Summary
Anvendelsen af matrix-assisteret laser desorption / ionisering tid søgning (MALDI-TOF) massespektrometri (MS) direkte til blod dyrkningssuppe fremskynder identifikation af bakterier. I denne procedure er en hurtig og pålidelig metode til identifikation af Gram-negative bakterier direkte fra blod dyrkningsvæsken.
Abstract
En vigtig rolle i det kliniske mikrobiologiske laboratorium er at give hurtig identifikation af bakterier, der forårsager infektion i blodet. Traditionel identifikation kræver en sub-kultur signalerede blod kultur bouillon med identifikation kun tilgængelig efter kolonier på fast agar har modnet. MALDI-TOF MS er en pålidelig, hurtig metode til identifikation af de fleste klinisk relevante bakterier, når de anvendes til kolonier på faste medier. Anvendelsen af MALDI-TOF MS direkte til blod dyrkningsvæsken er en attraktiv tilgang, da det har potentiale til at fremskynde artsbestemmelse af bakterier og forbedre det kliniske forvaltning. Men et vigtigt problem at overvinde er foranalysen fjernelse af interfererende harpiks, proteiner og hæmoglobin, der er indeholdt i blodet kultur prøver, der, hvis de ikke fjernes, interfererer med MS spektre og kan resultere i utilstrækkelige eller lave forskelsbehandling identifikation scoringer. Desuden er det nødvendigt at koncentrere bacterbl.a. at udvikle spektre af tilstrækkelig kvalitet. Den præsenterede metode beskriver koncentrationen, rensning og udvinding af Gram-negative bakterier giver mulighed for tidlig identifikation af bakterier fra en signaleret blod kultur bouillon.
Introduction
Patienter med infektion i blodet (BSI) på grund af bakterier har fortsat høj på hospitalet dødelighed, der spænder fra 6 til 48% 1. Leveringen af passende empirisk antibiotika fremmer overlevelse og i undergruppen af patienter med svær sepsis, hver time forsinkelse på passende behandling korrelerer til nedsat overlevelse 2,3. Derfor et centralt mål for det kliniske laboratorium er hurtigt at opdage, identificere og kommunikere tilstedeværelsen af bakterier i blod kulturer til at informere de kliniske beslutninger. Det er blevet påvist, at den mikrobiologiske laboratorium har den største indflydelse på antimikrobiel behandling på tidspunktet for indberetning af Gram-farvning 4 og for nylig, viste et observationsstudie, at matrix-assisteret laser desorption / ionisering tid søgning massespektrometri (MALDI-TOF MS) udføres direkte på blod kulturnæringssupper indflydelse ordination på over en tredjedel af BSI forårsaget af Gram-negative bakterier 5.
6,7. Teknologien er nu veletableret og er blevet integreret i mange laboratorier til hurtig og præcis identifikation af mikroorganismer isoleret på faste medier 6,8. Den direkte anvendelse af MALDI-TOF MS blod kultur (BC) bouillon, der har signaleret "positive" for mikroorganismer appellerer til både klinikere og laboranter ledere på grund af muligheden for at få en tidligere identifikation af mikroorganismer til en lav pris.
Den kliniske anvendelighed af direkte anvendelse af MALDI-TOF MS blod kultur bouillon har været begrænset af den brede vifte af følsomheder observeret sammenlignet med standard fænotypisk kultur baserede metoder til identifikation, med rapporter om vellykkede identifikation af Gram-negative bakterier, der spænder fra 47 til 98,9 % 9-11. Variationen i følsomhed sandsynligvisangår BC bouillon sammensætning, initial bakteriel koncentration, variation i prøveforberedelsesmetoder samt vifte af gram-negative organismer forekommer i undersøgelsesbefolkningsgrupper 9. Sammenlignet med disse andre publicerede protokoller metoden præsenteret her undgår brugen af ethanol, ammoniumchlorid eller yderligere (ikke-matrix) acetonitril. Som et resultat bakteriepelleten vil forblive levedygtig (indtil det punkt, af protein ekstraktion) giver mulighed for potentielle fænotypisk følsomhed prøvningsmetoder, der skal anvendes direkte på disse organismer i bouillon. Derudover har den præsenterede metode vist sig at være billig, pålidelig og hurtig med bakteriel identifikation rådighed inden 25 min af blod kultur Gram farve resultater de, med minimal 'hands on' tid 12.
