Summary
Dette papiret introduserer en metode for klekking uten å bruke et eggeskall for toksikologiske studier av partikkelforurensende stoffer som mikroplast.
Abstract
Mikroplast er en fremvoksende global miljøgifttype som utgjør en stor helsetrussel mot dyr på grunn av deres opptak og translokasjon i dyrevev og organer. Økotoksikologiske effekter av mikroplast på utvikling av fugleembryoer er ikke kjent. Fugleegget er et komplett utviklings- og ernæringssystem, og hele embryoutviklingen skjer i eggeskallet. Derfor er en direkte oversikt over fugleembryoutvikling under stress av miljøgifter som mikroplast svært begrenset av det ugjennomsiktige eggeskallet i tradisjonell klekking. I denne studien ble effekten av mikroplast på vaktel embryoutvikling visuelt overvåket ved klekking uten eggeskall. Hovedtrinnene inkluderer rengjøring og desinfeksjon av befruktede egg, inkubasjon før eksponering, kortsiktig inkubasjon etter eksponering og prøveutvinning. Resultatene viser at sammenlignet med kontrollgruppen viste den våte vekten og kroppslengden til den mikroplasteksponerte gruppen en statistisk forskjell og leverandelen til hele den eksponerte gruppen økte betydelig. I tillegg evaluerte vi eksterne faktorer som påvirker inkubasjonen: temperatur, fuktighet, eggrotasjonsvinkel og andre forhold. Denne eksperimentelle metoden gir verdifull informasjon om mikroplastens økotoksikologi og en ny måte å studere de negative effektene av miljøgifter på utviklingen av embryoer.
Introduction
Produksjonen av plastavfall var om lag 6300 tonn i 2015, hvorav en tiendedel ble resirkulert, og resten ble brent eller begravet under jorden. Det er anslått at rundt 12.000 tonn plastavfall vil bli begravet under jorden innen 20501. Med det internasjonale samfunnets oppmerksomhet på plastavfall foreslo Thompson først begrepet mikroplast i 20042. Mikroplast (MPs) refererer til liten partikkelplast med en partikkeldiameter mindre enn 5 mm. For tiden har forskere oppdaget den allestedsnærværende tilstedeværelsen av MPs i kysten av ulike kontinenter, Atlanterhavsøyene, innlandsvann, Arktis og dyphavshabitater3,4,5,6,7. Derfor har flere forskere begynt å studere miljøfarene til parlamentsmedlemmene.
Organismer kan innta MPs i miljøet. MPs ble funnet i fordøyelseskanalen til 233 marine organismer over hele verden (inkludert 100% skilpaddearter, 36% selarter, 59% hvalarter, 59% sjøfuglarter, 92 typer sjøfisk og 6 typer hvirvelløse dyr)8. Videre kan MPs blokkere organismenes fordøyelsessystem, akkumulere og migrere i bobies9. Det har blitt funnet at MPs kan overføres via næringskjeden, og inntaket er forskjellig med endringer i habitat, vekststadium, fôringsvaner og matkilder10. Noen forskere rapporterte eksistensen av parlamentsmedlemmer i fallet av sjøfugl11, noe som betyr at sjøfugl fungerer som bærer av MPs. I tillegg kan inntak av MPs påvirke helsen til noen organismer. For eksempel kan MPs viklet inn i mage-tarmkanalen, og dermed øke dødeligheten av hvaler12.
MPs alene har toksiske effekter på organismer samt felles toksiske effekter på organismer med andre miljøgifter. Inntak av miljørelaterte konsentrasjoner av plastrester kan forstyrre endokrine systemfunksjonen til voksenfisk13. Størrelsen på mikroplast er en av de viktige faktorene som påvirker deres opptak og akkumulering av organismer14,15. Den lille plasten, spesielt nanosize plast, er utsatt for interaksjon med celler og organismer med høy toksisitet16,17,18,19. Selv om de skadelige effektene av mikroplast i nanopartikkelstørrelse på organismer overstiger dagens forskningsnivå, er deteksjon og kvantifisering av mikroplast med størrelser mindre enn flere mikrometer, spesielt submikronen/nanoplasten i miljøet, fortsatt en stor utfordring. I tillegg har nanoplast også noen effekter på embryoer. Polystyren kan skade utviklingen av kråkebolle embryoer ved å regulere protein- og genprofiler20.
