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Biology

परजीवी गैनास्पिस ब्रासीलिएंसिस को पालने के तरीके, आक्रामक ड्रोसोफिला सुजुकी के लिए एक आशाजनक जैविक नियंत्रण एजेंट

Published: June 2, 2022 doi: 10.3791/63898
Automatic Translation
1, 2, 2, 1,3, 4, 5, 4, 6, 1,3, 2
1Research and Innovation Centre, Fondazione Edmund Mach, 2Beneficial Insects Introduction Research Unit, Agricultural Research Service, United States Department of Agriculture, 3Center for Agriculture, Food and Environment, University of Trento, 4Department of Environmental Science, Policy and Management, University of California Berkeley, 5Department of Agriculture, Food and Environment, University of Catania, 6Systematic Entomology Laboratory, Agricultural Research Service, United States Department of Agriculture

Summary

ड्रोसोफिला सुजुकी (एक वैश्विक आक्रामक फल फसल कीट) के एक लार्वा परजीवी गैनास्पिस ब्रासीलिएंसिस को इस कीट के जैविक नियंत्रण के लिए यूरोप और संयुक्त राज्य अमेरिका में पेश करने के लिए अनुमोदित या माना जाता है। यह लेख इस परजीवी के छोटे पैमाने पर और बड़े पैमाने पर पालन दोनों के लिए प्रोटोकॉल प्रदान करता है।

Abstract

पूर्वी एशिया के मूल निवासी, चित्तीदार-विंग ड्रोसोफिला, ड्रोसोफिला सुजुकी (मात्सुमुरा) (डिप्टेरा: ड्रोसोफिलिडे), पिछले एक दशक में अमेरिका, यूरोप और अफ्रीका के कुछ हिस्सों में व्यापक रूप से स्थापित हुआ है, जो अपने आक्रमण वाले क्षेत्रों में विभिन्न नरम चमड़ी वाले फलों का एक विनाशकारी कीट बन गया है। जैविक नियंत्रण, विशेष रूप से आत्म-स्थायी और विशेष परजीवी के माध्यम से, इस अत्यधिक मोबाइल और पॉलीफैगस कीट के स्थायी क्षेत्र-व्यापी प्रबंधन के लिए एक व्यवहार्य विकल्प होने की उम्मीद है। गैनस्पिस ब्रासीलिएंसिस इहेरिंग (हाइमनोप्टेरा: फिगिटिडे) एक लार्वा परजीवी है जो पूर्वी एशिया में व्यापक रूप से वितरित किया जाता है, और डी सुजुकी के सबसे प्रभावी परजीवी में से एक पाया गया है।

इसकी प्रभावकारिता और संभावित गैर-लक्ष्य जोखिमों के कठोर पूर्व-परिचय मूल्यांकन के बाद, इस प्रजाति के अधिक मेजबान-विशिष्ट आनुवंशिक समूहों में से एक (जी 1 जी ब्रासिलिएंसिस) को हाल ही में संयुक्त राज्य अमेरिका और इटली में परिचय और क्षेत्र रिलीज के लिए अनुमोदित किया गया है। एक अन्य आनुवंशिक समूह (जी 3 जी ब्रासिलिएंसिस), जिसे आमतौर पर पूर्वी एशिया में डी सुजुकी पर हमला करने के लिए भी पाया गया था, निकट भविष्य में परिचय के लिए विचार किया जा सकता है। वर्तमान में अनुसंधान के लिए जी ब्रासिलिएंसिस के पालन में या डी सुजुकी के खिलाफ क्षेत्र रिलीज के लिए बड़े पैमाने पर उत्पादन में भारी रुचि है। यह प्रोटोकॉल और संबद्ध वीडियो लेख इस परजीवी के लिए प्रभावी पालन विधियों का वर्णन करता है, दोनों अनुसंधान के लिए छोटे पैमाने पर और बड़े पैमाने पर उत्पादन और क्षेत्र रिलीज के लिए बड़े पैमाने पर। इन विधियों से इस वैश्विक आक्रामक कीट के लिए एक आशाजनक जैविक नियंत्रण एजेंट के रूप में इस एशियाई-देशी परजीवी के दीर्घकालिक अनुसंधान और उपयोग को लाभ हो सकता है।

