Fabrication de micro-tissus en utilisant des modules de gel de collagène cellules contenant

Summary

Création de micro-tissus en utilisant des gels de collagène cylindriques, appelés modules, qui contiennent des cellules embarqués et dont la surface est recouverte de cellules endothéliales.

Abstract

Ce protocole décrit la fabrication d'un type de micro-tissus appelés modules. L'approche module génère uniforme, les tissus extensibles et vascularisé. Les modules peuvent être faites de collagène ainsi que d'autres matériaux gélifiable ou réticulables. Ils sont environ 2 mm de longueur et 0,7 mm de diamètre à la fabrication, mais diminuer en taille avec des cellules ou lorsque les modules sont recouverts avec des cellules endothéliales. Les modules individuellement sont suffisamment petits pour que les cellules sont intégrées dans la limite de diffusion de l'oxygène et autres nutriments, mais les modules peuvent être emballés ensemble pour former de grands tissus qui sont perfusable. Ces tissus sont de conception modulaire, car différents types de cellules peuvent être intégrés dans ou enduit sur les modules avant qu'ils ne soient emballés ensemble pour former des tissus complexes. Il ya trois étapes principales pour rendre les modules: (1) la neutralisation du collagène et d'incorporation des cellules en elle, (2) gélification du collagène dans le tube et couper les modules et (3) revêtement des modules avec des cellules endothéliales.

Protocol

1) Préparation des tubes

1. Couper 2 à 3 m de longueur de tuyaux en polyéthylène (0,76 mm ID x 1,22 mm de diamètre extérieur).
2. Enfilez une aiguille 20 G1 à une extrémité du tube.
3. Enrouler le tube et le placer dans une auto-joint convertisseurs poche (7 1 / 2 "x 13"). Les deux extrémités de la tubulure doit être placé à la fin descellé du sac et scellés en place avec du ruban stérilisation au gaz.
4. Sceller le sac et le gaz stériliser.

2) Neutralisation de collagène

Note: 1 ml de collagène remplit environ 2 m de tuyaux en polyéthylène.

1. Placer la quantité néce....

Discussion

Nous avons fabriqué plusieurs tissus différents de micro-utilisant les modules intégrés aux différents types de cellules ^1-11. Nous avons réussi à intégré les cardiomyocytes primaires, les îlots, les cellules souches adipeuses et les cellules stromales mésenchymateuses ainsi que plusieurs lignées cellulaires, y compris HepG2, NIH 3T3 et clone 9 cellules du foie. Nous avons recouvert les modules avec plusieurs types de cellules endothéliales aortiques de rat dont les cellules endothéliales, les cellules humain.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Tubulure intramédicale PE60	BD Biosciences	427416	Différents diamètres de tubulure peuvent être utilisés pour modifier le diamètre des modules
Solution saline tamponnée au phosphate (PBS)	GIBCO, par Life Technologies	20012-027
Trypsine-EDTA	GIBCO, par Life Technologies	25200-072
Collagène acidifié Purcol, 3 mg/mL	Cedarlane Labs	5005-B
Bicarbonate	de sodium Sigma-Aldrich	S5761
Aiguille 20G	BD Biosciences	305175	Le diamètre de l’aiguille doit être similaire au diamètre de la tubulure
Seringue de 3 mL	BD Biosciences	309585
tube de 15 mL	BD Biosciences	352096
tube de 50 mL	BD Biosciences	352070
Convertisseurs Pochette auto-scellée 7 1/2” ; x 13” ;	Cardinal Health	92713
Pipette sérologique à pointe large 10 ml	BD Biosciences	357504
10 ml Pipette sérologique	BD Biosciences	357551
5 ml Pipette sérologique	BD Biosciences	357543