Denne metode er en simpel in-house spin-lysis protokol anvender myresyre ekstraktion anvendes direkte til positive blod kulturnæringssupper at identificere gramnegative bacteria med MALDI-TOF MS-teknologi.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1.. Blood kulturnæringssupper Flag som "positiv"
- Fjern det signalerede blod kultur flaske fra den løbende overvågning inkubation kabinet og læg det i et biologisk sikkerhedsskab. Bemærk: Flasker kan indeholde farlige mikroorganismer og universelle forholdsregler skal følges. På grund af risikoen for infektiøse aerosoler i prøvetagning, skal alle prøveudtagningsprocedurer udføres i en laminar strømning biosikkerhed klasse II kabinet.
2.. Gram Stain er parat
- Forbered en gramfarvning fra den signalerede blod dyrkningsbouillonen pr lokale institutionelle protokoller. Bemærk: Når identificeres Gram negative organismer mikroskopi blod kultur bouillon behandles som pr følgende metode. Da Gram-positive organismer er identificeret, er en alternativ molekylær metode målrettet genetisk identifikation og resistensmarkører påføres bouillon (ikke behandlet i denne artikel) 13..
- Bland forsigtigt blodet kultur flasken ved at vende 2-3x.
- Inden for biosikkerhed kabinet vedhæfte en 10 ml sprøjte til en overførsel sikkerhed blod enhed.
- Fastgør blodoverførsel enheden til blodkultur flasken og trække 5 ml bouillon i sprøjten. Overfør aspirerede BC bouillon i et serum adskille rør.
4.. Koncentration af Blood dyrkningsbouillon
- Centrifugér serum adskille røret ved 1.250 xg i 15 minutter, som fjerner et stort volumen af røde blodlegemer.
- Aspirer og kassér supernatanten ved hjælp af en steril overførselspipetten være omhyggelig med at forlade ca 1 ml fibrinlaget umiddelbart over gel / væske interface. Bemærk: De aerobe flasker viser en klar adskillelse af røde blodlegemer til bunden af røret med gel / væske-grænseflade vises en uigennemsigtig hvid farve. I modsætning hertil, nårpåføres den lytiske anaerob blod dyrkningsvæsken gelen / fluidgrænseflade vises som en dyb rød farve på grund af de lyserede røde blodlegemer komponenter forbliver suspenderet i supernatanten.
5.. Gentag Centrifugeringsbetingelserne vasketrinnene
- Bland forsigtigt de sidste 1 ml buffy coat væske over gelen interface med en steril pipette og derefter overføre hele mængden ind i et 1,5 ml mikrocentrifugerør. Centrifuger nyt rør ved 288 x g i 30 sek.
- Supernatanten overføres ved hjælp af en plastik engangs 1 ml overførselspipetten ind i en ny 1,5 ml mikrocentrifugerør og kassér røret med bundfaldet. Bemærk: Det er afgørende i dette trin, der er opmærksom på at undgå overførsel af pillen. Dette er især vigtigt for en prøve, der behandles ved anaerob BC flaske som supernatanten stadig pigmenteret og pelleten ikke altid ses tydeligt.
6.. Lyse af resterende celler
7.. Udvinding af bakterielle proteiner
- Aspirer og kassér supernatanten, igen ved hjælp af aspiration med en fin spids pipette sikre, at så meget væske som muligt fjernes.
- Pelleten resuspenderes i 10 pi myresyre (70% v / v). Bemærk: Myresyre kan påvirke kroppen, hvis den inhaleres eller hvis den kommer i kontakt med huden. Ved udarbejdelse eller manipulere løsninger, det er recommended at personalet bruger et stinkskab i tillæg til personlige værnemidler.
- Bland godt bruge pipetten for at sikre en homogen resuspenderet løsning. Brug af pipettespidsen fysisk forstyrre pelleten kan være nødvendig for at sikre en mere homogen opløsning.