Introduction

पूर्वी एशिया के मूल निवासी, चित्तीदार-विंग ड्रोसोफिला, ड्रोसोफिला सुजुकी (मात्सुमुरा) (डिप्टेरा: ड्रोसोफिलिडे), अमेरिका, यूरोप और अफ्रीका के कुछ हिस्सों में व्यापक रूप से स्थापित किया गया है 1,2. मक्खी बेहद पॉलीफैगस है, जो अपने मूल और आक्रमण वाले क्षेत्रों 1,2,3 में नरम और पतली खाल के साथ विभिन्न खेती और जंगली फलों का उपयोग करने में सक्षम है। इस कीट के लिए वर्तमान प्रबंधन रणनीतियां कीटनाशकों के लगातार उपयोग पर बहुत अधिक निर्भर करती हैं जो अतिसंवेदनशील फल पकने पर फसल के खेतों में वयस्क मक्खियों को लक्षित करती हैं। बार-बार स्प्रे का उपयोग अक्सर किया जाता है, संभवतः गैर-फसल आवासों से जलाशय मक्खी आबादी के लगातार फैलाव और आक्रमण वाले क्षेत्रों में रहने वाले प्रभावी प्राकृतिक दुश्मनों की कमीके कारण 1,4. जैविक नियंत्रण, विशेष रूप से स्व-स्थायी विशेष परजीवी के माध्यम से, परिदृश्य स्तर पर मक्खी आबादी को दबाने में मदद कर सकता है और इस अत्यधिक मोबाइल और पॉलीफैगस कीट 4,5,6 के स्थायी क्षेत्र-व्यापी प्रबंधनके लिए महत्वपूर्ण भूमिका निभा सकता है।

पिछले एक दशक में, शोधकर्ताओं ने पूर्वी एशिया 7,8,9 में मक्खी की मूल श्रेणियों में ड्रोसोफिला सुजुकी के सह-विकसित परजीवी की खोज करने के प्रयासों पर ध्यान केंद्रित किया है, साथ ही अमेरिका और यूरोप 4,5,6 में मक्खी के आक्रमण वाले क्षेत्रों में प्रभावी लेकिन नए संबद्ध परजीवी भी हैं। मक्खी के नए आक्रमण वाले क्षेत्रों में, आमतौर पर होने वाले लार्वा ड्रोसोफिला परजीवी, जैसे कि असोबारा सीएफ टैबिडा (नीस) (हाइमेनोप्टेरा: ब्राकोनिडे), लेप्टोपिलिना बाउलार्डी (बारबोटिन एट अल। उत्तरी अमेरिका और यूरोप में केवल कुछ महानगरीय और सामान्यवादी प्यूपल परजीवी जैसे पचीक्रेपोइडस विंडेमिया (रोंडानी) (हाइमेनोप्टेरा: टेरोमालिडे) और ट्राइकोप्रिया ड्रोसोफिला (पर्किन्स) (हाइमेनोप्टेरा: डायप्रिडे) और दक्षिण अमेरिका में ट्राइकोप्रिया एनास्ट्रेफे लीमा आसानी से इस मक्खी से विकसित हो सकते हैं। इसके विपरीत, पूर्वी एशिया में अन्वेषणों ने डी सुजुकी 4,5,6 से कई लार्वा परजीवी की खोज की है। उनमें से, असोबारा जपोनिका बेलोकोबिलस्किज, गनास्पिस ब्रासिलिएंसिस इहेरिंग, और लेप्टोपिलिना जैपोनिका नोवकोविच और किमुरा प्रमुख लार्वा परजीवी 7,8,9,11 हैं। विशेष रूप से, दो अंजीर (एल जैपोनिका और जी ब्रासिलिएंसिस) प्रमुख परजीवी थे जो मुख्य रूप से प्राकृतिक वनस्पति 7,8,9 में डी सुजुकी और / या अन्य निकट से संबंधित ड्रोसोफिलिड्स से संक्रमित ताजे फलों में पाए जाते थे। इन तीन एशियाई लार्वा परजीवी को संयुक्त राज्य अमेरिका और यूरोप में संगरोध सुविधाओं में आयात किया गया था, और उनकी सापेक्ष दक्षता 12,13,14,15,16,17, जलवायु अनुकूलनक्षमता18, संभावित अंतर-विशिष्ट प्रतिस्पर्धी इंटरैक्शन19, और सबसे महत्वपूर्ण बात, मेजबान विशिष्टता 8,20,21 के लिए मूल्यांकन किया गया था 22.

