltd.</td><td></td><td></td>7010101008</tr><tr><td>retractores Beijing</td><td>Jinuotai Technology Development Co., Ltd.</td><td>Escáner JNT-KXQ</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Hungría 3DHISTECH Co., Ltd</td><td>Pannoramic 250</td><td></td></tr><tr><td>diapositiva</td><td>Wuhan Saiwell Biotechnology Co., Ltd</td><td>G6004</td><td></td></tr><tr><td>xileno</td><td>Sinopharm Reactivos químicos Co. Ltd</td><td>1330-20-7</td><td></td></tr></tbody></table>

lesión de isquemia-reperfusión de órganos mediante la simulación de cambios hemodinámicos en el modelo de trasplante de hígado de rata

Organ Ischemia-Reperfusion Injury by Simulating Hemodynamic Changes in Rat Liver Transplant Model

El trasplante ortotópico de hígado (OLT) en ratas es un modelo animal probado y probado utilizado para estudios preoperatorios, intraoperatorios y postoperatorios, incluyendo lesiones por isquemia-reperfusión (IRI) de órganos extrahepáticos. Este modelo requiere numerosos experimentos y dispositivos. La duración de la fase anhepática está estrechamente relacionada con el tiempo para desarrollar IRI después del trasplante. En este experimento, utilizamos cambios hemodinámicos para inducir daño extrahepático de órganos en ratas y determinamos el tiempo máximo de tolerancia. El tiempo hasta la lesión orgánica más grave varió para diferentes órganos. Este método se puede replicar fácilmente y también se puede utilizar para estudiar IRI de los órganos extrahápticos después del trasplante de hígado.

Tolerancia de las ratas a la isquemia hepática En este modelo animal, los sitios en los que los vasos sanguíneos fueron ligados durante el funcionamiento se muestran en la Figura 1. Las ratas se dividieron aleatoriamente en 5 grupos por isquemia durante 15 minutos (grupo I15), 30 minutos (grupo I30), 45 minutos (grupo I45), 60 minutos (I60) y grupo sham, con 10 ratas en cada grupo. La tasa de supervivencia de cada grupo se observó 14 días después de la operación. Todas la...

Este trabajo proporciona una descripción detallada de cómo construir un modelo animal de la fase anhepática (isquemia hepática) en ratas para facilitar la investigación básica sobre lesiones por isquemia-reperfusión después del trasplante de hígado.

Lesión de isquemia-reperfusión de órganos mediante la simulación de cambios hemodinámicos en el modelo de trasplante de hígado de rata

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats is a tried and proven animal model used for preoperative, intraoperative, and postoperative studies, ...