8.. Udarbejdelse af MALDI-TOF Målplade
- Podes en ren MALDI-TOF måltavle med 2 pi af den forberedte suspension pr målet stedet. Forbered 3 målwebsteder for hver prøve for at overvinde den lejlighedsvise problem mislykkedes læser.
- Tillad MALDI-TOF-målplade til at tørre. Tørringshastigheden kan øges ved at placere pladen på kanten af stinkskabet for at maksimere luftstrømning hen over pladen.
- Overlay hver tørret stedet med 1 ml af matrix-opløsning (10 mg / ml α-cyano-4-hydroxykanelsyre (HCCA), 50% acetonitril, 2,5% trifluoreddikesyre). Bemærk: Matrix løsning kan påvirke kroppen, hvis den inhaleres eller hvis den kommer ind i contact med huden. Ved udarbejdelse eller manipulere løsninger anbefales det, at personalet bruger et stinkskab i tillæg til personlige værnemidler.
- Lad MALDI-TOF måltavle til tørre på kanten af stinkskab som beskrevet ovenfor. Sikre en homogen blanding fylder hver af de udvalgte pletter på pladen.
9.. Place MALDI-TOF måltavle i Mass Spectrometer
- Sæt MALDI-TOF-målplade i MALDI-TOF-massespektrometer. Sørg for, at pladen sidder flugter med fjederbelastede plader. Bemærk: Du må ikke indsætte målpladen indtil alle target pletter er tør.
- Sørg for, at gummipakningen er ren af fnug, støv og hår for at give kan skabes de nødvendige vakuum.
- Luk MALDI-TOF scene låg og tryk derefter på "ind / ud"-knappen på forsiden af instrumentet. Låget vil nu låse og give den nødvendige vakuum skal oprettes.
10.. MALDI-TOF MS Spectra Acquisition
- Åbn MALDI biotypning og FlexControl software.
- Inden for Typing softwaren vælge "ny klassifikation" fra rullemenuen titlen "fil". Navngiv projektet og derefter vælge "nye". Vælg "Næste" for at fuldføre opsætningen i Typing software.
- Inden styringssoftwaren vinduet identificere grafikken på skærmen af målet pladen. Fremhæv de MALDI-TOF target spots, der er i brug ved at bevæge musen hen over de podede pletter, mens du holder venstre museknap.
- Brug højre museknap til at klikke et vilkårligt sted på de udvalgte målpositioner og derefter vælge "add Analytter" fra rullemenuen.
- Tilføj kultur identifikationsoplysninger blod til kolonne for hver af de udvalgte spots "ID", og klik "Næste" når du er færdig.
- Vælg den kommercielle "taksonomi" spektre database og vælg "Næste". Bemærk: Laboratorier kan benytte yderligere in-house eller kommercielle databaser for at øge antallet af henvisningen spektre.
- Klik på "finish", og MALDI-TOF MS vil begynde at generere spektre. Bemærk: MALDI-TOF indstillinger var som pr fremstilling indstillinger (lineær positiv tilstand, 60 Hz laser frekvens, 20 kV acceleration spænding, 16,7 kV IS2 spænding, 170 nsek udvinding forsinkelse, og 2,000-20,137 m / z range).
- Hvis MALDI Kontrol software ikke frembringe toppe, kan manuel registrering af spektre udføres (fremgangsmåde ikke beskrevet).
11.. Indlæg Analyse Fortolkning af MALDI-TOF MS Scores
- Når spektre er erhvervet og analysen er færdig, skal du vælge knappen "+" ud for identifikation af arter på Typing software til at udvide listen for hvert mål identifikation.
- Undersøgelse top 5 identifikationer, at bemærke, hvis top 5 er ens. Uharmoniske top 5 slægter med scoringer ≥ 1,7 i samme målspot rejst muligheden for blandede bouillon. Bemærk: MALDI-TOF-teknologien har dårlig sensitivitet for detektion af blandede bouillon. For eksempel, når en bouillon indeholder blandet arter en høj tillid score kan identificeres for blot én af de blandede arter.
- Når en score ≥ 2,0 er kendt for den højeste kamp på et mål stedet, rapporterer arten.
