Summary
Iris neovaskülarizasyon, iskemik retina hastalığı, ortak bir komplikasyonu görme tehdit neovasküler glokom için neden olabilir. Burada, anjiogenez oransal maddeler noninvaziv değerlendirme için kullanılabilir deneysel Iris neovaskülarizasyon inducing için fare bir protokol açıklayın.
Abstract
Angiogenez noninvaziv değerlendirme için genel bir model olarak delik kaynaklı Iris neovaskülarizasyon modeli açıklar. Model neovasküler Glokom, görme tehdit komplikasyonu diabetik retinopati hedefleme için uygundur. Bu yöntem Iris vasküler yanıt indüksiyon üzerinde kendinden contalı Üveal delikler BALB/c fareler üzerinde bir dizi dayanmaktadır ve fare oküler damarlara doğum sonrası olgunlaşma yararlanır. Fare pups Üveal delikler günden ne zaman belgili tanımlık pups doğal doğum sonrası güne kadar 24,5 onların gözlerini açmak postnatal 12.5, tabi. Nedeniyle saydamlığı kornea Iris damarlara kolayca zaman içinde noninvaziv in vivo yöntemler tarafından çözümlenebilir. Ayrıca, yarı saydam Iris BALB/c farelerin flatmounted en az belirsiz arka plan boyama ile detaylı immunohistologic analiz için olabilir. Bu modelde, anjiogenez esas olarak enflamatuar tarafından tahrik edilmektedir ve plazminojen sistemleri etkinleştirme. Delik kaynaklı modeli Iris neovaskülarizasyon küçük Rodents ikna etmek için ilk ve doğrudan noninvaziv vivo içinde analiz anjiogenik sürecinin izin avantajı vardır. Ayrıca, model anjiogenik modülasyonlu maddelerle, hangi potansiyel angiogenez bir vivo içinde bakış açısı ile çalışmada vurgulamaktadır birleştirilebilir.
Introduction
Silier vücut ve koroid ile birlikte iris gözün en bozukluklarına doku uvea oluşmaktadır. Iris damarlara göz ön TMMOB homeostazı korumada esastır. Atar ve toplar damarlardaki arasında bol anastomoz bağlantıları bir sonucu olarak, besin ve oksijen Iris kendisi sadece, ama tüm ön bölümüne göz1temini Iris kan damarları sağlar.
Yeni kan damarları veya önceden varolan olanlardan angiogenez oluşumu geliştirme ve2şifa yara gibi fizyolojik süreçlerde esastır. Angiogenez ince kurallı faktörlere, vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF) ve plazminojen aktivatör inhibitör (PAI), hem de birden fazla inflamatuar faktörleri çok sayıda tarafından düzenlenir ve bu faktörlerin bir dengesizlik için patolojik yol açabilir angiogenez3.
Gözlerimin içine neovaskülarizasyon proliferatif Diyabetik retinopati (PDR) ve neovasküler glokom (NVG) gibi görme tehdit eden hastalıkların nedeni. Bu oküler hastalıklar, Fokal neovaskülarizasyon yaygın olarak retina dokularının henüz inflamatuar dengesizlik bulunur ve anjiogenik faktörler derinliklerinde her iki arka ve ön oküler göz rubeosis iridis ile ilişkili olmuştur Iris patolojik neoangiogenesis4için klinik terim. Bu patolojiler angiogenez geçmesi yetişkin Iris kapasitesini gösterir. Farelerde, oküler damarlara doğumdan sonra olgunlaşmamış ve olgunlaşma doğum sonrası devam ediyor. Bu özelliği gelişme oksijen kaynaklı retinopati, yakından retinopati Prematüre5klinik durumunu taklit eden bir model fare modeli istismar edilir. Buna ek olarak, anjiogenez ve iltihap yara iyileşme mekanizmalarını6önemli bir rol oynamaktadır ve kendisi şifa yara angiogenez modelleri7ile ilişkili olduğu düşünülmektedir.