For å undersøke den potensielle effekten av MPs på organismer, gjennomførte vi denne studien. På grunn av likheten mellom fugleembryoer og menneskelige embryoer, brukes de vanligvis i utviklingsbiologiforskning21, inkludert angiogenese og antiangiogenese, vevsteknikk, biomaterialeimplantat og hjernesvulster22,23,24. Fugleembryoer har fordelene med lav pris, en kort kultursyklus og enkel betjening25,26. Derfor valgte vi vakteleggsembryoer med en kort vekstsyklus som det eksperimentelle dyret i denne studien. Samtidig kan vi direkte observere de morfologiske endringene av vaktelegg embryoer utsatt for MPs under embryonal utviklingsstadiet ved hjelp av en eggeskallfri klekketeknologi. De eksperimentelle materialene som ble brukt var polypropylen (PP) og polystyren (PS). Fordi PP og PS27 står for den største andelen polymertyper oppnådd i sedimenter og vannlegemer over hele verden, er de vanligste polymertypene som ekstraheres fra fangede marine organismer etylen og propylen28. Denne eksperimentelle protokollen beskriver hele prosessen for visuell evaluering av toksikologiske effekter av MPs på vaktelegg embryoer utsatt for MPs. Vi kan enkelt utvide denne metoden for å undersøke andre miljøgifters toksisitet for embryoutvikling av andre oviparous dyr.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Forberedelse før eksponering
- Velg befruktede vaktelegg født på samme dag for eksponeringstesten.
- Velg vaktelegg med lignende vekter. Hvert befruktet vaktelegg er ca 10-12 g.
- Rengjør alle befruktede vaktelegg helt fra ytre avføring og annet rusk.
- Steriliser hvert ferdigklekkede befruktede vaktelegg og eggene som skal brukes (Velg egg med lignende skallform, spesielt eggspissen) med en antibiotikaløsning (penicillin og streptomycin, 1:1000, romtemperatur). Steriliser inkubatoren med 75% etanol.
- Åpne eggene med den stumpe enden av en tannbor, og la eggeskallet stå på spissen for videre bruk. Før du overfører de befruktede eggene, helles innholdet i eggene ut. Dette er for å holde fuktigheten i eggeskallet. Eggets åpningsdiameter var ca. 3 cm.
MERK: For å redusere skaden på vaktelfyoet, bruk en tannbor for å åpne den stumpe enden av egget og gjøre sprekken så jevn som mulig. - Etter sterilisering, plasser de befruktede vakteleggene i en 38 ° C inkubator med 60% fuktighet i 24-48 timer. Pass på at den stumpe enden av vaktelegget vender opp.
- Under inkubasjon av befruktede vaktelegg steriliser verktøyene som trengs i de etterfølgende forsøkene i en steriliseringskanne. Disse verktøyene inkluderer plastfolie, et beger, sterilt vann, pipettespisser, kirurgisk rett saks, pinsett og en skje.
MERK: Bruk en film med en temperaturtoleranse som er høy nok til å unngå problemer med steriliseringen ved høye temperaturer.
2. Klekking av vaktelegg uten skall
- Overfør de ferdigklekkede befruktede vakteleggene fra inkubatoren til en ren benk og legg dem flatt på beholderen for å stabilisere dem i ca 1-2 min.
- Bruk saks (12,5 cm kirurgisk rett saks) for å stikke et lite hull (diameter 3 mm) i den sentrale aksen til de forhåndslukte befruktede vakteleggene og for å kutte 1-2 cm liten åpning. Overfør forsiktig eggehvite og eggeplomme av de befruktede vakteleggene til det kuttede eggeskallet.
MERK: Når du kutter en liten åpning med saks, unngå å berøre eggeplommen av vaktelegg. - Tilsett kontrollløsningen (uten MPs) og den eksponerte løsningen av forskjellige masser (0,1, 0,2 og 0,3 mg) mikroplast med tre partikkelstørrelser (100, 200 og 500 nm) til egginnholdet ved pipette. Samtidig tilsettes 1 dråpe penicillin og 1 dråpe streptomycin med en 1 ml sprøyte.
- Dekk åpningen av eggeskallet med den steriliserte filmen (trinn 1.6).
- Ifølge trinn 2.1-2.4, behandle alle befruktede vaktelegg.