- Når den højeste score på et mål plet ≥ 1,7, men <2,0, rapporterer kun slægter. Hvis yderligere kriterier i top 5 identifikationer er overensstemmende, derefter aflægge rapport til artsniveau.
12.. Fjernelse af MALDI-TOF Målplade
- Når alle spektre er fuldstændig trykke på "ind / ud"-knappen på MALDI-TOF-maskine.
- Åbn MALDI-TOF måltavle beholder og fjern MALDI-TOF måltavle.
- Hvis du bruger en genbrugelig MALDI-TOF måltavle, rene alle målgrupper pletter ved hjælp af alkohol og gemme MALDI-TOF plade ved RT, når det er rent og tørt.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Den genererede MALDI-TOF MS-spektre er i forhold til den integrerede referencedatabase af spektre. En logaritmisk score er tildelt for tilliden af kampen mellem testen isolat og referencedatabasen isolater med anbefaling af en score ≥ 1.7 kræves for sandsynlig identifikation til slægter niveau (figur 1) og ≥ 2,0 for sandsynlig identifikation arter (figur 2). Rapporter til artsniveau når scoren ≥ 1.7 og de første 5 identifikationer modsvares af Typing software er konsekvent (Figur 1) 12. Figur 3 viser resultatet, når en blod kultur bouillon af blandede arter analyseres, i dette tilfælde Escherichia coli og Serratia. marcescens. Bemærk top 5 matchede spektre er uharmonisk. Det er tidligere blevet påvist, at blandet slægter kun vil blive identificeret ved denne metode i cirka 30% af blandede bouillon 12. Det er vigtigt at være opmærksom på, at med en blandet bouillon er det muligt for en konsekvent rapport af en enkelt art med en høj tillid score. Tabel 1 opsummerer de tidligere offentliggjorte resultater fra kontrollen undersøgelse af denne metode, hvor 91,8% af monomicrobial bouillon opnået en MALDI-TOF-score på> 1,7, med 100% og 97,0% konkordans til slægt og art, henholdsvis 12.
Figur 1.. MALDI-TOF MS genererede spektre for Escherichia coli med en logaritmisk score på 1.861. Til højre er de første 5 kampe identificeret af Typing software. Bemærk, at arten konsekvent rapporteres som Escherichia coli. Med score på 1.861 og med de øverste 5 kampe er E. coli identifikation anses pålidelig arter level 12. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2.. MALDI-TOF MS genererede spektre for Pseudomonas aeruginosa med en logaritmisk score på 2.216. Til højre er de første 5 kampe identificeret af Typing software. Bemærk, at arten konsekvent rapporteres som Pseudomonas aeruginosa. Med den høje score på 2.216 identifikationen anses pålidelig arter niveau af identifikation. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3.. MALDI-TOF MS genererede spektre for en blandet blod kultur bouillon indeholdende Escherichia coli og Serratia marcescens. Til højre er de første 5 kampe identificeret af Typing software, som rapporterer både Escherichia coli og Serratia marcescens i de første 5 matchede spektre . Denne blandede slægter er kun identificeret i cirka en tredjedel af blandede bouillonkulturer 12. Forbedrede versioner af software i fremtiden kan forbedre påvisningen af blandede kulturer. Klik her for at se en større version af dette tal.
0 "/>
Tabel 1.. Verification data, der sammenligner MALDI-TOF MS udføres direkte på blod kultur bouillon med efterfølgende fænotypisk identifikation på subkultiveres kolonier. Concordant identifikation, der kræves en massespektrometri score på blod dyrkningssuppe ≥ 1.7. Denne tabel er tilpasset fra en tidligere publikation 12. Klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Det er vigtigt, når de anvender MALDI-TOF MS til bloddyrkning bouillon, at stillingen centrifugeringstrin udføres med tilstrækkelig omhu for ikke at remixe de adskilte komponenter. Det er særligt vigtigt at fjerne blod kultur bestanddele og humane cellulære proteiner, herunder hæmoglobin, som kan producere pigge interfererer med MALDI-TOF-spektre.
