Summary
I denne undersøgelse en ny platform undersøge intraneuronale molekylære underskrifter af behandlingsrespons ved bipolar sygdom (BD) blev udviklet og valideret. Lugteepitel fra BD patienter blev opnået gennem nasale biopsier. Så laser-capture mikrodissektion blev kombineret med Real Time RT-PCR til at undersøge den molekylære signatur af lithium respons i BD.
Abstract
Bipolar lidelse (BD) er en alvorlig neuropsykiatrisk lidelse med dårligt forstået patofysiologi og typisk behandlet med stemningen stabilisator, lithiumcarbonat. Dyreforsøg samt humane genetiske undersøgelser viser, at lithium påvirker molekylære mål, der er involveret i neuronal vækst, overlevelse og modning, og især molekyler involveret i Wnt signalering. I betragtning af den etiske udfordring at opnå hjernen biopsier for at undersøge dynamiske molekylære ændringer er forbundet med lithium-respons i det centrale nervesystem (CNS), kan man overveje at anvende neuroner opnået fra olfaktoriske væv for at nå dette goal.The lugteepitel indeholder olfaktoriske receptor neuroner på forskellige stadier af udvikling og glia-lignende støtte celler. Dette giver en unik mulighed for at studere dynamiske ændringer i CNS af patienter med neuropsykiatriske sygdomme, ved hjælp af olfaktoriske væv sikkert fås fra nasale biopsier. For at overvinde den ulempe udgøres af substantial forurening af biopsi olfaktoriske væv med ikke-neuronale celler, blev en ny tilgang for at opnå berigede neuronal cellepopulationer udviklet ved at kombinere nasale biopsier med laser-capture mikrodissektion. I denne undersøgelse blev et system til undersøgelse behandlingsrelaterede associeret dynamiske molekylære forandringer i neuronvæv udviklet og valideret ved hjælp af en lille pilot prøve af BD patienter rekrutteret til studiet af de molekylære mekanismer i lithium behandlingsrespons.
Introduction
Bipolar lidelse (BD) er en alvorlig neuropsykiatrisk lidelse, karakteriseret ved patologiske ændringer i humør, drive og kognition 1. Lithium anvendes til behandling af BD har vist sig at ændre steady state mRNA niveauer af et stort antal gener i dyreforsøg 2, men det er uvist, om nogen af disse molekyler er forbundet med klinisk respons hos mennesker 2. Forståelse mekanismen af lithium reaktion ville kræve undersøgelse lithium-induceret molekylære ændringer i neuronale væv. Desværre er det ikke praktisk at få hjernen biopsier af BD patienter før og efter lithium terapi for at identificere molekylære signaturer af lithium respons. Post-mortem hjernevæv er blevet anvendt til at undersøge biomarkører i BD, men de kan ikke anvendes til at vurdere molekylære markører forbundet med dynamiske ændringer i følelser, kognition og drev; og gyldigheden af efterfølgende konstateret lithium behandlingsrespons kan være problematisk 4. Lymfocytter og andre blodceller kan være nyttige, men molekylære ændringer i blodcellerne kan afvige neuronal ændringer 3-5. Cerebrospinalvæske kan være utilstrækkelig til at indhente oplysninger om intracellulære molekyler, som kan afspejle sygdomsassocierede og medicin-reversibel iboende forandringer.
Lugteepitelet (OE) er en unik del af det centrale nervesystem (CNS), embryologisk relateret til limbiske strukturer 6; og det er let tilgængeligt via nasal biopsier. Den består af glial-lignende støtte (dvs. sustentacular) celler basal prolifererende celler og olfaktoriske receptor neuroner på forskellige stadier af udvikling 7-9. Derfor OE giver en enestående mulighed for at accessibly studere dynamiske ændringer i CNS af patienter med neuropsykiatriske sygdomme 7. Undersøgelser demonstrerer anvendeligheden af OE som surrogat væv til undersøgelse af sygdoms- forbundet begivenheder, der afspejler disse OCCurring i hjerneneuroner 8,9. For eksempel har undersøgelser udnyttes OE for at undersøge molekylære profiler forbundet med psykiatriske lidelser 10-14. Lugtesystemet også tjener til at identificere kliniske endophenoytpes såsom lugt underskud, der er forbundet med de negative symptomer på skizofreni 15. Derudover fortsætter neurologiske processer i OE gennem hele livet, der giver et nyttigt avenue at modellere den underliggende patofysiologi psykiatriske tilstande 8,9.