Lesión por isquemia-reperfusión de órganos mediante la simulación de cambios hemodinámicos en el modelo de trasplante de hígado de rata. La lesión por isquemia y reperfusión es una aplicación común después del trasplante de hígado. Los pacientes con afectación extrahéptica de órganos tienden a permanecer más tiempo en el hospital, gastan más y tienen un peor pronóstico.El desarrollo de la complicación está estrechamente relacionado con la duración de la fase anhepática del trasplante hepático. Sin embargo, la investigación básica sobre la lesión de isquemia-reperfusión después del trasplante de hígado ha demostrado que la tasa de supervivencia después del trasplante hepático está inversamente relacionada con el grado de lesión en los órganos extrahápticos. Basándonos en la definición de la fase anháptica, simulamos el cambio hemodinámico en el trasplante de hígado que resulta en lesiones por isquemia-reperfusión de órganos extrahápticos.De este trabajo es proporcionar una descripción detallada de cómo construir un modelo animal de la fase anháptica en ratas, investigación básica sobre la lesión de isquemia-reperfusión después del trasplante de hígado. Yuan Yuan es responsable de todas las operaciones de video animales. Dos fórceps oftálmicos, rectos y doblados, y lente interocular, fórceps IOL, tijeras oftálmicas, uno a dos retractores, hisopos de algodón, suturas quirúrgicas 3-0, gasa iodoforme, agujas de sutura, Biosistemas cuando sea necesario, y lente interocular, fórceps IOL se utiliza para separar los vasos sanguíneos debido a cabezas redondas.Máquina de anestesia animal, máquina de deshidratación, máquina de incrustación, cortadora patológica, máquina congelada, cortadora de tejidos, horno de secado de aire, microscopio óptico neural, escáner, enflurano para anestesia general, solución de 4% de paraformaldehído, etanol, xileno, cera de parafina de alta eficiencia, solución de tinte de hematoxilina-eosina, ácido clorhídrico, amoníaco, tobogán, vidrio de cubierta, goma neutra y reactivos moribundos, y materiales consumibles. Pipetas, centrífuga, analizador bioquímico automático, alanina amino transferasa, kit ALT, aspartato, aminotransasa, kit AST, kit de creatinina. Después de pesar, las ratas son anestesiadas con isoflurano por una máquina de anestesia animal.Después de la desinfección abdominal, haga una incisión mediana de tres centímetros por debajo del proceso xifoide usando fórceps y tijeras. Abra la cavidad abdominal, exponga el hígado usando un retractor y movilice el ligamento hepatogástrico. Use hisopos de algodón para voltear suavemente el lóbulo medio del hígado y girarlo hacia arriba para exponer el porta habitis.Identifique el conducto biliar, la vena del portal y la arteria hepática. Empuje el intestino delgado hacia la cavidad abdominal inferior izquierda usando intercambios de algodón y mueva el cava de vena inferior a la vena renal derecha, aísle la vena del portal, la arteria hepática y el cava vena inferior por encima de la vena renal derecha con una lente intraocular, IOL, fórceps marcados con hilo de seda 3-0 cada uno con un nudo deslizante. Abre la piel de la extremidad inferior izquierda y derecha y expone la vena femoral usando fórceps oftálmicos.Inyectar lentamente heparina de bajo peso molecular 625 UI/kg a través de la vena femoral para heparinizar todo el cuerpo. Ligar la vena del portal, la arteria hepática y el cava de vena inferior por encima de la vena renal derecha con suturas número 3-0, que duran 45 minutos. Reemplace el intestino delgado en la cavidad abdominal y cúbralo con gasa.La anestesia por inhalación se reduce durante estos períodos. Después de 45 minutos, libere la vena del portal, la arteria hepática y el cava de vena inferior por encima de la vena renal derecha. Suturar el músculo y la piel capa por capa y terminar la anestesia inhalacional.Proporcionar analgesia postoperatoria utilizando morfina subcutánea de 5 mg/kg cada cuatro horas Observe la rata hasta que esté despierta y manténgase alimentada bajo una temperatura de 25 más o menos dos grados centígrados y se necesita humedad de 50 más o menos 10% Lámparas de calentamiento animal. En este modelo animal, las ratas se dividieron aleatoriamente en cinco grupos según isquemia durante 15 minutos, yo 15 grupo, 30 minutos, yo 30 grupo, 45 minutos, yo 45 grupo, 60 minutos, I 60, y un grupo sham con 10 ratas en cada grupo. Su tasa de supervivencia de cada grupo se observó 14 días después de la operación.Todas las ratas sobrevivieron en los grupos I 15, I 30 y Sham. Ocho sobrevivieron durante 14 días en el grupo I 45 y sólo dos sobrevivieron en el grupo I 60. Los resultados sugirieron que las ratas podrían tolerar la fase anhepática durante 45 minutos como máximo.Durante el experimento, Biosystems se utilizó para registrar los cambios en la frecuencia cardíaca y la presión arterial, intubación arterial carótida interna derecha antes y después de la fase anhepática. Encontramos que la frecuencia cardíaca y la presión arterial media, MAP de ratas, cambiaron drásticamente después de la ligadura vascular. Después de la ligadura, la isquemia hepática, la congestión y el edema en los intestinos, las várices gástricas y la esplenomegalia eran evidentes.80 ratas se dividieron aleatoriamente en ocho grupos, incluyendo isquemia durante 45 minutos, T0, reperfusión durante seis horas, T6, 12 horas, T12, 24 horas, T24, 48 horas, T48, 72 horas, T72, siete días, T7, en 14 días, T14, respectivamente. Los tejidos renal, páncreas, intestino delgado, corazón y pulmón fueron tomados y manchados con HE después de que las ratas fueron sacrificadas. A excepción del corazón, las puntuaciones patológicas se dieron de acuerdo con las referencias, respectivamente.Los resultados mostraron que el tiempo de máxima lesión de los órganos extrahápticos varió. Pasaron de seis a 24 horas después de la operación para el páncreas y de 24 a 48 horas para los pulmones. El tracto intestinal y el riñón resultaron más gravemente heridos después de 45 minutos de isquemia.No hubo una anormalidad evidente de la mucosa intestinal 24 horas después de la operación y los riñones se recuperaron después de 48 horas. En cuanto al corazón, con el paso del tiempo después de la reperfusión, la narcosis de células miocárdicas locales, la fragmentación y disolución celular, la infiltración de células inflamatorias y la vasodilatación y congestión local se encontraron en el tejido entre 24 y 48 horas después de la operación. Se recogió el suero y los niveles de ALT, AST, creatinina y amilasa fueron detectados por un analizador bioquímico automático.Todos los indicadores alcanzaron un máximo de 24 a 48 horas, a diferencia de los cambios patológicos. Aunque los niveles eran básicamente normales 48 horas después de la operación, los daños patológicos continuaban. En resumen, el modelo en ratas es simple y fácil de usar sin microcirugía y proporciona base para la investigación fundamental de la lesión de isquemia-reperfusión de órganos extrahápticos después de la isquemia hepática.