संगरोध मूल्यांकन से पता चला है कि गैनास्पिस ब्रासीलिएंसिस अन्य परीक्षण किए गए एशियाई लार्वा परजीवी की तुलना में ड्रोसोफिला सुजुकी के लिए अधिक मेजबान-विशिष्ट था, हालांकि इसमें अलग-अलग मेजबान विशिष्टता 8,21,22,23,24 के साथ विभिन्न बायोटाइप या गुप्त प्रजातियां शामिल हैं। 22 ने माइटोकॉन्ड्रियल साइटोक्रोम ऑक्सीडेज आई जीन टुकड़े के आणविक विश्लेषण के आधार पर विभिन्न भौगोलिक क्षेत्रों के गनास्पिस व्यक्तियों को पांच आनुवंशिक समूहों (जी 1-जी 5 के रूप में नामित) में वर्गीकृत किया। जी 2 और जी 4 समूहों को केवल कुछ दक्षिण एशियाई उष्णकटिबंधीय स्थानों से रिपोर्ट किया गया है, और जी 5 समूह को एशिया और अन्य क्षेत्रों (जैसे, अर्जेंटीना, ब्राजील, हवाई और मैक्सिको) से अज्ञात मेजबान (ओं) (बफिंगटन, व्यक्तिगत अवलोकन) से रिपोर्ट किया गया था। दक्षिण कोरिया7, चीन8 और जापान 9,23,25 में डी सुजुकी द्वारा संक्रमित जंगली फलोंके क्षेत्र संग्रह में अकेले जी 1 या समूह जी 1 और जी 3 का प्रतिनिधित्व करने वाले नमूनों का मिश्रण पाया गया। दोनों समूह सहानुभूतिपूर्ण प्रतीत होते हैं और डी सुजुकी और अन्य निकट से संबंधित मेजबान मक्खियों द्वारा बसाए गए एक ही मेजबान पौधों पर सह-अस्तित्व में हैं। बहरहाल, दोनों समूहों के बीच कुछ अंतर देखे गए हैं, जी 1 में जी 3 की तुलना में डी सुजुकी के लिए मेजबान- या मेजबान-निवास-विशिष्टता की उच्च डिग्री प्रतीत होती है, हालांकि वे दोनों संगरोधपरीक्षणों 21,22 में कई निकट से संबंधित प्रजातियों पर हमला करते हैं। आगे विस्तृत आणविक विश्लेषण प्रजातियों की स्थिति निर्धारित करने में मदद कर सकते हैं, खासकर जी 1 और जी 3 समूहों के लिए। यह अध्ययन उन्हें जी 1 जी ब्रासिलिएंसिस और जी 3 जी ब्रासिलिएंसिस के रूप में संदर्भित करता है। कुछ शुरुआती अध्ययनों ने जी 1 जी ब्रासिलिएंसिस को जी के रूप में भी नामित किया। ब्रासीलिएंसिस 14,21,22. ब्रासीलिएंसिस को हाल ही में संयुक्त राज्य अमेरिका और इटली में डी सुजुकी के खिलाफ क्षेत्र रिलीज के लिए अनुमोदित किया गया है (कई अन्य यूरोपीय देश भी वर्तमान में इसकी शुरूआत पर विचार कर रहे हैं), जबकि जी 3 जी ब्रासिलिएंसिस को निकट भविष्य में क्षेत्र रिलीज के लिए माना जा सकता है। हाल के सर्वेक्षणों में ब्रिटिश कोलंबिया, कनाडा26, और वाशिंगटन राज्य, यूएसए (बीयर एट अल, अप्रकाशित डेटा), और ट्रेंटो प्रांत, इटली में साहसिक एल जैपोनिका आबादी दोनों की साहसिक आबादी भी पाईगई।