Selvom MS fremstiller anbefale skåret af score på ≥ 2,0 for arter og ≥ 1,7 for slægten identifikation, har andre rapporter foreslået lavere logaritmiske scoringer (spændvidde ≥ 1,4 til ≥ 1.6) kan gennemføres, når den anvendes til BC bouillon 10,12,14-18. Gennemførelsen af lavere MS identifikation scoringer i klinisk mikrobiologiske laboratorier bør kun overvejes efter passende lokale, lovgivningsmæssige og validering procedurer.
Lejlighedsvis fattige spektre er genereret af denne metode, som enten ikke er matchet eller indberettes med low tillid scoringer. Udførelse af to eller tre eksemplarer spots for hver isolat kan reducere besværet med at gentage eksperimentet, når en enkelt plet mislykkes. Sjældent vil alle dublerede pletter ikke score tilstrækkeligt til identifikation. Årsagen til den dårlige identifikation kan skyldes ufuldstændige database sæt, eller mere almindeligt, som et resultat af en lav koncentration start af bakterier i blodet dyrkningsvæsken. I en offentliggjort validering sæt til den præsenterede metode en score på <1,7 blev fundet i 8% af de kliniske isolater og havde en lille overvægt, når de udføres på anaerobe blod kultur flasker 12.
MALDI-TOF MS teknologi er i stand til at adskille alle klinisk stødt Gram-negative bakterier, selv når isoleret på faste medier. For eksempel E. coli vil ikke skelnes fra Shigella-arter og Salmonella slægter kan ikke artsbestemte. Som skitseret i resultaterne er det vigtigt at erkende, thpå, når du bruger MALDI-TOF direkte på blod dyrkningssuppe følsomhed til påvisning af blandede arter er lav 11,12,18,19.
Samlet denne fremgangsmåde giver en hurtig, billig og pålidelig fremgangsmåde til identifikation af over 90% af gramnegative blodkultur isolater inden for 25 min af en blod kulturvæske signalering.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne erklærer, at de ikke har nogen konkurrerende finansielle interesser.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| BACTEC Plus Aerobic/F Medium | Becton Dickinson; BD, Franklin Lakes, NJ, USA | 442192 | |
| BACTEC Lytic/10 Anaerobic/F Medium | Becton Dickinson; BD, Franklin Lakes, NJ, USA | 442265 | |
| BACTEC Peds Plus Medium | Becton Dickinson; BD, Franklin Lakes, NJ, USA | 442194 | |
| Vacutainer - Blood transfer device | Becton Dickinson; BD, Franklin Lakes, NJ, USA | 364880 | Single use sampling device reducing the risk of needlestick injury |
| Vacutainer SST 5.0 ml, Advance plus | Becton Dickinson; BD, Franklin Lakes, NJ, USA | 367954 | Serum separating tube |
| Syringe 10 ml | Becton Dickinson; BD, Franklin Lakes, NJ, USA | 302143 | |
| Transfer pipette | Samco, USA | 222-20S | |
| Transfer pipette (fine tipped) | Samco, USA | 232-20S | |
| Microcentrifuge tube (2.0 ml) | Eppendorf, Hamburg, Germany | 0030.120.094 | |
| Sterile water (DNAse and RNAse free) | Life Technologies, Carlsbad, California, USA | 10977-015 | |
| Formic acid | Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA | F0507 | |
| Matrix solution | Bruker Daltonics, Bremen Germany | 285074 | 10 mg/ml α-cyano-4-hydroxycinnamic acid, 50% acetonitrile, 2.5% trifluoroacetic acid |
| Benchtop microflex LT MALDI-TOF MS | Bruker Daltonics, Bremen Germany | Utilizing BioTyper 3.1 (Build 65) and FlexControl 3.3 (Build 99) software |
References
- Bearman, G. M., Wenzel, R. P. Bacteremias: a leading cause of death. Arch. Med. Res. 36 (6), 646-659 (2005).
- Leibovici, L., Shraga, I., Drucker, M., Konigsberger, H., Samra, Z., Pitlik, S. D. The benefit of appropriate empirical antibiotic treatment in patients with bloodstream infection. J. Intern. Med. 244 (5), 379-386 (1998).
- Kumar, A., et al. Duration of hypotension before initiation of effective antimicrobial therapy is the critical determinant of survival in human septic shock. Crit. Care Med. 34 (6), 1589-1596 (2006).