Bu çalışmada, delik kaynaklı Iris neovaskülarizasyon modeli açıklar. Üveal delikler limbus, dış sınırı hangi sistem şifa yara tetikleyen tarafından Iris neovaskülarizasyon neden gerçekleştirilir. Nedeniyle şeffaflık kornea, iris damarlara olabilir kolayca vivo içinde noninvaziv yöntemlerle analiz. Delinmiş gözleri plazminojen etkinleştirme ve inflamatuar işaretleri8artış ile ilişkili olduğu düşünülmektedir iris vasküler yatağın bir artış mevcut. Sunulan model anjiogenez ve anjiogenik bileşikler eleme çalışma için yeni bir araç olarak büyük bir potansiyele sahiptir ve anjiogenik işlemleri doğrudan vivo içinde görselleştirme sağlar.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Her iki cinsiyetten BALB/c fare pups göre bildirimi kullanım hayvan Ophthalmologic ve vizyon araştırma için kullanılan ve iletişim kuralları etik hayvan araştırma için Stokholm'ün Komitesi tarafından kabul edildi. Fareler Hemşirelik Anne, 12 h gündüz/gece döngüsü, yiyecek ve su, ücretsiz erişim ile birlikte çöp içinde yer alan ve her gün takip.
Not: cerrahi işlem için fare ile uçucu isoflurane anestezi altında tutuldu. Tedaviler ve kullanılan maddeler ile etkileşebilir gibi oküler merhem oküler işlemler sırasında cesareti. Gerekirse, Kuru göz, önlemek için steril normal tuzlu çözüm bir damla uygulanabilir. Üveal delikler kendi kendini iyileştirme olmasına rağmen bakım kısırlık cerrahi aletler ile sağlamak için Üveal delikler sırasında çekilmiş. Ameliyat sonrası tedavi subkutan, normal serum fizyolojik solüsyonu ile hidrasyon dahil ve oküler topikal yönetimi tetracaine hidroklorür ile analjezi. Belgili tanımlık pups Hemşirelik Anne, temiz bir kafes için iade edilmeden önce bir Isıtma yastık üzerinde sternal recumbency kurtarmak için izin verildi. Çöp stres önlemek için aynı Hemşirelik annesiyle tutuldu.
1. anestezi
- İsoflurane anestezik yönetmek ve bir küçük fare maskesi de birleştiğinde emin olmak için anestezi indüksiyon odası, hazır olun.
Not: tüm ilgili etik izni ile anlaşma tüm hayvan deneyleri gerçekleştirin. - İndüksiyon odası ile 3-%4 uçucu isoflurane atmosferik havada prefill.
Not: Farklı anestezik maddeler isoflurane başka göre etik izni kullanılabilir. Uçucu anestezik yordamlar havalandırılmış bir tezgah veya duman kaputa yapılmalıdır. - Bir doğum sonrası (P) 12.5 bayat BALB/c fare yavru indüksiyon odasına koyun. Anestezi cihazları isoflurane indüksiyon odasına teslim etmeye hazır olduğunu doğrulayın.
Not: Fare pups kırılgan ve scruff tarafından en iyi işlenmiş. Belgili tanımlık pups arada bir çöp olarak veya stres önlemek için Hemşirelik Anne ile tutmak. - Yavru tam anestezi sağlar.
- Yavaşça, scruff tarafından fare yavru almak.
Not: indüksiyon odası her zaman güvenli ve istikrarlı indüksiyon için kapalı tutun. - Fare kemirgen maskeyi aktarın. Anestezik akışı indüksiyon odasından maskeyi zaman fareyi hareket ettirerek geçmek emin olun.
- Anestezi onaylamak için bir ayak çimdik gerçekleştirin.
2. cerrahi Stereoscope altında yordamı ponksiyon
- Fare yan recumbency bulunduğu getirin. Yani fare göz stereoscope görüş alanı içinde mask iyi konumlandırılmış onaylayın.
- Yavaşça fare kafa göz stereoscope doğru bakıyor döndürmek.
Not: NET odak göz altında stereoscope elde edilmelidir. 40 X cerrahi işlem gerçekleştirmek için kullanılması gereken konumlandırma için 16 X büyütme, önerilir. Etik izni izin veriyorsa, bıyık ucu kırpma göz görselleştirme kolaylaştırabilir. - Küçük bağlama forseps kullanarak, dikkatle pups göz dorsal ve ventral göze göz kapakları aşağı doğru basınç uygulayarak çıkıntı.
- Pups göz kapağı, bir yumuşak ama sağlam tutun küçük Forseps ile tutun.