ड्रोसोफिला सुजुकी प्रबंधन के लिए जैविक नियंत्रण कार्यक्रमों के विकास में महत्वपूर्ण रुचि और गैनास्पिस ब्रासीलिएंसिस के साहसिक और जानबूझकर परिचय की पर्याप्त जैविक नियंत्रण क्षमता को देखते हुए, भविष्य के दीर्घकालिक अनुसंधान और / या क्षेत्र रिलीज के लिए इस लार्वा परजीवी के लिए कुशल पालन विधियों को विकसित करने की आवश्यकता है। यह प्रोटोकॉल और संबद्ध वीडियो लेख इस परजीवी के लिए पालन विधियों के दो सेटों का वर्णन करते हैं: (1) मेजबान फल (ब्लूबेरी) के मिश्रण का उपयोग करके फ्लास्क में छोटे पैमाने पर प्रयोगशाला पालन और डी सुजुकी की संस्कृति के लिए कृत्रिम आहार। विधियों को मूल रूप से कुनमिंग, चीन 8 से एकत्र की गई जी 3 सामग्री का उपयोग करके विकसितकिया गया था। (2) डी सुजुकी की संस्कृति के लिए मेजबान फल (ब्लूबेरी) का उपयोग करके बड़े पिंजरों में क्षेत्र रिलीज के लिए बड़े पैमाने पर पालन। बड़े पैमाने पर पालन के लिए उपयोग किया जाने वाला आनुवंशिक समूह टोक्यो, जापान 9,22 में उत्पन्न जी 1 स्टॉक था। पालन विधियों के अन्य तराजू, जैसे कि दोनों समूहों के लिए शीशियों या छोटे कंटेनरों का उपयोग करना, पर भी संक्षेप में चर्चा की जाती है।