Men en ulempe ved anvendelsen af dette væv er den betydelige forurening af olfaktoriske biopsier med ikke-neuronale celler 16. For eksempel total RNA anvendes til genekspressionsstudier i tidligere OE undersøgelser indeholdt RNA ekstraheret fra hele nasal biopsi væv, herunder RNA fra ikke-neuronale celler 17. Derfor har de tidligere metoder været begrænset af kvaliteten af celler. For at overvinde dette problem, at en ny tilgang opnå berigede neuronale cellepopulationer ved at kombinere nasale biopsier med laser-capture mikrodissektion (LCM) er blevet udviklet 18.
LCM er en teknik, der giver mulighed for selektiv isolering af celler under anvendelse af UV laserskæring kombineret med infrarød laser 19-21. Kombinere LCM med OE tilgang minimerer væsentlig forurening af OE af ikke-neuronale celler og dermed øge berigelse af neuronale celler 18. Desuden kan den neuronale lag adskilles fra submucosa lag under et mikroskop, hvilket eliminerer behovet for farvning. Neuronale celletyper kan yderligere skelnes fra andre cellepopulationer med primære antistoffer, som udtrykkes af celletypen af interesse 7. Derfor er denne procedure etablerer en lettere fremgangsmåde til berigelse af næsten rent neuronal cellepopulation, der kan anvendes til genekspression undersøgelser, immunhistokemi og andre morfologiske undersøgelser.
ve_content "> Denne undersøgelse har til formål at etablere en eksperimentel platform for at undersøge molekylære forandringer i olfaktoriske neuroner forbundet med sygdomstilstande og behandlingsrespons. For at løse dette, et lille sæt af røgfrie patienter, som opfyldte DSM-IV diagnostiske kriterier for BD baseret på Diagnostic interview til genetiske undersøgelser (DIG) 22 blev ansat til at gennemgå to nasale biopsier: en biopsi før behandling med lithium og den anden biopsi, efter 6 ugers daglig oral lithium terapi Endvidere skal de støtteberettigede BD patienterne være:. symptomatisk for depression baseret på at lave ≥10 ud af 60 i klinikeren administreret Montgomery-Asberg Rating Scale (MADRS) 23 symptomatisk for hypomani eller mani, baseret på en score ≥10 ud af 56 på klinikeren administreret Young-Mania Rating Scale (YMRS) 24. eller ≥10 på begge MADRS og YMRS Rater-Inter-Rater koefficient på aftale mellem klinikere for begge skalaer er> 0,96 Efter biopsier, neuroner var Enri.tede fra OE ved LCM. Efter yderligere kontrolforanstaltninger kvalitet, for at sikre, udvinding af høj kvalitet RNA fra væv og neuronal berigelse, blev Real Time RT-PCR udført for at undersøge før og efter behandling ekspressionsniveauer af gener af interesse. De efterfølgende afsnit indeholder en beskrivelse af valideringen af denne tilgang, fremhæver optimering af protokollen og de strategier, der blev ansøgt om fejlfinding protokollen.Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
BEMÆRK: Alle forskningsaktiviteter frivillige i denne undersøgelse blev indgivet informeret samtykke dokumenter godkendt af Institutional Review Board af Howard University og Johns Hopkins University. Kun deltagere, der givet samtykke ved at underskrive informeret samtykke dokumenter blev indskrevet i undersøgelsen. Undersøgelsen base for denne analyse bestod af: 20 patienter (12 BD og 10 kontroller, 30% mænd) og gennemsnitsalder (SD) på 38,2 (14,1) år.