- Munson, E. L., Diekema, D. J., Beekmann, S. E., Chapin, K. C., Doern, G. V. Detection and treatment of bloodstream infection: laboratory reporting and antimicrobial management. J. Clin. Microbiol. 41 (1), 495-497 (2003).
- Clerc, O., Prod'hom, G., Vogne, C., Bizzini, A., Calandra, T., Greub, G. Impact of Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry on the Clinical Management of Patients With Gram-negative Bacteremia: A Prospective Observational Study. Clin. Infect. Dis. 56 (8), 1101-1107 (2013).
- Dekker, J. P., Branda, J. A. MALDI-TOF Mass Spectrometry in the Clinical Microbiology Laboratory. Clinical Microbiology Newslette. 33 (12), 87-93 (2011).
- Seng, P., et al. Ongoing revolution in bacteriology: routine identification of bacteria by matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry. Clin. Infect. Dis. 49 (4), 543-551 (2009).
- Neville, S. A., et al. Utility of matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry following introduction for routine laboratory bacterial identification. J. Clin. Microbiol. 49 (8), 2980-2984 (2011).
- Schmidt, V., Jarosch, A., März, P., Sander, C., Vacata, V., Kalka-Moll, W. Rapid identification of bacteria in positive blood culture by matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 31 (3), 311-317 (2012).
- March-Rosselló, G. A., Muñoz-Moreno, M. F., de Urriés, M. C., Bratos-Pérez, M. A. A differential centrifugation protocol and validation criterion for enhancing mass spectrometry (MALDI-TOF) results in microbial identification using blood culture growth bottles. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 32 (5), 699-704 (2012).
- Christner, M., Rohde, H., Wolters, M., Sobottka, I., Wegscheider, K., Aepfelbacher, M. Rapid identification of bacteria from positive blood culture bottles by use of matrix-assisted laser desorption-ionization time of flight mass spectrometry fingerprinting. J. Clin. Microbiol. 48 (5), 1584-1591 (2010).
- Gray, T. J., Thomas, L., Olma, T., Iredell, J. R., Chen, S. C. Rapid identification of Gram-negative organisms from blood culture bottles using a modified extraction method and MALDI-TOF mass spectrometry. Diagn. Microbiol. Infect. Dis. 72 (2), 110-112 (2013).
- Hazelton, B. J., Thomas, L. C., Unver, T., Iredell, J. R. Rapid identification of Gram-positive pathogens and their resistance genes from positive blood culture broth using a multiplex tandem RT-PCR assay. J. Med. Microbiol. 62 (2), 223-2231 (2013).
- Saffert, R. T., Cunningham, S. A., Mandrekar, J., Patel, R. Comparison of three preparatory methods for detection of bacteremia by MALDI-TOF mass spectrometry. Diagn. Microbiol. Infect. Dis. 73 (1), 21-26 (2012).
- Consoir, C., Lörch, D., Schneider, C. Direct identification of bacteria from charcoal-containing blood culture bottles using matrix-assisted laser desorption/ionisation time-of-flight mass spectrometry. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 31 (10), 2843-2850 (2012).
- Martiny, D., Dediste, A., Vandenberg, O. Comparison of an in-house method and the commercial Sepsityper™ kit for bacterial identification directly from positive blood culture broths by matrix-assisted laser desorption-ionisation time-of-flight mass spectrometry. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 31 (9), 2269-2281 (2012).
- Moussaoui, W., et al. Matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry identifies 90% of bacteria directly from blood culture vials. Clin Microbiol Infect. 16 (11), 1631-1638 (2010).
- Novel,, et al. improved sample preparation for rapid, direct identification from positive blood cultures using matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight (MALDI-TOF) mass spectrometry. J. Mol. Diagn. 13 (6), 701-706 (2011).
- Fothergill, A., Kasinathan, V., Hyman, J., Walsh, J., Drake, T., Wang, Y. F. Rapid Identification of Bacteria and Yeasts from Positive-Blood-Culture Bottles by Using a Lysis-Filtration Method and Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization-Time of Flight Mass Spectrum Analysis with the SARAMIS Database. J. Clin. Microbiol. 51 (3), 805-809 (2013).
