L'application de laser désorption / ionisation de temps assistée par matrice de vol (MALDI-TOF), la spectrométrie de masse (MS) directement à un bouillon de culture de sang accélère l'identification de bactéries. La méthode présentée est une méthode rapide et fiable pour l'identification des bactéries à Gram négatif directement à partir de bouillon de culture de sang.
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Article de méthode
Identification rapide des bactéries à Gram négatif de sang Bouillon de culture à l'aide MALDI-TOF spectrométrie de masse
Dans cet article
Résumé
Résumé
Un rôle important du laboratoire de microbiologie clinique est de fournir une identification rapide de bactéries causant l'infection sanguine. Identification traditionnelle nécessite la sous-culture de signalé bouillon de culture de sang avec identification disponible uniquement après que les colonies sur gélose solide ont mûri. MALDI-TOF MS est une méthode fiable pour l'identification rapide de la majorité des bactéries cliniquement pertinentes lorsqu'il est appliqué à des colonies sur un milieu solide. L'application de MALDI-TOF MS directement bouillon de culture de sang est une approche intéressante car elle a le potentiel d'accélérer l'identification des espèces de bactéries et d'améliorer la gestion clinique. Cependant, un problème important à surmonter est la pré-analyse suppression de brouilleurs résines, des protéines et de l'hémoglobine contenue dans le sang culture spécimens qui, s'il n'est pas retiré, interfèrent avec les spectres MS et peuvent entraîner des scores d'identification discrimination insuffisantes ou faibles. En outre, il est nécessaire de concentrer bacteria pour développer les spectres d'une qualité suffisante. La méthode présentée décrit la concentration, la purification et l'extraction des bactéries Gram négatives permettant l'identification précoce des bactéries à partir d'un bouillon de culture de sang signalé.
Introduction
Les patients atteints d'une infection sanguine (BSI) en raison de bactéries continuent d'avoir une forte mortalité à l'hôpital, allant de 6 à 48% 1. La livraison de l'antibiotique empirique approprié favorise la survie et dans le sous-ensemble de patients atteints de sepsis sévère, chaque heure de retard à un traitement approprié est corrélée à une diminution de la survie de 2,3. En conséquence, un objectif clé du laboratoire clinique est de détecter rapidement, identifier et communiquer la présence de bactéries dans les cultures de sang pour éclairer les décisions cliniques. Il a été démontré que le laboratoire de microbiologie ....
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Protocole
1. Hémoculture bouillons Signaler comme «Positive»
- Retirez la bouteille d'hémoculture signalé du cabinet continue d'incubation de surveillance et le placer dans une enceinte de sécurité biologique. Remarque: Les bouteilles peuvent contenir des micro-organismes dangereux et les précautions universelles doivent être suivies. En raison du risque d'aérosols infectieux dans l'échantillonnage, toutes les procédures d'échantillonnage doivent être effectuées dans une hotte à flux laminaire de biosécurité de classe II.
2. Coloration de Gram est préparé
- Préparer une coloration de Gram à partir d....
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Résultats
Le MS spectres MALDI-TOF généré sont comparés à la base de données de référence intégrée des spectres. Un score logarithmique est attribué pour la confiance du match entre l'isolat de test et la base de données de référence isolats, avec la recommandation d'un score ≥ 1,7 nécessaires à l'identification probable au niveau de la génération (figure 1) et ≥ 2,0 pour une identification probable des espèces (Figure 2). Rapport au niveau de l'espèce lorsque le score ≥ 1.7 et le.......
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Discussion
Il est important lors de l'application MALDI-TOF MS de bouillon de culture de sang que les étapes de post de centrifugation sont effectuées avec suffisamment de soin à ne pas remixer les composants séparés. Il est particulièrement important de supprimer les constituants de culture de sang et de protéines cellulaires humaines, y compris l'hémoglobine, qui peuvent produire des pointes interférant avec les spectres MALDI-TOF.
Bien que MS fabrique recommander couper du score de ≥ 2,0 pou.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs déclarent qu'ils n'ont aucun intérêt financier concurrents.
Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| BACTEC Plus Aérobie/F Moyen | Becton Dickinson ; BD, Franklin Lakes, NJ, États-Unis | 442192 | |
| BACTEC Lytic/10 Anaérobie/F Moyen | Becton Dickinson ; BD, Franklin Lakes, NJ, États-Unis | 442265 | |
| BACTEC Peds Plus Medium | Becton Dickinson ; BD, Franklin Lakes, NJ, États-Unis | 442194 | |
| Vacutainer - Dispositif de transfert de sang | Becton Dickinson ; BD, Franklin Lakes, NJ, États-Unis | 364880 | Dispositif d’échantillonnage à usage unique réduisant le risque de blessure par piqûre d’aiguille |
| Vacutainer SST 5.0 ml, Advance plus | Becton Dickinson ; BD, Franklin Lakes, NJ, États-Unis | 367954 | Serum tube de séparation Serum Serum |
| 10 ml | Becton Dickinson ; BD, Franklin Lakes, NJ, États-Unis | 302143 | |
| Pipette de transfert | Samco, | États-Unis 222-20S | |
| Pipette de transfert (à pointe fine) | Samco, | États-Unis 232-20S | |
| Tube de microcentrifugation (2,0 ml) | Eppendorf, Hambourg, Allemagne | 0030.120.094 | |
| Eau stérile (sans DNAse ni RNAse) | Life Technologies, Carlsbad, Californie, États-Unis | 10977-015 | |
| Acide formique | Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, États-Unis | F0507 | |
| Solution matricielle ; | Bruker Daltonics, Brême Allemagne | 285074 | 10 mg/ml d’acide alpha-cyano-4-hydroxycinnamique, 50 % d’acétonitrile, 2,5 % d’acide trifluoroacétique |
| Microflex de paillasse LT MALDI-TOF MS | Bruker Daltonics, Brême Allemagne | Utilisation des logiciels BioTyper 3.1 (Build 65) et FlexControl 3.3 (Build 99) |
Références
- Bearman, G. M., Wenzel, R. P. Bacteremias: a leading cause of death. Arch. Med. Res. 36 (6), 646-659 (2005).
- Leibovici, L., Shraga, I., Drucker, M., Konigsberger, H., Samra, Z., Pitlik, S. D. The benefit of appropriate empirical antibiotic treatment in patients with bloodstream....
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Réimpressions et autorisations