BEMÆRK: Spray alle overflader med RNase Zap at fjerne RNase forurening fra glas- og plastoverflader.
1. Biopsi Procedure
- Spray topisk lidocain (xylocain) flydende 4% og oxymetazolin HCI 0,05% i næsehulen af undersøgelsen deltager og tillade 15 minutter af bedøvende tid.
- Soak ½ x 3 tommer kirurgiske cottonoids i en blanding af lidocain og oxymetazolin og indsæt i næsehulen langs superior del af næseskillevæggen og tillade at sidde i 15 minutter.
- Anvendelse af en 30 ° stivnasal endoskop til at finde den øverste del af næsehulen, fjerne nasal mucosa med op-bidende nasale pincet fra den overlegne del af næseskillevæggen, idet flere små prøver.
2. Forberedelse af vævsblokke
- Umiddelbart før biopsi, fylde standard størrelse cryomolds med væv frysning medium.
- Ved hjælp af autoklaveres pincet, mount frisk væv i frysemedium og fryse på tøris. Fyld resten af cryoblock med frysemedium, fryse cryoblock på tøris, og gemme blokke på -80ºC.
3. Cryosectioning
- Forbered polyethylennaphthalat (PEN) membran objektglas umiddelbart før cryosectioning. Spray objektglassene med RNase Zap opløsningen i 5 min. Derefter skylles dias i diethylpyrocarbonat (DEPC) vand og lad lufttørre i 30 min. Aktiver tørrede slides under UV-lys i 30 minutter.
- Kryosektion hver blok helt på 30 um. Hold glider på tør ice, og sektioner frosset så meget som muligt. Opbevar dias ved -80 ºC efter afslutningen.
4. Laser-Capture mikrodissektion
- Begynd med at dehydrere dias umiddelbart før mikrodissektion. Lad frosne dias tø i 10 sek, og derefter anvende følgende ethanol serie til hver slide: 60% (2 ml, 15 sek), 80% (2 ml, 15 sek), 95% (3 ml, 25 sek), 100 % (7 ml, 60 sek).
- Drej fotoaktiveret lokalisering mikroskopi (PALM) mikroskop og indstillet til følgende betingelser: For 10X forstørrelse indstille energi til 82, fokus på 74, og hastighed til 25 - 30. Af 20X forstørrelse, indstille energi til 63, fokus på 67, og hastighed til 5 - 6. Juster efter behov for at opnå optimale klipperesultat.
- Visuelt identificere neuroner ved hjælp 20X eller 10X forstørrelse. Skelner tynde overflade olfaktoriske neuron lag fra underliggende sub-mucosa under et mikroskop uden brug af farvningsprocedure. Overhold neuroner som en tæt søjleformet udseende 18.
- Brug Pencil funktion i den førnævnte mikroskop i trin 4.2, spore omkring neuronal lag. Trace lidt væk fra neuroner for at forhindre forbrænding af neuroner fra laser. Dette er afgørende for at opnå kvalitet RNA høj. Derefter indleder laser guidede skæring.
- Saml dissekerede sektioner ved hjælp af fine tip mikrodissektions pincet og sætte væv i en mikrorør indeholdende 100 pi lysisbuffer på is. Gentag for alle neuronale sektioner opnået fra en enkelt prøve. Samlet dissektion pr proeve ikke overstige 50 min.
- Når dissektion er færdig, straks vortex prøve lysater og holde på tøris. Opbevar prøverne ved -80ºC til total RNA isolation.
5. Isolering af Total RNA og kvalitetskontrol Analysis
- Optø prøve lysater på is. Udfør total RNA isolation med RNAqueous Micro Kit med DNase-I inaktivering ved at følge fabrikantens protokol uden ændringer (se <strong> figur 1). Det samlede elueringsvolumen er cirka 20 pi.
- Mål RNA-koncentrationen og evaluere RNA kvalitet med RNA Integrity Number (RIN) under anvendelse Bioanalyzer. Prøver, der opfylder kvalitetskontrol kriterier i figur 2 kan anvendes til cDNA-syntese.