- Plasser de overførte vakteleggsembryoene i inkubatoren på 38 °C med 60 % fuktighet i den nødvendige perioden. I dette eksperimentet, bruk en eggrotasjonsvinkel på ±30°. Snu eggene en gang i timen.
MERK: Overføringen skal være så rask som mulig, noe som krever mer øvelse på det tidlige stadiet.
3. Eksempelsamling
- Etter syv dager med kultur, fjern velutviklede embryoer observert av det blotte øye fra eggeplommen og vask med fosfatbufret løsning (PBS).
- Tørk overskuddsløsningen utenfor det rensede embryoet med absorberende papir og vei i en ren Petri-tallerken.
- Åpne hele brysthulen, skill leveren og hjertet fra viscera med nåle-nese tang, og plasser i 1,5 ml sentrifugerør umiddelbart etter rydding.
- Registrer raskt vekten på en elektronisk balanse og beregn den hepatosomatiske indeksen (HIS = levervekt / kroppsvekt x 100). Mål lengden på brystbenet og kroppen.
- Basert på de ovennevnte indikatorene, vurdere effekten av MPs på embryonal utvikling.
MERK: Embryokvalitet her refererer til kvaliteten på eggeplommefjerning.
4. Dataanalyse
- Rapporter eksperimentelle data i form av gjennomsnittlig ± standardfeil (SEM).
- Bruk enfaktoranalyse av varians til å sammenligne gjennomsnittet for flere grupper med utvalg. Den signifikante differanseverdien ble α = 0,05.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
For analyse av eksperimentelle data sammenlignet vi våtvekt, kroppslengde, brystlengde og endring av hepatosomatisk indeks mellom kontrollgruppen og de 6 eksperimentelle gruppene, og målte og reflekterte vaktelembryoenes vekst og utvikling fra et makroperspektiv. Vi oppdaget seks normale vaktelembryoer i hver gruppe. Hvert embryo nådde ønsket Hamburger og Hamilton (HH) stadium.
I figur 1overførte vi det forhåndsutviklede befruktede vaktelegginnholdet i de halvkuleformede eggeskallene og la dem i inkubatoren. Deretter registrerte vi utviklingen av embryoer i midten av inkubasjonsperioden i tre dager. Som vist i figur 2er A-A2 kontrollgruppen, og B-B2 er én behandlingsgruppe. Fra perspektivet av makroskopisk embryoutvikling utviklet embryoene seg normalt uten de negative effektene av mikroplast.
Tabell 1 og tabell 2 er gjennomsnittet ± SEM av våt vekt, kroppslengde og brystbenslengde på vaktelembryo etter en ukes eksponering. Tabellene viser at våtvekten og kroppslengden endres betydelig i ulike eksponeringsgrupper. Vekten og kroppslengden til gruppene som ble behandlet med 0,1 mg, 0,3 mg, 100 nm og 500 nm MPs gikk litt ned. Kroppsvekten og kroppslengden på 0,2 mg mikroplastbehandlede grupper på 200 nm økte noe (P < 0,05).
Hepatosomatisk indeks (HIS) viser andelen lever i vaktelagt embryo, noe som er et viktig tegn for å bedømme graden av leverutvikling. Videre spiller HSI en viktig rolle i patogenesen av levercellemembranskade og inflammatorisk infiltrasjon. Som vist i figur 3 og figur 4, sammenlignet med kontrollgruppen, økte andelen lever i hele behandlingsgruppen betydelig etter eksponering for mikroplast. Det var imidlertid ingen signifikant forskjell mellom behandlingsgruppene 0,2 mg og 0,3 mg på 100 nm MPs og kontrollgruppen.