Not: Bu göz çıkıntı gerçekleştirmek ve sigara dominant eliyle tutarak dominant el ponksiyon yordamı gerçekleştirmelisiniz gibi kapak için tavsiye edilir. - Kornea limbus bulmak için stereoscope kullanın. Albino BALB/c limbus dairesel vasküler pleksus kornea için posterior kolayca belirlenebilir.
- 0,25 mm çap (30 G) eğimli iğne ile uvea posterior limbal sınırı yakınındaki küçük bir Üveal ponksiyon gerçekleştirin. Sadece iğne kullanmanızı ve yarısından fazlası eğimi (0.5 mm fotoğrafçılık eşdeğeri), delinme uvea. Eğer düzgün idam, Üveal delikler kendinden contalı henüz çalışma maddelerin göz içi enjeksiyon aynı yara yönetilemez duruma gelir.
Not: Eğer fare ile oküler anatomi deneyimli Üveal ponksiyon silier beden ve ora serrata arasında yürütülür. Üveal ponksiyon yaparken objektif rüptür uzak durmaya özen göstermelidir. - Gözün ilk ponksiyon sitesinden ters sitedeki ikinci Üveal ponksiyon gerçekleştirin. Mesafe ve delikler konumunu en iyi duruma getir; 12: 00 olarak dorsal olmak ile 12 ve 06: 00 delikler, göz önünde bulundurun.
- Üveal delikler yordamı her dört gün P24.5 kadar yineleyin. Her ardışık Üveal delik önce belirli objektif zarar nedeniyle travmatik katarakt varlığı Üveal ponksiyon veya açık azalmış oküler baskı sırasında dikkat hayvan durumunu izleyin. Önceki delikler için en iyi sonuç olarak aynı pozisyonlarda tekrar delikler yürütmek için nişan al.
3. noninvaziv Vivo içinde izleme
- Delik veya enjeksiyon deneysel her gün önce fare üzerinde gerçekleştirilen gibi anestezi.
- Yanal recumbency pozisyonda fare ile hafifçe göz çıkıntı.
- Iris damarlara ile cerrahi stereoscope odaklan.
- Iris damarlara cerrahi stereoscope donatılmış bir kamera ile fotoğrafını.
Not: gerekli değil rağmen mayoz inducing Iris alan hayvan başına normalize etmek yararlı olabilir. Etik izni mayoz indükleyici Ajan seçerken göz önünde bulundurun. Iris damarlara dikkatli odak daha fazla nicel analiz kolaylaştıracaktır. 40 X büyüklüğü önerilir.
4. ameliyat sonrası bakım
- Ve yavaşça bir cerrahi mat ile katmanlı bir Isıtma yastığı için transfer BALB/c yavru kemirgen maskeden çıkarın.
- Bir damla % 1 tetracaine çözüm delinmiş gözler için geçerlidir.
Not: Analjezik diğer çözümleri kullanılabilir, göre etik izin verir. - Steril normal tuzlu çözüm 200 µL Subkutan Enjeksiyon hayvanla hidrat.
- Yavru fok Hemşirelik Anne bir temiz fare kafes içinde dönün.
- Kurtarma işlemi izlemek. Yavru köpek-meli muktedir deambulate ve çöp için dönmek.
5. göz enükleasyon
- Hayvan tarafından servikal çıkığı ötenazi. Enükleasyon ve bir stereoscope altında diseksiyon yordamı daha iyi görselleştirme için gerçekleştirin.
Not: Farklı ötenazi yordamlar kullanılabilir. Bu kesinlikle uygun etik izni için önerilir. - Göz maruz geliştirmek için göz kapakları ayır.
- Küçük bir kesim (yaklaşık 0.5 cm) eğri Bonn göz makasla göz kapaklarının canthus olun.
- Maruz Perioküler alanı arkasında mikro bağlama forseps (altında) Dünya yörüngesinde eklemek için kullanın.
- Göz çevresindeki doku al ve yavaşça yukarı doğru çekin. Göz küresi üzerine tutarak önlemek, göz çukuru daha yakın çevre dokular kullanın.
- Eğri Bonn göz makas göz dünyanın arkasında yörüngede yerleştirin.
- Gözün yuvasından serbest bırakılıncaya kadar çevre dokular ile kesti.