6. cDNA Synthesis
- Syntetisere cDNA under anvendelse af en valideret kommercielt kit (se tabel af reagenser). Udfør trin for at kombinere 0,1 annealing - 1,0 ng RNA (afhængig af tilgængelighed) og RNase frit vand til et samlet volumen på 8 pi pr rør. Derefter tilsættes 1 ml af oligo d (T) 20 primer og 1 pi 10 mM dNTP mix per rør til et samlet volumen på 10 pi.
- Forsigtigt vortex og centrifugeres prøver og annealing prøver ved 65 ° C i 5 minutter. Efter at reaktionen er afsluttet, sender kølige prøver på is.
- Master mix løsning Forbered i henhold til specifikationerne i tabel 1. Derefter tilsættes 9,5 μl Master mix og 0,5 pi kommercielt tilberedt revers transkriptase (RT) til hvert rør. Tilsæt 0,5 pi RNase-frit vand til at styre røret i stedet for RT.
- Kør en RT-reaktion med den første inkubering ved 50 ºC i 50 minutter, derefter 85 ° C i 5 minutter og endelig 4 ºC hold, uden cykling.
- Fortynd alle prøver ved 5x med vand og prøve. Opbevar prøver ved -80 ºC.
7. Real Time PCR - Bekræft Neuronal Enrichment
- Master mix løsning Forbered i henhold til specifikationerne i tabel 2. Brug en intern kontrol, såsom GAPDH. Sammenlign olfaktoriske markørprotein (OMP) ekspression i mikrodissekeret væv med OMP-ekspression i undissected væv for at bestemme neuronal berigelse.
BEMÆRK: OMP er en markør for olfaktoriske neuroner.
OMP-sekvensen: forward, 5'-CTGTCGGACCTGGCCAAG-3 '
omvendt, 5'-CACCCTCGCCAAAGGTGA-3 '
GAPDH sekvens: fremad, 5'-CATGAGAAGTATGACAACAGCCT-3 '
omvendt, 5'-AGTCCTTCCACGATACCAAAGT-3 '. - Opsæt PCR-plade ved at tilføje 7 pi mester mix i hver brønd og 3 pi cDNA.
- Centrifuge plade i 5 minutter ved 300 xg (1.300 rpm). Run Real Time-PCR-reaktion ved hjælp af standardindstillingerne termiske cykling betingelserne for kommerciel Supermix såsom SYBR grønnere qPCR.
- Analysere data (se figur 2 for specifikationer).
8. Real Time PCR - Angivelse af gener af interesse
- Udfør på prøver, der viser neuronal berigelse af 2 gange eller mere.
- Forbered mester mix på is i hver probe (FAM-mærket probe af interesse og VIC-mærket GAPDH) i separate rør i henhold til specifikationerne i tabel 3.
- Opsætning af en PCR-plade med 8 pi mester mix i hver brønd og 2 pi cDNA.
- Centrifugeres pladen i 5 minutter ved 300 xg (1.300 rpm). Kør Real Time-PCR-reaktion ved hjælp af defAult termiske cykelforhold som pr genekspression mester mix-protokol, som fabrikanten. Analyser udtryk resultater (se figur 2 for specifikationer).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Protokollen og fejlfinding strategi i studiet af molekylære signaturer lykkedes optimeres. RNA kvalitet og neuronale berigelse kriterier for prøver, der skal bruges i længere nedstrøms Real Time-PCR-analyse blev standardiseret. RIN og RNA-koncentrationen blev undersøgt som forstyrrende faktorer til fundne ekspressionsniveauer. På baggrund af analysen af flere prøver med Rins spænder 1-10, blev det bestemt, at et minimum RIN på ~ 3,0 og derover er tilstrækkelig for downstream analyse i denne undersøgelse. Som et resultat blev RNA mængde til cDNA-syntese standardiseret til 1,0 ng. Således prøver af høj kvalitet med en RIN over ~ 3.0 og RNA beløb på 1,0 ng blev omdannet til cDNA. Prøver med 0,1-1,0 ng RNA kan anvendes, hvis en passende stikprøve, er vanskeligt at opnå.