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Protocol

1. जी 3 गैनास्पिस ब्रासीलिएंसिस के छोटे पैमाने पर प्रयोगशाला पालन के तरीके

  1. मेजबान आहार तैयार करें।
    1. 1,500 एमएल ग्लास कंटेनर में 600 मिलीलीटर आसुत जल जोड़ें, और गर्म प्लेट पर पानी गर्म करें।
    2. व्यावसायिक रूप से उपलब्ध सूखे आहार के 88.6 ग्राम (अगर, ब्रेवर के खमीर, मकई भोजन, मिथाइल पैराबेन और सुक्रोज से बना) जोड़ें या डाल्टन एट अल .28 द्वारा प्रकाशित सूत्र का उपयोग करके आहार तैयार करें (चरण 2.1.2 देखें)।
    3. सूखे आहार में 300 मिलीलीटर आसुत जल जोड़ें और आहार मिश्रण को अच्छी तरह से हिलाएं।
    4. उबलते पानी में मिश्रण डालें।
    5. गर्म प्लेट पर तरल आहार को 10 मिनट तक उबलने दें, जबकि समय-समय पर मिश्रण को जलने से रोकने के लिए हिलाएं।
    6. आहार को 30 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर ठंडा करने की अनुमति दें, जबकि इसे कभी-कभी गर्मी की रिहाई को समान रूप से वितरित करने और आहार को सतह पर जमने से रोकने के लिए सरगर्मी करें।
    7. एक कंटेनर में 95% ईटीओएच के 6.7 एमएल और दूसरे कंटेनर में 1 एम प्रोपियोनिक एसिड समाधान के 3.5 एमएल को मापें।
    8. एक बार आहार ठंडा हो जाने के बाद, ईटीओएच और फिर प्रोपियोनिक एसिड समाधान जोड़ें, प्रत्येक जोड़ के बाद अच्छी तरह से सरगर्मी करें।
    9. ब्लूबेरी (स्थानीय बाजार से खरीदा गया) उन्हें ठंडे पानी में धोकर तैयार करें, फिर सोडियम हाइपोक्लोराइट ब्लीच समाधान (5% तक पतला) और फिर से ठंडा पानी।
    10. फल को एक पेपर तौलिया से सुखाएं और मैन्युअल रूप से उन्हें मैश करें जब तक कि प्रत्येक फल पर त्वचा टूट न जाए और फल के रस और मांस उजागर न हो जाएं।
    11. प्रत्येक 250 एमएल फ्लास्क में 25-30 ग्राम मैश किए हुए ब्लूबेरी जोड़ें। यह सुनिश्चित करने के लिए फ्लास्क के किनारों को टैप करें कि फ्लास्क के आंतरिक तल को मैश किए हुए ब्लूबेरी की एक समान परत के साथ कवर किया गया है।
    12. प्रत्येक फ्लास्क में तैयार आहार डालें ताकि यह मैश किए हुए ब्लूबेरी के शीर्ष को कवर कर सके।
    13. फ्लास्क की गर्दन में फोम स्टॉपर जोड़ें और आहार को कमरे के तापमान (चित्रा 1) पर जमने की अनुमति दें।
    14. एक बार आहार जम जाने के बाद, इसे तुरंत उपयोग करें या 3 सप्ताह तक 5 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।
  2. रियर होस्ट ड्रोसोफिला सुजुकी।
    1. रेफ्रिजरेटर से संग्रहीत आहार को निकालें और इसे परिवेश के कमरे के तापमान पर संतुलित करने की अनुमति दें, या ताजा बने आहार का उपयोग करें।
    2. शोषक पेपर तौलिया का एक टुकड़ा काटें (उदाहरण के लिए, 5 सेमी x 20 सेमी) और इसे केंद्र में मोड़ें। फ्लास्क (चित्रा 1) में कागज तौलिया के मुड़ मध्य खंड रखें।
    3. नमी बनाए रखने के लिए आसुत जल के साथ पेपर तौलिया और आहार की सतह को गीला करें।
    4. पुराने फ्लास्क पर डाट को सावधानीपूर्वक हटाकर और जल्दी से फ्लास्क को उलटकर और नए फ्लास्क के साथ पुराने फ्लास्क के उद्घाटन को संरेखित करके वर्तमान कॉलोनी फ्लाई फ्लास्क से यौन परिपक्व वयस्क मक्खियों को एक नए आहार फ्लास्क में स्थानांतरित करें।
    5. मक्खियों को नए फ्लास्क में छोड़ने के लिए प्रेरित करने के लिए पुराने फ्लास्क के किनारे धीरे-धीरे टैप करें। सुनिश्चित करें कि नए फ्लास्क में डी सुजुकी के ~ 25-30 संभोग जोड़े हैं। एक बार जब नए फ्लास्क में पर्याप्त मक्खियां होती हैं, तो जल्दी से पुराने फ्लास्क को सीधा फ्लिप करें और दोनों फ्लास्क पर स्टॉपर्स को प्रतिस्थापित करें।
    6. मक्खियों के स्थानांतरण को दोहराएं जब तक कि पुराने फ्लास्क में कोई मक्खियां न छोड़ी जाएं। यदि आवश्यक हो, तो एक से अधिक पुराने फ्लास्क से मक्खियों को एक नए फ्लास्क में संयोजित या इकट्ठा करें ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि प्रति फ्लास्क पर्याप्त मक्खियां (20-30 जोड़े) हैं।
    7. मक्खी उद्भव के लिए 3 सप्ताह के लिए एक पर्यावरण कक्ष में उपयुक्त परिस्थितियों (21 डिग्री सेल्सियस, 16 एल: 8 डी फोटोपीरियड, 60% -80% सापेक्ष आर्द्रता [आरएच%]) पर वयस्क मक्खियों के संपर्क में आने के एक सप्ताह के बाद नए फ्लास्क पकड़ो।
  3. परजीवी के लिए मेजबान लार्वा का पर्दाफाश करें।
    1. किसी भी वयस्क मक्खियों और फ्लास्क से मुड़ पेपर तौलिया को हटाने के बाद फ्लाई अंडे और लार्वा युक्त एक फ्लास्क (चरण 1.2.7 देखें) लें।
    2. शोषक पेपर तौलिया के एक टुकड़े को आधे में मोड़ो और इसे परजीवी लार्वा के लिए प्यूपेशन सब्सट्रेट के रूप में फ्लास्क में रखें।
    3. प्रत्येक फ्लास्क (चित्रा 1) में जी 3 जी ब्रासिलिएंसिस के छह महिला और पुरुष जोड़े की आकांक्षा करें। फोम डाट के तल पर शहद की एक पतली परत लकीर।
    4. परजीवी को 5 दिनों के लिए फ्लास्क में छोड़ दें।
    5. 5-दिवसीय एक्सपोजर के बाद, परजीवी को हटा दें और अपेक्षित ततैया उद्भव तक 35 दिनों के लिए पर्यावरण कक्ष में ऊपर वर्णित शर्तों के तहत फ्लास्क को पकड़ें।
  4. वयस्क परजीवी इकट्ठा करें और स्टोर करें।
    1. इनक्यूबेशन के दूसरे और तीसरे सप्ताह के दौरान, प्रारंभिक मेजबान उद्भव के लिए साप्ताहिक फ्लास्क की जांच करें और वयस्क मक्खियों को हटा दें।
    2. एक बार जब वयस्क परजीवी उभरने लगते हैं, तो उन्हें प्रति सप्ताह तीन बार आकांक्षा करें और उन्हें ड्रोसोफिला शीशियों (जैसे, 2.5 सेमी x 9.5 सेमी) (चित्रा 1) में रखें।
    3. शीशी के तल पर आसुत जल के साथ कागज तौलिया का एक छोटा टुकड़ा गीला रखें, लेकिन संतृप्त न करें।
    4. प्रत्येक शीशी में ~ 60 परजीवी जोड़ें और उद्भव तिथियों के साथ शीशी को लेबल करें। फोम स्टॉपर के तल पर शहद की एक पतली परत को लकीर करें, प्रति सप्ताह दो बार। पर्यावरण कक्ष में ऊपर वर्णित शर्तों के तहत वयस्क परजीवी के साथ शीशियों को एक महीने तक स्टोर करें यदि जल्द ही उपयोग नहीं किया जाता है।
    5. हर 4-7 दिनों में एक बार शीशी में कागज को फिर से लिखें या मोल्ड के संकेत होने पर पेपर तौलिया को प्रतिस्थापित करें।