Not: Bu diseksiyonu tekniği göz anatomisi korur ve daha sonraki analiz yararlanır. - Konu dışı doku kaldırılması için göz geçin. Konu dışı doku kaldırılması düzelttikten sonra tercih edilen yapılabilir.
Not: BALB/c fare melanin eksikliği, bu nedenle, kontrast, artırmak için olan koyu arka planda diseksiyon yordamı kolaylaştırmak için önerilir. - Kısaca durulama Petri kabına bütün göz steril fosfat tamponlu tuz ile (PBS) dolu.
- Göz 1,5 mL % 4 arabelleğe alınmış formalin çözeltisi içeren bir 2 mL tüp aktarın.
- 6 h için göz oda sıcaklığında düzeltmek.
Not: Doku sertlik confers sabitleme ve iris diseksiyon kolaylaştırır. Saat tamir olmalı test ve farklı uygulamalar için ayarlanabilir.
6. Iris diseksiyon yordamı Stereoscope altında
- Sabitleştirici çözümü 1,5 mL plastik Pasteur pipet ile (veya benzeri) tüpünden kaldırmak ve göz üç kez taze PBS ile durulayın.
- Sabit göz pürüzsüz bir kuru yüzey (diseksiyon stand) içinde ön odası ile yukarı bakacak şekilde yerleştirin.
- Eğimli bir 30 G iğne ile bir giriş noktası için limbus arka gerçekleştirin.
- Anterior segment küçük bağlama Forseps ile tutarak, bir ucu Clayman-kenasen düz makas önceden oluşturulmuş ataşını.
Not: Bu sigara dominant el ile forseps ve makas ile baskın kontrol etmek için tavsiye edilir. - Döndürme sırasında göz bağlama Forseps ile gözün arka segment kaldırmak için limbus kesin.
Not: kısmi kesim gerçekleştirme, doku ve büyük ölçüde devam etmek için makas iç ucu işlemini kolaylaştırır izin verir. - Aşağı doğru bakan, objektif ortaya ön parçasının getirin.
- Lens dikkatli bir şekilde küçük Forseps ile kapma ve yukarı doğru çekerek çıkarın.
Not: Eğimli bir iğne ponksiyon ve objektif çekmek için kullanılabilir. - Aşağı bakacak şekilde kornea ve görüş alanı için dikey kesim ile ön parçasının getirin.
- Yavaşça silier vücuda posterior doku küçük bağlama Forseps ile kapmak.
- Clayman-kenasen düz makasla vücut silier'Trabeküler meshwork kaldırmak ve iris yalıtmak için anterior kırpmaya devam edin. Trabeküler meshwork kaldırılmasını onaylamak; gözü kornea içinde hareket etmeliyiz.
- Dikkatli bir şekilde ön kadeh PBS 200 µL içeren bir 96-şey plakasına kornea tutan küçük bağlama Forseps ile aktarın.
- Kornea su kuyusunda tutarak devam edin ve bir pipet ile PBS ile temizlenerek iris incelemek.
Not: iris kalır yapışık kornea, Trabeküler bazı meshwork için hediye ve eğimi 30 G iğne olabilir eğer gözü yerinden yardımcı olmak için kullanılabilir. - Kornea küçük bağlama Forseps ile 96 kuyudan çıkarın ve daha fazla çözümleme için iyi izole Iris tutun.
- Serbest dalgalanma Iris örnekleri 4 ° C'de depolayın
Not: sabit varlık rağmen Iris serbest yüzer örnekleri uzun süreli depolama tavsiye edilmez.
7. olası deneysel okuma
- Disseke süsen kan damarlarının görselleştirmek için boyama yöntemleri işaretleri trombosit endotel hücre adezyon molekülü (PECAM) -1 gibi yüzen bütün Dağı immünhistokimya kullanın veya isolectin B4. Alternatif olarak, tüm vücut perfüzyon vasküler, floresan etiketli yüksek molekül ağırlıklı dextrans gibi boyama ile kullanın.
- Vivo noninvaziv resimler silico düz montaj yapmak ve tam Iris damarlara uygun görüntüleme yazılımlarıyla ölçmek için kullanın.
Not: Damarlara sayılabilir, in vivo ve in vitroDansitometresi kullanarak, veya damarlara analiz yazılım9. - Nükleik asitler ve protein çıkarma, delinmiş gözlerin moleküler analizi yapmak için PCR veya immunoblotting yöntemini tarafından takip için bütün göz küresi işlemek.