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Se presenta una revisión fácil de establecer de la clásica banda de dos técnicas para el trasplante ortotópico de hígado en ratas.

Trasplante ortotópico de hígado en ratas

Trasplante ortotópico de hígado en ratas es un modelo experimental indispensable para la investigación biomédica. A continuación les presentamos nuestros procedimientos quirúrgicos de trasplante ortotópico de hígado de rata con la reconstrucción arterial hepática mediante un injerto parcial del 50%.

Procedimientos Quirúrgicos para un modelo de rata de trasplante hepático ortotópico parcial con reconstrucción arterial hepática

El corazón de rata aislado es un modelo duradero para la lesión por isquemia y reperfusión. Aquí, describimos el proceso de recolección del corazón latiendo de una rata a través de la canulación aórtica in situ, la perfusión de Langendorff del corazón, la lesión simulada por isquemia-reperfusión y la tinción del infarto para confirmar la extensión de la agresión isquémica.

Inducción y Evaluación de la isquemia-reperfusión en perfundidos Langendorff corazones de ratas

Un modelo de abrazadera hiliar hígado de rata única fue desarrollado para estudiar el impacto de moléculas farmacológicas en la mejora de la lesión por isquemia-reperfusión. Este modelo incluye la canulación directa del suministro de portal al segmento de hígado isquémico a través de una rama de la vena porta, lo que permite la entrega hepática directa.

Método de la entrega directa segmentaria intra-hepática utilizando un modelo de hígado de rata hiliar abrazadera

El objetivo de este estudio es modificar el modelo de trasplante de hígado ortotópico de rata para representar mejor el trasplante de hígado humano y mejorar la supervivencia del receptor. El método presentado restablece la entrada arterial hepática conectando la arteria hepática común del hígado del donante con la arteria hepática adecuada del hígado receptor.

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Un modelo de trasplante de pulmón de rata de lesión por isquemia/reperfusión caliente: optimizaciones para mejorar los resultados

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Lesión de isquemia-reperfusión de órganos mediante la simulación de cambios hemodinámicos en el modelo de trasplante de hígado de rata (Video) | JoVE Journal

Lesión de isquemia-reperfusión de órganos mediante la simulación de cambios hemodinámicos en el modelo de trasplante de hígado de rata

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