2. जी 1 गैनास्पिस ब्रासिलिएंसिस के बड़े पैमाने पर पालन के तरीके

  1. मेजबान ड्रोसोफिला सुजुकी के बड़े पैमाने पर पालन को लागू करें।
    1. बड़े, बुना हुआ जाल से ढके पिंजरों (जैसे, 50 सेमी x 50 सेमी x 100 सेमी) के भीतर रियर डी सुजुकी प्रत्येक में 1,500-2,000 यौन परिपक्व वयस्क मक्खियां (लिंग अनुपात 50:50) (चित्रा 2)।
    2. सभी अवयवों (बैक्टीरियोलॉजिकल अगर के 6 ग्राम, कॉर्नमील के 75 ग्राम, पोषण खमीर के 17 ग्राम, 15 ग्राम सैकरोज़, 10 ग्राम सोयाबीन का आटा, 10 मिलीलीटर प्रोपियोनिक एसिड) को 1 एल आसुत जल में उबालकर मानक ड्रोसोफिला मीडियम (एसडीएम) तैयार करें, जबकि समय-समय पर मिश्रण को28 जलने से रोकने के लिए सरगर्मी करें।
    3. मिश्रण को 5 मिनट के लिए ठंडा होने दें और 5 ग्राम एस्कॉर्बिक एसिड जोड़ें।
    4. ताजा पके हुए एसडीएम को 9 सेमी पेट्री व्यंजनों में डालें और प्लेटों को बंद करने से पहले माध्यम को कमरे के तापमान पर जमने दें।
    5. एसडीएम पेट्री व्यंजनों को ढेर करें, एल्यूमीनियम पन्नी के साथ ढेर लपेटें, और व्यंजनों को 2 सप्ताह तक 4 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।
    6. प्रत्येक पालन पिंजरे के भीतर, एसडीएम (चित्रा 2) के साथ पानी से लथपथ कपास और चार से छह पेट्री व्यंजनों के साथ एक प्लेट रखें।
    7. प्रति सप्ताह दो बार, संक्रमित एसडीएम पेट्री व्यंजनों को ताजा लोगों के साथ बदलें।
    8. प्लास्टिक के कप (13.3 सेमी व्यास या 800 एमएल) में व्यक्तिगत रूप से ढक्कन के बिना संक्रमित एसडीएम पेट्री व्यंजन रखें, प्रत्येक कप को ठीक जाल (<0.5 मिमी) के कवर के साथ बंद करें, और 23 डिग्री सेल्सियस और 75% आरएच (चित्रा 2) पर 12-15 दिनों के लिए सेते हैं।
    9. नए रचे गए डी सुजुकी वयस्कों को प्लास्टिक के कप से पालन पिंजरों में स्थानांतरित करें।
  2. मेजबान लार्वा तैयार करें।
    1. 1 मिनट के लिए ठंडे पानी में ब्लूबेरी कुल्ला, और 3 मिनट के लिए एक ब्लीच समाधान (5% करने के लिए पतला) से भरा बेसिन में फल भिगोएँ।
    2. ब्लीच समाधान निकालें और ब्लूबेरी को कुल्ला करने के लिए बेसिन को ठंडे पानी से भरें। कम से कम 30 सेकंड के लिए हाथ से धीरे-धीरे मिलाएं।
    3. फल पर मौजूद ब्लीच अवशेषों और अन्य आर्थ्रोपोड्स (जैसे, घुन, थ्रिप्स) को हटाने के लिए ताजे पानी के साथ कम से कम तीन बार चरण 2.2.2 दोहराएं।
    4. शोषक पेपर तौलिए की कई परतों के साथ एक ट्रे पर फल रखें और ट्रे को ध्यान से आगे और पीछे झुकाएं, जामुन को सुखाने के लिए चारों ओर घुमाएं।
    5. कई 9 सेमी पेट्री व्यंजन तैयार करें (या तो ऊपर या नीचे के हिस्सों, ऊपर का सामना करना पड़ रहा है) और प्रत्येक को धोए गए ब्लूबेरी (फल के आकार के आधार पर प्रति प्लेट 15-25 फल) से भरें।
    6. देर से दोपहर के घंटों के दौरान, मेजबान पालन पिंजरों के भीतर यौन रूप से परिपक्व वयस्क मक्खियों के लिए पेट्री व्यंजनों को उजागर करें (चरण 2.1 देखें) और उन्हें रात भर छोड़ दें।
    7. अगली सुबह, फलों पर मक्खियों को हटाने के लिए धीरे-धीरे उड़ाने या टैप करके मेजबान पालन पिंजरों से पेट्री व्यंजनों को हटा दें और परजीवी के पालन के लिए संक्रमित फल का उपयोग करें (चरण 2.4 देखें)।
  3. एक बड़े पैमाने पर परजीवी पालन को लागू करें।
    1. परजीवी को पालने के लिए दो प्रकार के पिंजरों का उपयोग करें: एक परजीवीवाद के लिए और दूसरा ततैया उद्भव के लिए।
    2. सुनिश्चित करें कि परजीवी पिंजरे क्यूबिक (जैसे, 45 सेमी प्रत्येक तरफ) कीट गतिविधि को देखने के लिए मोर्चे पर एक स्पष्ट प्लास्टिक पैनल के साथ है, कीड़ों के अलावा या हटाने के लिए फ्रंट पैनल में दो 18 सेमी आस्तीन के उद्घाटन और खाद्य सामग्री के प्रतिस्थापन, और वेंटिलेशन के लिए शीर्ष और किनारों पर ठीक पॉलिएस्टर नेटिंग (जैसे, 96 x 26 जाल)।
