Protocolo para el desarrollo de un modelo de osteotomía de fémur en ratas albinas Wistar

Este modelo de osteotomía de fémur puede ayudar a los investigadores a estudiar el proceso de curación de fracturas y evaluar cómo un medicamento podría influir en la curación de fracturas. Es un modelo de roedor simple y fácil de seguir que puede ayudar a los investigadores a identificar si un medicamento tiene propiedades curativas óseas y comprender su mecanismo de acción. Aunque se centra principalmente en observar y analizar la curación de fracturas, también puede dar información sobre la patogénesis de la enfermedad.

Este método puede guiar futuras investigaciones sobre la curación ósea en la salud y la enfermedad. Se puede utilizar para evaluar el efecto de posibles fármacos osteoanabólicos. Inducir una línea de fractura adecuada y la fijación de fracturas con un cable K son un desafío.

Un par de sesiones de práctica deberían ayudar. La simplicidad y reproducibilidad de este método son evidentes en su demostración visual Pawan Pagaku, un residente junior de mi laboratorio, ayudará a demostrar el procedimiento. Para comenzar, coloque el bloque de cera que contiene cera hasta una profundidad de 2,5 centímetros en la mesa de operaciones y cúbralo con cortinas estériles.

Después de hacer una incisión vertical de un centímetro en la piel en el lado lateral del muslo derecho, exponga el músculo vasto lateral separando la fascia profunda con tijeras Metzenbaum. Divida el vasto lateral en línea con las fibras musculares hasta que se alcance el eje del fémur. Luego, use el elevador perióstico para liberar el hueso de los músculos unidos a él.

Después de inyectar anestesia local en y alrededor del periostio, cree una hendidura en el tercio medio del eje del fémur con la cuchilla quirúrgica número 15. Coloque un cincel en la hendidura y golpee suavemente el cincel con un martillo para fracturar completamente el hueso en el tercio medio del eje. Fije internamente la fractura utilizando un cable K estéril de un milímetro sostenido con la ayuda de un taladro eléctrico que funciona con baterías.

Pase el cable K en el canal medular del fragmento distal a través del sitio de la fractura. Luego, perfore el cable K a través del extremo distal del fémur. Después de reducir la fractura, avance el cable K desde el extremo distal hacia el canal del fragmento proximal hasta que obtenga la compra en la región trocantérea.

Corte la parte distal del alambre K que sobresale a través de la piel con un cortador de alambre. Doble la punta del cable K a unos 90 grados con alicates y use un vendaje de gasa empapado en Betadine para el apósito del sitio del pin. El cable K actúa como una férula intramedular para mantener la fractura en una posición reducida.

Aplique presión sobre el área de sangrado con gasa estéril o fórceps arteriales para detener cualquier sangrado. Asegurar la hemostasia completa antes de cerrar la piel con una sutura de nylon 4-0. Limpie la herida con Betadine y cúbrala con gasa estéril y cinta adhesiva de microporos.

Para el cuidado postoperatorio, devuelva a las ratas a sus jaulas y continúe administrando una dieta semisintética estándar, así como antibióticos y analgésicos por vía intraperitoneal durante cinco días después del procedimiento. Finalmente, evalúe la curación ósea mediante radiografía del sitio fracturado una vez a la semana. Aquí se muestran radiografías del fémur de la rata con el K-wire NC2 antes de inducir la fractura, y un día después de la cirugía.

La cicatrización de la fractura se controla radiológicamente tomando radiografías semanales secuenciales del sitio operado para evaluar la formación del callo. La fractura permanece reducida e inmovilizada con el cable K intramedular. Después del sacrificio en un punto de tiempo predeterminado, el fémur se conservó cuidadosamente en formalina, seguido de descalcificación ósea.

El hueso con callo se obtuvo después de una descalcificación óptima. El callo intacto y la sección sagital del callo se muestran aquí. El callo se evalúa intermitentemente para asegurar una descalcificación óptima antes de evaluarla utilizando otras técnicas.

Aquí se muestran imágenes de bajo aumento y gran aumento de la sección teñida de hematoxilina y eosina del sitio de la fractura. Las secciones teñidas del sitio de la fractura muestran un callo duro con la formación de cartílago y hueso nuevo. El extremo fracturado del hueso y la segunda región cortical se pueden ver aquí.

El periostio es la parte más sensible al dolor de la herida, y es esencial infiltrar el periostio en el sitio de la fractura con un anestésico local antes de la osteotomía. Puede ser seguido por el análisis inmunohistoquímico y radiológico del callo, micro-CT para histomorfometría cuantitativa, analizando la resistencia biomecánica del callo analizar el suero. Esta técnica es útil para determinar el potencial osteogénico, el mecanismo de acción y el análisis comparativo de fármacos osteoanabólicos prometedores.