Not: Moleküler analiz dokuların en iyi sabit olmayan doku ile gerçekleştirilir ama sabit olmayan Iris diseksiyon son derece zordur ve tüm göz kullanımı istatistiksel olarak anlamlı sonuçlar önceki çalışmalar8' render.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Albino BALB/c fare pups P12.5, dördüncü hergün tekrarlanan Üveal delikler için tabi (deneysel gün 0, 4, 8, 12), P24.5 kadar. P27.5, fareler euthanized ve irisler dikkatle (deneysel gün 15) disseke. Fotoğraf fare göz iris vasküler yanıt noninvaziv değerlendirme değerlendirmek için her ponksiyon serisi deneysel her gün önce cerrahi stereoscope bağlı bir kamera ile çekildi. Üveal delikler iris vasküler yanıt sistemi (şekil 1) şifa yara tetikleyen tarafından ikna etmek. Saydam kornea ve melanin eksikliği BALB/c fare nedeniyle artan Iris damarlara deneysel günden 4 (P16.5) kolayca görülebilir ve protokolün süresi boyunca yoğunlaşıyor. PECAM-1 görüntülerde immünhistokimya genel damarlara süsen delinmiş göz kontrollere (Şekil 2) göre artış gösterir.
Şekil 1: noninvaziv ponksiyon kaynaklı Iris anjiogenezi izleme. Gün 0, 4, 8, 12 ve 15 delinmiş gözleri ve Denetim Temsilcisi görüntüleri. Iris vasküler yanıt 4 günden itibaren delinmiş gözünde belirgindir. Ölçek çubuğu 1 mm. = Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 2: delik kaynaklı gözünde Iris vasküler yanıt. PECAM-1 gün 15 süsen, boyama açıklayıcı görüntüleri tam ekran görüntülenir ve denetiminden (kare), alanı büyütülmüş ve gözleri delmiş. Ölçek çubuğu = 400 µm (üst); 200 µm (altta). Vasküler delinmiş süsen dallarında artış dikkat edin. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Mevcut iletişim kuralında, indüksiyon Üveal ponksiyon tarafından Iris vasküler tepki için yeni bir yöntem sunulur. Ponksiyon yara iyileşme mekanizmalarını tetikler ve vasküler Iris10,11yanıt-e doğru teşvik etmektedir. Gibi PDR ve nerede retina göz posterior segmentte yanıtlarını yaygınlaşacak anjiogenik rubeosis iridis, İris12 artan bir vaskülarizasyon klinik durumda sonuçlanacak NVG, oküler patolojiler anlaşarak bu ,13.
Kornea avasküler ve şeffaflık kaynaklanan kendine özgü kolajen yapısı sahiptir. Buna paralel olarak, gözün iris damarlara görselleştirme için ön segment anjiyografi Iris kan damarlarının vivo içinde noninvaziv yöntemler13,14ile doğrudan görselleştirme tarafından ulaşılabilir olduğunu. Iris neovaskülarizasyon önceki hayvan modelleri karmaşık cerrahi müdahaleler gerçekleştirilen15,16,17, neredeydin büyük gözlü hayvanlar üzerinde veya belirli anjiogenik maddelerin göz içi enjeksiyonla dayanıyordu 18 , 19. Bu yöntemde, pigment eksik BALB/c fare kullanımı Iris damarlara vivo içindedoğrudan gözlem tanır ve böylece eğitim için yeni bir araç sağlayan farelerde, Iris neovaskülarizasyon noninvaziv miktar sağlar içinde vivo angiogenez.
Ayrıca, fare Iris diseksiyon için sunulan yöntem damar belirli işaretleri ile delik kaynaklı Iris neovaskülarizasyon analiz sağlar. Burada, damarları illustratively PECAM-1 antikorlar ile lekeli ve floresan mikroskopi tarafından görüntülenmiştir Iris. Serbest dalgalanma, Bütün-mount immunostaining kurallarıdır kolayca elde ve oldukça sıradan. Buna ek olarak, perfüzyon yöntemleri kan damarları için bu modelde gerçekleştirilebilir. Vasküler belirli boyama Iris damar yapısı ve böylece miktar, kullanıcı tabanlı tarafından değerlendirilmesi veya yazılım analizi, Iris neovasculature9verir. Yukarıda açıklanan8,20, Iris neovasculature, çizim gün 15 sonrası-puncture-indüksiyon değerlendirildi. Yine de, Iris vaskülarizasyon üzerindeki etkileri 4 gün sonrası-puncture-delik kaynaklı Iris neovaskülarizasyon modeli değerlendirilmesi üzerinde özel dayalı farklı zaman noktalarda yürütülen olduğunu düşündüren indüksiyon, gibi erken görülebilir deneysel gereksinimleri.