Neuronal berigelse blev bekræftet ved hjælp af Real Time-PCR-analyse. OMP genekspressionsniveauer i Mikrodissekterede prøver blev sammenlignet med dem i undissected prøves at afgøre, om den neuronale lag blev beriget. Mikrodissekterede prøver med to gange eller mere OMP-ekspression sammenlignet med ikke-dissekeret væv anvendes.
Ved at anvende disse kriterier, muligheden for denne foreslåede metode til at studere molekylære ændringer i OE neuroner blev valideret. Figur 3 illustrerer, at ekspressionsniveauer af GSK-3β påvirkes af lithium end af ikke-specifikke ydre faktorer, hvilket indikerer, at denne metode er tilstrækkeligt til at påvise specifikke molekylære ændringer før og efter lithium behandling. Mere specifikt kan ændringer af molekylære signaturer, der er forbundet med lithium behandling respons i BD løses ved at kombinere denne molekylære data med kliniske data.
Figur 1. RNA-ekstraktion og DNase Inaktivering protokol. Den flowchart illustrerer en metode til ekstraktion af RNA fra prøver efter LCM. Totalt RNA elueres to gange for at give en maksimal RNA volumen på ca. 20 pi. Eluerede prøver så gennemgå DNase behandling for DNase inaktivering. Klik her for at se en større udgave af dette tal.
Figur 2. Protokol Resume. Dette tal opsummerer hele protokol for undersøgelse eksperimenter. Nasal væv først biopsi og frosset som cryoblocks. Efter skæring af vævet, de neuronale lag dissekeret ved anvendelse af LCM. RNA-ekstraktion og DNase inaktivering udføres under anvendelse af producentens anvisninger (se figur 1). Prøver, der opfylder kvalitetskontrol kriterier (RIN og RNA mængde) bruges til at syntetisere cDNA og osed for neuronal berigelse analyse. Berigede prøver anvendes i Real Time-PCR-analyse med de ønskede mål. Klik her for at se en større udgave af dette tal.
Figur 3. GSK-3β Expression i BD og kontrolprøver. Denne figur illustrerer ændringerne i GSK-3β ekspressionsniveauer i BD prøverne før og efter lithium behandling og konsekvens i GSK-3β ekspressionsniveauer i kontrolprøver mellem den første og anden biopsi. Taget sammen viser disse data, at GSK-3β-ekspression påvirkes af lithium snarere end ikke-specifikke exogene faktorer.
| Reagenser | Volumen |
| 10 x RT-puffer | 2 pi |
| 25 mM MgCl | 4 pi |
| 0,1 M DDT | 2 pi |
| RNase Out | 0,5 pi |
| SuperScript III | 0,5 pi |
| RNase-frit vand | 1 pi |
Tabel 1. cDNA Synthesis Master Mix Solution.
| Reagenser | x1 | x (# af prøver) |
| Template DNA | 3 pi | - |
| SYBR Green | 5 pi | |
| Primer Mix | 0,8 pi | |
| Vand | 1.2 pi | |
| Total | 10 pi | - |
Tabel 2. Neuronal Berigelse PCR Master Mix Solution.
| Reagenser | x1 | x (# af prøver / primer) |
| dWater | 2 pi | |
| Master Mix | 5 pi | |
| FAM mærkede probe | 0,1 pi | |
| VIC mærkede probe | 0,5 pi | |
| cDNA | 2 pi | - |
Tabel 3. Target PCR Master Mix.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
En ny platform for at opnå berigede olfaktoriske neuronale lag ved at kombinere nasal biopsi og LCM præsenteres og er blevet valideret i denne undersøgelse. Denne teknik kan have omfattende konsekvenser. Det kan anvendes mod biomarkør undersøgelser, også for behandlingsrespons og drug discovery indsats for andre neuropsykiatriske tilstande, hvilket gør en bredere indvirkning på området.