    3. उद्भव पिंजरे को छोटा बनाएं (उदाहरण के लिए, प्रत्येक तरफ 30 सेमी), दो विपरीत पक्षों पर एक आस्तीन खोलने और दृश्यता (चित्रा 2) के लिए मोर्चे पर एक स्पष्ट प्लास्टिक पैनल के साथ।
    4. सुनिश्चित करें कि दोनों पिंजरे प्रकारों में एक पतली स्ट्रिंग है जो छत के नीचे लटकती है जिसमें से एक से कई फीडर (चित्रा 2) को निलंबित करना है।
      नोट: एक फीडर में बिखरे हुए शहद की बूंदों के साथ कवर किया गया एक बड़ा बेलनाकार फोम स्टॉपर (9 सेमी व्यास) होता है, और पिंजरे के फर्श पर रखा जा सकता है या पिंजरे की छत (चित्रा 2) से लटका दिया जा सकता है।
    5. प्रत्येक पिंजरे के भीतर, आरएच के आधार पर हर 5-7 दिनों में सेल्यूलोज एसीटेट प्लग (2.5 सेमी व्यास) के साथ सील की गई सीधी दीवार ड्रोसोफिला शीशी (2.5 सेमी x 9.5 सेमी) में पानी प्रदान करें। पिंजरे की छत (चित्रा 2) से शीशी उल्टा लटकाएं।
  4. परजीवी के लिए मेजबान लार्वा का पर्दाफाश करें।
    1. पेट्री व्यंजनों के भीतर मेजबान-संक्रमित फल को डी सुजुकी रात भर के संक्रमण के तुरंत बाद जी 1 जी ब्रासिलिएंसिस में उजागर करें (चरण 2.2.7 देखें)।
    2. 2-3 दिनों के लिए 1,500-2,000 ततैया युक्त परजीवीकरण पिंजरे में संक्रमित फल के 10-15 पेट्री व्यंजन छोड़ दें।
    3. परजीवी मेजबान (चित्रा 2) युक्त फल को इकट्ठा करने के लिए तल पर शोषक कागज की परतों के साथ प्लास्टिक कप (13.3 सेमी व्यास या 800 एमएल) का उपयोग करें।
    4. एक्लोजन पिंजरे में खुले कप रखें और 21 डिग्री सेल्सियस और 65% आरएच (चित्रा 2) पर कम से कम 28 दिनों के लिए सेते हैं।
    5. इनक्यूबेशन के दूसरे और तीसरे सप्ताह के दौरान, प्रारंभिक मेजबान एक्लोजन के लिए पिंजरे की साप्ताहिक जांच करें और परजीवी के क्रमिक संग्रह को सुविधाजनक बनाने के लिए वयस्क मक्खियों को हटा दें।
    6. इनक्यूबेशन के चौथे सप्ताह के अंत में, पिंजरे में एक फीडर और एक जल स्रोत जोड़ें।
  5. वयस्क परजीवी इकट्ठा करें और स्टोर करें।
    1. एक बार परजीवी उद्भव शुरू होने के बाद, वयस्कों के एक हिस्से (10% -15%) को इकट्ठा करें और पुराने अनुत्पादक व्यक्तियों को बदलने के लिए उन्हें परजीवी पिंजरे में वापस स्थानांतरित करें।
    2. प्लास्टिक के कप (13.3 सेमी व्यास या 800 एमएल) (चित्रा 3 ए) में शेष परजीवी को इकट्ठा करें और स्टोर करें।
    3. पानी से भरा एक ट्यूब (2 एमएल) रखें और कप (चित्रा 3 ए) के तल पर एक दंत कपास रोल (1 सेमी x 3.8 सेमी) के साथ सील कर दिया गया।
    4. एक फीडर सब्सट्रेट और वेंटिलेशन (चित्रा 3 बी) के लिए एक जाल से ढके छेद के रूप में एक हटाने योग्य फोम डाट (3.5 सेमी व्यास) के साथ लगे एक संशोधित ढक्कन के साथ कप बंद करें।
    5. प्रत्येक कप (लिंग अनुपात 50:50) में 700 वयस्कों को जोड़ें, उभरने की तारीख के साथ कप को लेबल करें, और इसे उपयोग किए जाने तक पर्यावरण कक्ष (17 डिग्री सेल्सियस; 65% आरएच) में स्टोर करें, या 1 महीने तक (चित्रा 3 बी)।
  6. वयस्क परजीवी जहाज।
    1. वयस्क परजीवी जहाज करने के लिए शंक्वाकार ट्यूब (50 एमएल) का उपयोग करें।
    2. टोपी पर एक वेंटिलेशन छेद (8 मिमी व्यास) पियर्स और इसे एक ठीक जाल नेट (चित्रा 3 सी) के साथ कवर करें।
    3. टोपी (चित्रा 3 सी) के अंदर एक सेल्यूलोज एसीटेट खिला अंगूठी जोड़ें।
    4. आसुत जल का उपयोग करके एक संतृप्त सुक्रोज समाधान तैयार करें, खिला अंगूठी पर कुछ बूंदें लागू करें, और इसे तरल को अवशोषित करने दें।
    5. ट्यूब (चित्रा 3 डी) के भीतर शोषक कागज तौलिया का एक प्रशंसक के आकार का टुकड़ा रखें।
    6. प्रत्येक ट्यूब में ~ 200 वयस्क परजीवी जोड़ें, और ट्यूबों को आइस पैक के साथ एक अछूता शिपिंग कंटेनर में रखें।