Bu özellikle diğer hayvan modeli göre fareler gözleri boyutu ile ilgili bazı sorunlar bu protokolü sunar durumuna dikkat çekicidir. Aşırı objektif dokunuşlar önlemek veya göze zarar Üveal ponksiyon yordamı, yürütülürken özen gösterilmelidir. Oküler koşulu gözlenmesi paramount ve hayvanlar ile ilgili deneysel katarakt görüntüleme veya oküler basıncında düşüş hariç ve uygun şekilde euthanized. Fare süsen son derece kırılgan ve biraz yapışkan. Uygun diseksiyon ve yalıtım doku iletişim kuralı için bir kritik adım sunar. Trabeküler meshwork doğru bir ayrılık ön odasından gözü yerinden için gereklidir. Ayrıca, kırılganlık nedeniyle, aşağı akım moleküler analiz bozar doku fiksasyon Iris yalıtımı gerektirir. Yine de, bir moleküler analiz sabitlenmemiş bütün göz sunulan yöntem8' e başarıyla uygulandı.
Özet olarak, açıklanan protokol bir roman ponksiyon kaynaklı Iris neovaskülarizasyon fare modeli sunar. Bu model içinde vivo noninvaziv doğrudan görselleştirme angiogenez izin vermenin avantajına sahiptir. Büyük gözlü hayvan kullanımını önler ve etik kısıtlama eşliğinde gibi Ayrıca, küçük kemirgen kullanımı sunulan modeli rubeosis iridis, çalışmaları için cazip işler. Ayrıca, yordamı kullanışlılığı vivo içinde angiogenez yeni bir model olarak artırılması kendinden contalı ponksiyon yoluyla pro veya anti-anjiogenik maddelerin enjeksiyonu ile kombine edilebilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar ifşa gerek yok.
Acknowledgments
Yazarlar Linnea Tankred ve Diana Rydholm hayvancılık için teşekkür ederiz.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Bonn eye scissors | Bausch & Lomb | 23060 | |
| Clayman-Vannas curved scissors | Bausch & Lomb | E3383 C | |
| Clayman-Vannas straight scissors | Bausch & Lomb | E3383 S | |
| Objective adapter for camera | Handcrafted | N/A | Or any system that allows adapting a camera to the microscope |
| Heating Pad 100-110 watts | Non Applicable | N/A | Available in pet/veterinarian stores |
| Hypodermic 30g beveled needle | KDM GmBH germany | 911914 | |
| Iphone 4S | Apple | Non Applicable | Or other high resolution image acquistion device |
| Isoflurane | Baxter | KDG 9623 | |
| McPherson tying forceps | Bausch & Lomb | E1815 S | |
| Micro tying forceps | Bausch & Lomb | 63140 | |
| Minims tetracaine hydrochloride | Bausch & Lomb | N/A | 1 % (w/v) Eye Drops |
| Neutral-buffered formalin | Bioreagens | 0018-40 | |
| Normal saline solution | Fresenius Kabi | 210352 | 0.9 % (w/v) NaCl in injectable water |
| Phosphate-buffered saline | ThermoFisher Scientific | 10010023 | Balanced and buffered PBS pH 7.4 |
| Petri dish 10 cm | Starstedt | 83.3902 | |
| Petri dish 3 cm | Starstedt | 83.3900 | |
| Safe Seal Tube 2.0 mL | Starstedt | 72.685.200 | Or any eppendorf style tubes |
| TC plate 96-well | Starstedt | 83.3924 | |
| Transfer pipette 3.5 mL | Starstedt | 86.1171 | Or any other Pasteur pipette style |
| Univentor 400 anesthesia unit | Univentor Limited | N/A | Or equivalent flow regulator with induction chamber and mask for volatile anesthesia |
| Wild M650 surgical microscope | Wild Heerbrugg | N/A | Or other surgical or magnifying stereoscope |
References
- Morrison, J. C., Van Buskirk, E. M. Anterior collateral circulation in the primate eye. Ophthalmology. 90 (6), 707-715 (1983).