For at opnå høj kvalitet neuroner høj modtagelige for efterfølgende anvendelser, skal nogle få kritiske og fejlfindingstrin bemærkes. For det første får 4 - 6 stykker olfaktoriske væv per patient at have en passende stikprøve. For det andet, da prøverne er modtagelige for RNA-nedbrydning, holde væv ved passende temperaturer, arbejde med RNase gratis udstyr og overflader, brug handsker, og undgå at trække vejret direkte over prøver. Hvis RNA kvalitet er fortsat lav, overveje at udfylde mikrodissektion indenfor 50 min og udfører RNA-ekstraktion umiddelbart efter dissektion eller Vortex prøver straks og holde på tøris indtil opbevaring ved -80 ° C. For at øge udbyttet af RNA, øge antallet af sektioner dissekeret under LCM.
En udfordring at studere hjerne-associeret molekylære ændringer i neuropsykiatriske lidelser eksisterer på grund af manglende tilgængelighed til at studere den menneskelige hjerne. Alternative fremgangsmåder omfatter undersøgelse af perifere blodlegemer, obduceret hjerner, og induceret pluripotente stamceller (IPS) celler. Blodlegemer ikke repræsentere sygdoms-associerede neuronale ændringer. Obduceret hjerner kan ikke være den ressource til at studere dynamiske og tilstandsændringer forbundet med sygdommen progression og reaktion på medicin. iPS celler kan ikke direkte afspejle tilstandsændringer, fordi sådanne spor vil sandsynligvis blive slettet ud i løbet af omprogrammering og vedligeholdelse af celler. Derfor fordelene ved at bruge OE væv er evnen til at undersøge både statslige og dynamiske ændringer i neuronal sammenhæng. Især IPS afledt neuronal stamcellerceller kan ikke i tilstrækkelig grad afspejler effekten af 6 ugers lithium behandling, på grund af dyrkning og omprogrammering trin. Metoden i dette papir giver os mulighed for at studere behandlingsrelaterede associeret molekylære ændringer og relatere dem til udviklingen i de kliniske symptomer. Det skal bemærkes, at i hvert fald på nuværende tidspunkt, mængden af neuroner opnået fra OE væv er tilstrækkelig til studier på det molekylære niveau, men kan ikke begrænses til karakterisering af proteiner gennem immunhistokemi applikationer. Således forventes også yderligere tekniske forbedringer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne rapporterer ingen økonomiske relationer med kommercielle interesser.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Tissue Preparation | |||
| Tissue-Tek Cryomold Molds | Sakura Finetek | 4557 | |
| Tissue-Tek O.C.T. Compound | Sakura Finetek | 4583 | |
| Cryosectioning | |||
| Membrane Slide 1.0 PEN (D) | Carl Zeiss Microscopy | 415190-9041-000 | |
| Rnase Zap | Ambion | AM9780 | |
| DEPC Treated Water | Quality Biological | 351-068-131 | |
| Microdissection | |||
| Microscope: PALM Series MicroLaser System | Carl Zeiss Microscopy | Model: Axiovert 200M Software: Robo v3.2 |
|
| No. 5 Dumont Microdissction Forceps | Roboz | RS-49085 | |
| RNA Extraction | |||
| RNAqueous Micro Kit | Ambion | AM1931 | |
| cDNA Synthesis | |||
| SuperScript III First Strand Synthesis Kit | Invitrogen | 18080-051 | |
| OMP qPCR | |||
| SYBR GreenER qPCR SuperMix | Invitrogen | 11760-500 | |
| Taqman qPCR | |||
| TaqMan Expression Assay Probes | Applied Biosystems | Various | |
| TaqMan Gene Expression Master Mix | Applied Biosystems | 4369016 | |
References
- Goodwin, F. K., Jamison, K. R. Manic-depressive illness. , Oxford University Press. (1990).
- Einat, H., Manji, H. K. Cellular plasticity cascades: genes-to-behavior pathways in animal models of bipolar disorder. Biol Psychiatry. 59 (12), 1160-1171 (2006).
- Severino, G., et al.