Figur 1: Klekke vaktelegg uten skall. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 2: Embryoutviklingen av vaktel den sjette, sjuende og åtteende dagen i midtfasen av klekking uten eggeskall. Den grønne pilen peker mot øynene; den blå pilen peker mot lemmer. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 3: Hepatosomatisk indeks over vaktelfyoer etter eksponering for MPs (nm) i 7 dager. Signifikante forskjeller mellom kontroll- og behandlingsgrupper er indikert med * P < 0,05. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 4: Hepatosomatisk indeks over vaktelfyoer etter eksponering for MPs (μm) i 7 dager. Signifikante forskjeller mellom kontroll- og behandlingsgrupper er indikert med * P < 0,05. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
| MPs behandling | Vekt (g) | Lengde (cm) | Sternum lengde |
| Kontroll | 2.509±0.324 | 5.425±0.477 | 1.025±0.094 |
| 100 nm | 1.812±0.155* | 4.632±0.315* | 0.950±0.152 |
| 200 nm | 2.272±0.368 | 5.297±0.268 | 1.025±0.076 |
| 500 nm | 1.785±0.127* | 4.892±0.154* | 1.017±0.082 |
Tabell 1: Våtvekt, kroppslengde og brystlengde på vaktelembryoer etter eksponering for MPs (nm) i 7 dager
| Behandling | Vekt (g) | Lengde (cm) | Sternum lengde |
| Kontroll | 2.161±0.166 | 5.23±0.26 | 1.10±0.04 |
| 0,1 mg | 1.960±0.338* | 4.82±0.75* | 1.04±0.04 |
| 0,2 mg | 2.410±0.366* | 5.25±0.26 | 1.07±0.10 |
| 0,3 mg | 1.901±0.759 | 4.95±0.15* | 1.02±0.09 |
Tabell 2: Våtvekt, kroppslengde og brystlengde på vaktelembryoer etter eksponering for MPs (μm) i 7 dager. Sammenlignet med kontrollgruppen indikerer * at P < 0,05, ** indikerer P < 0,01.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Dette dokumentet gir en effektiv eksperimentell ordning for å evaluere vaktel embryoutvikling ved å oppdage de grunnleggende utviklingsindeksene. Imidlertid er det fortsatt noen begrensninger i dette eksperimentet.
For det første er dødeligheten av vaktelembryoer i det senere stadiet av klekking høyere på grunn av den skallfrie klekkingen. Det er kunstig ukontrollerbare faktorer som ødeleggelse av normalt proteinforhold i eksperimentell prosess. Vi begrenset eksponeringstiden for embryoer for å sikre nøyaktigheten av eksperimentet. Forskningen på embryotoksisitet kan bare forekomme i de tidlige og midtre stadiene av embryoutvikling. For det andre skjer studien av MPs på vaktel embryoutvikling bare på det grunnleggende morfologiske analysenivået. Dermed er konklusjonene relativt enkle og feil kan eksistere. Samtidig er kravene til eksperimentelle forhold og drift relativt høye i prosessen med dette eksperimentet. Derfor er noen bemerkelsesverdige poeng oppført som følger:
Det er svært viktig å desinfisere og sterilisere befruktede vaktelegg i det forberedende arbeidet på grunn av de skadelige patogene mikroorganismer på overflaten av befruktede vaktelegg. Hvis desinfisert, kan mikroberene trenge inn i de befruktede vakteleggene under inkubasjon, noe som resulterer i vaktelembryoenes død. Selv om overføringen er vellykket, vil dødsraten være høyere. Derfor bør en god jobb gjøres i desinfeksjon og sterilisering for å redusere eksperimentell dødelighet.
Når fugler klekker egg, endrer de ofte eggets posisjon og holder luftsirkulasjonen for å opprettholde en konstant temperatur for eggene og riktig posisjon for fosteret. Dette eksperimentet brukte film for å forsegle eggeskallet. Hvis vinkelen på eggrotasjon er for stor, vil eggehviten strømme ut. Hvis den er for liten, kan det oppstå vedheft mellom embryofilmen og eggeskallfilmen, noe som resulterer i døde embryoer. Angi derfor rotasjonsvinkelen i henhold til den faktiske situasjonen.
Under overføring av vaktelegg plasseres de prebefruktede vakteleggene horisontalt og kuttes deretter midt i eggeskallet. På denne måten strømmer en liten del av egghvite lett ut, noe som ødelegger den normale andelen og fordelingen av den tykke og tynne eggehviten. Dette gjør eggeplommen, som burde ha vært på toppen, lener seg til den ene siden, noe som får embryoet til å dø. Pass derfor på å gjøre all egghvitestrømmen inn i det nye halvkuleformede eggeskallet for å sikre normal andel og fordeling under overføring.
Etter vellykket overføring må eksperimentet være forsiktig så du ikke slipper væsken direkte. Væsken skal stole på eggeskallveggen for å få den til å strømme sakte under tilsetning av miljøgifter og antibiotika.