- Dreyfuss, J. L., Giordano, R. J., Regatieri, C. V. Ocular Angiogenesis. J Ophthalmol. 2015, 892043 (2015).
- Breuss, J. M., Uhrin, P. VEGF-initiated angiogenesis and the uPA/uPAR system. Cell Adh Migr. 6 (6), 535-615 (2012).
- Rodrigues, G. B., et al.
- Stahl, A., et al. The mouse retina as an angiogenesis model. Invest Ophth Vis Sci. 51 (6), 2813-2826 (2010).
- DiPietro, L. A. Angiogenesis and wound repair: when enough is enough. J Leukocy Biol. 100 (5), 979-984 (2016).
- Eming, S., Brachvogel, B., Odorisio, T., Koch, M. Regulation of angiogenesis: Wound healing as a model. Prog Histochem Cytoc. 42 (3), 115-170 (2007).
- Beaujean, O., Locri, F., Aronsson, M., Kvanta, A., André, H. A novel in vivo model of puncture-induced iris neovascularization. PloS One. 12 (6), e0180235 (2017).
- Zudaire, E., Gambardella, L., Kurcz, C., Vermeren, S. A Computational Tool for Quantitative Analysis of Vascular Networks. PloS One. 6 (11), (2011).
- Dorrell, M., Uusitalo-Jarvinen, H., Aguilar, E., Friedlander, M. Ocular neovascularization: basic mechanisms and therapeutic advances. Surv Ophthalmol. 52 Suppl 1, S3-S19 (2007).
- Kvanta, A. Ocular angiogenesis: the role of growth factors. Acta Ophthalmol. 84 (3), 282-288 (2006).
- Salman, A. G. Intrasilicone Bevacizumab Injection for Iris Neovascularization after Vitrectomy for Proliferative Diabetic Retinopathy. Ophthalmic Res. 49 (1), 20-24 (2013).
- Jeong, Y. C., Hwang, Y. H. Etiology and Features of Eyes with Rubeosis Iridis among Korean Patients: A Population-Based Single Center Study. PloS One. 11 (8), e0160662 (2016).
- Speier, S., Nyqvist, D., Köhler, M., Caicedo, A., Leibiger, I. B., Berggren, P. -O. Noninvasive high-resolution in vivo imaging of cell biology in the anterior chamber of the mouse eye. Nat Protoc. 3 (8), 1278-1286 (2008).
- Stefansson, E., Landers, M. B., Wolbarsht, M. L., Klintworth, G. K. Neovascularization of the Iris - an Experimental-Model in Cats. Invest Ophth Vis Sci. 25 (3), 361-364 (1984).
- Nork, T. M., Tso, M., Duvall, J., Hayreh, S. S. Cellular Mechanisms of Iris Neovascularization Secondary to Retinal Vein Occlusion. Arch Ophthalmol-Chic. 107 (4), 581-586 (1989).
- Hjelmeland, L. M., Stewart, M. W., Li, J. W., Toth, C. A., Burns, M. S., Landers, M. B. An Experimental-Model of Ectropion Uveae and Iris Neovascularization in the Cat. Invest Ophth Vis Sci. 33 (5), 1796-1803 (1992).
- Tolentino, M. J., Miller, J. W., Gragoudas, E. S., Chatzistefanou, K., Ferrara, N., Adamis, A. P. Vascular endothelial growth factor is sufficient to produce iris neovascularization and neovascular glaucoma in a nonhuman primate. Arch Ophthalmol-Chic. 114 (8), 964-970 (1996).
- Paula, J. S., et al. Rabbit Rubeosis Iridis Induced by Intravitreal Latex-derived Angiogenic Fraction. Curr Eye Res. 36 (9), 857-859 (2011).
- Takei, A., Ekström, M., et al. Gene Transfer of Prolyl Hydroxylase Domain 2 Inhibits Hypoxia-inducible Angiogenesis in a Model of Choroidal Neovascularization. Sci Rep. 7, 42546 (2017).