- Beech, R. D., et al. Gene-expression differences in peripheral blood between lithium responders and non-responders in the Lithium Treatment-Moderate dose Use Study (LiTMUS). Pharmacogenomics J. 14 (2), 182-191 (2013).
- Horiuchi, Y., et al. Olfactory cells via nasal biopsy reflect the developing brain in gene expression profiles: utility and limitation of the surrogate tissues in research for brain disorders. Neurosci Res. 77 (4), 247-250 (2013).
- Dryer, L., Graziadei, P. P. Projections of the olfactory bulb in an elasmobranch fish, Sphyrna tiburo: segregation of inputs in the telencephalon. Anat Embryol (Berl. 190 (6), 563-572 (1994).
- Hahn, C. G., et al. In vivo and in vitro neurogenesis in human olfactory epithelium. J Comp Neurol. 483 (2), 154-163 (2005).
- Cascella, N. G., Takaki, M., Lin, S., Sawa, A. Neurodevelopmental involvement in schizophrenia: the olfactory epithelium as an alternative model for research. J Neurochem. 102 (3), 587-594 (2007).
- Sawa, A., Cascella, N. G. Peripheral olfactory system for clinical and basic psychiatry: a promising entry point to the mystery of brain mechanism and biomarker identification in schizophrenia. Am J Psychiatry. 166 (2), 137-139 (2009).
- Mor, E., et al. MicroRNA-382 expression is elevated in the olfactory neuroepithelium of schizophrenia patients. Neurobiol Dis. 55, 1-10 (2013).
- Kano, S., et al. Genome-wide profiling of multiple histone methylations in olfactory cells: further implications for cellular susceptibility to oxidative stress in schizophrenia. Mol Psychiatry. 18 (7), 740-742 (2013).
- Toritsuka, M., et al. Deficits in microRNA-mediated Cxcr4/Cxcl12 signaling in neurodevelopmental deficits in a 22q11 deletion syndrome mouse model. Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (43), 17552-17557 (2013).
- Evgrafov, O. V., et al. Olfactory neuroepithelium-derived neural progenitor cells as a model system for investigating the molecular mechanisms of neuropsychiatric disorders. Psychiatr Genet. 21 (5), 217-228 (2011).
- Fan, Y., et al. Focal adhesion dynamics are altered in schizophrenia. Biol Psychiatry. 74 (6), 418-426 (2013).
- Ishizuka, K., et al. Negative symptoms of schizophrenia correlate with impairment on the University of Pennsylvania smell identification test. Neurosci Res. 66, 106-110 (2010).
- Sattler, R., et al. Human nasal olfactory epithelium as a dynamic marker for CNS therapy development. Exp Neurol. 232 (2), 203-211 (2011).
- Rimbault, M., Robin, S., Vaysse, A., Galibert, F. RNA profiles of rat olfactory epithelia: individual and age related variations. BMC Genomics. 10, 572 (2009).
- Tajinda, K., et al. Neuronal biomarkers from patients with mental illnesses: a novel method through nasal biopsy combined with laser-captured microdissection. Mol Psychiatry. 15 (3), 231-232 (2010).
- Bonner, R. F., et al. Laser capture microdissection: molecular analysis of tissue. Science. 278 (5342), 1481-1483 (1997).
- Fink, L., et al. Real-time quantitative RT-PCR after laser-assisted cell picking. Nat Med. 4 (11), 1329-1333 (1998).
- Emmert-Buck, M. R., et al.
- Nurnberger, J. I. Jr, et al. Diagnostic interview for genetic studies. Rationale, unique features, and training. NIMH Genetics Initiative. Arch Gen Psychiatry. 51 (11), 849-859 (1994).
- Montgomery, S. A., Asberg, M. A new depression scale designed to be sensitive to change. Br J Psychiatry. 134, 382-389 (1979).
- Young, R. C., Biggs, J. T., Ziegler, V. E., Meyer, D. A. A rating scale for mania: reliability, validity and sensitivity. Br J Psychiatry. 133, 429-435 (1978).