I tillegg til de fire punktene nevnt ovenfor, kontroller inkubasjonsforholdene strengt. Koordiner balansen mellom temperatur, fuktighet og ventilasjon. Hold inkubasjonslaboratoriet stille og mørkt for å oppnå det beste inkubasjonsmiljøet.
Til slutt gir dette eksperimentet en grunnleggende protokoll for å studere effekten av miljøgifter på utviklingen av vaktelegg. Det finnes også andre typer indikatorer i studiet av embryonal vekst og utvikling, inkludert vaskulær utvikling, oksidativt stress og celleskade. Ovennevnte eksperiment er bare en enkel makroskopisk evaluering av embryonal utvikling fra det morfologiske aspektet. Endelig kan den forbedrede forskningsideen og protokollen i fremtiden gi en ny metode for toksikologiske studier av embryovekst og utvikling.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ingenting å avsløre. Alle forfattere erklærer at de ikke har noen kjente konkurrerende økonomiske interesser eller personlige forhold som kunne ha sett ut til å påvirke arbeidet til denne artikkelen.
Acknowledgments
Dette arbeidet ble støttet av Sentrale forsknings- og utviklingsprosjekter i Xinjiang Uygur autonome region (2017B03014, 2017B03014-1, 2017B03014-2, 2017B03014-3).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Multi sample tissue grinder | Shanghai Jingxin Industrial Development Co., Ltd. | Tissuelyser-24 | Grind large-sized plastics into small-sized ones at low temperature |
| Electronic balance | OHAUS corporation | PR Series Precision | Used for weighing |
| Fertilized quail eggs | Guangzhou Cangmu Agricultural Development Co., Ltd. | Quail eggs for hatching without shell | |
| Fluorescent polypropylene particles | Foshan Juliang Optical Material Co., Ltd. | Types of plastics selected for the experiment | |
| Incubator | Shandong, Bangda Incubation Equipment Co., Ltd. | 264 pc | Provide a place for embryo growth and development |
| Nanometer-scale polystyrene microspheres | Xi’an Ruixi Biological Technology Co., Ltd. | 100 nm, 200 nm, 500 nm | Types of plastics selected for the experiment |
| Steel ruler | Deli Group | 20 cm | Used to measure length |
| Vertical heating pressure steam sterilizer | Shanghai Shenan Medical Instrument Factory | LDZM-80KCS-II | Sterilize the experimental articles |
References
- Geyer, R., Jambeck, J. R., Law, K. L. Production, use, and fate of all plastics ever made. Science Advances. 3 (7), 5 (2017).
- Thompson, R. C., et al. Lost at sea: Where is all the plastic. Science. 304 (5672), 838-838 (2004).
- Barletta, M., Lima, A. R. A., Costa, M. F. Distribution, sources and consequences of nutrients, persistent organic pollutants, metals and microplastics in South American estuaries. Science of the Total Environment. 651, 1199-1218 (2019).
- Eriksson, C., Burton, H., Fitch, S., Schulz, M., vanden Hoff, J. Daily accumulation rates of marine debris on sub-Antarctic island beaches. Marine Pollution Bulletin. 66 (1-2), 199-208 (2013).
- Zhang, C. F., et al. Microplastics in offshore sediment in the Yellow Sea and East China Sea, China. Environmental Pollution. 244, 827-833 (2019).
- Obbard, R. W., et al. Global warming releases microplastic legacy frozen in Arctic Sea ice. Earths Future. 2 (6), 315-320 (2014).
- Van Cauwenberghe, L., Vanreusel, A., Mees, J., Janssen, C. R.
- Wilcox, C., Van Sebille, E., Hardesty, B. D. Threat of plastic pollution to seabirds is global, pervasive, and increasing. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (38), 11899-11904 (2015).
- Wright, S. L., Thompson, R. C., Galloway, T. S. The physical impacts of microplastics on marine organisms: A review. Environmental Pollution. 178, 483-492 (2013).
- Ferreira, G. V. B., Barletta, M., Lima, A. R. A. Use of estuarine resources by top predator fishes. How do ecological patterns affect rates of contamination by microplastics. Science of the Total Environment. 655, 292-304 (2019).
- Provencher, J. F., Vermaire, J. C., Avery-Gomm, S., Braune, B. M., Mallory, M. L. Garbage in guano? Microplastic debris found in faecal precursors of seabirds known to ingest plastics. Science of the Total Environment. 644, 1477-1484 (2018).
- Baulch, S., Perry, C. Evaluating the impacts of marine debris on cetaceans. Marine Pollution Bulletin. 80 (1-2), 210-221 (2014).
- Rochman, C. M., Kurobe, T., Flores, I., Teh, S. J. Early warning signs of endocrine disruption in adult fish from the ingestion of polyethylene with and without sorbed chemical pollutants from the marine environment. Science of the Total Environment. 493, 656-661 (2014).
- Mattsson, K., et al. Brain damage and behavioural disorders in fish induced by plastic nanoparticles delivered through the food chain. Scientific Reports. 7, 7 (2017).
- Brown, D. M., Wilson, M. R., MacNee, W., Stone, V., Donaldson, K. Size-dependent proinflammatory effects of ultrafine polystyrene particles: A role for surface area and oxidative stress in the enhanced activity of ultrafines. Toxicology and Applied Pharmacology. 175 (3), 191-199 (2001).
- Salvati, A., et al. Experimental and theoretical comparison of intracellular import of polymeric nanoparticles and small molecules: toward models of uptake kinetics. Nanomedicine-Nanotechnology Biology and Medicine. 7 (6), 818-826 (2011).
- Frohlich, E., et al. Action of polystyrene nanoparticles of different sizes on lysosomal function and integrity. Particle and Fibre Toxicology. 9, 13 (2012).
- Bexiga, M. G., Kelly, C., Dawson, K. A., Simpson, J. C. RNAi-mediated inhibition of apoptosis fails to prevent cationic nanoparticle-induced cell death in cultured cells. Nanomedicine. 9 (11), 1651-1664 (2014).
- Lehner, R., Weder, C., Petri-Fink, A., Rothen-Rutishauser, B. Emergence of Nanoplastic in the Environment and Possible Impact on Human Health. Environmental Science, Technology. 53 (4), 1748-1765 (2019).
- Pinsino, A., et al. Amino-modified polystyrene nanoparticles affect signalling pathways of the sea urchin (Paracentrotus lividus) embryos. Nanotoxicology. 11 (2), 201-209 (2017).
- El-Ghali, N., Rabadi, M., Ezin, A. M., De Bellard, M. E. New Methods for Chicken Embryo Manipulations. Microscopy Research and Technique. 73 (1), 58-66 (2010).
- Rashidi, H., Sottile, V. The chick embryo: hatching a model for contemporary biomedical research. Bioessays. 31 (4), 459-465 (2009).
- Faez, T., Skachkov, I., Versluis, M., Kooiman, K., de Jong, N. In vivo characterization of ultrasound contrast agents: microbubble spectroscopy in a chicken embryo. Ultrasound in Medicine and Biology. 38 (9), 1608-1617 (2012).
- Yamamoto, F. Y., Neto, F. F., Freitas, P. F., Ribeiro, C. A. O., Ortolani-Machado, C. F. Cadmium effects on early development of chick embryos. Environmental Toxicology and Pharmacology. 34 (2), 548-555 (2012).
- Li, X. D., et al. Caffeine interferes embryonic development through over-stimulating serotonergic system in chicken embryo. Food and Chemical Toxicology. 50 (6), 1848-1853 (2012).
- Lokman, N. A., Elder, A. S. F., Ricciardelli, C., Oehler, M. K. Chick Chorioallantoic Membrane (CAM) Assay as an In Vivo Model to Study the Effect of Newly Identified Molecules on Ovarian Cancer Invasion and Metastasis. International Journal of Molecular Sciences. 13 (8), 9959-9970 (2012).
- Burns, E. E., Boxall, A. B. A. Microplastics in the aquatic environment: Evidence for or against adverse impacts and major knowledge gaps. Environmental Toxicology and Chemistry. 37 (11), 2776-2796 (2018).
- Alejo-Plata, M. D., Herrera-Galindo, E., Cruz-Gonzalez, D. G. Description of buoyant fibers adhering to Argonauta nouryi (Cephalopoda: Argonautidae) collected from the stomach contents of three top predators in the Mexican South Pacific. Marine Pollution Bulletin. 142, 504-509 (2019).