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Representative Results

चित्रा 4 यूएसडीए-एआरएस लाभकारी कीड़े परिचय इकाई (नेवार्क, डेलावेयर) की संगरोध सुविधा में दो अलग-अलग परजीवी घनत्व (छह या 10 जोड़े) और दो अलग-अलग एक्सपोजर समय (5 या 10 दिन) का उपयोग करके जी 3 गनास्पिस ब्रासीलिएंसिस के छोटे पैमाने पर प्रयोगशाला पालन के प्रतिनिधि परिणाम दिखाता है। परजीवी घनत्व और एक्सपोजर समय के प्रत्येक संयोजन के लिए 14 प्रतिकृतियां थीं। कुल मिलाकर, 64 फ्लास्क ने 49.5% ± 1.9% महिला संतानों के साथ 4,018 ततैया (71.7 ± 4.9 संतान प्रति फ्लास्क) का उत्पादन किया। 21 डिग्री सेल्सियस पर, वयस्क परजीवी ओविपोजिशन के लगभग 30-35 दिनों के बाद उभरे। परजीवी घनत्व और एक्सपोज़र समय ने प्रति प्रतिकृति (फ्लास्क) (एक तरफा एनोवा, एफ3,52 = 0.379 , पी = 0.769) में उत्पादित संतानों की कुल संख्या को महत्वपूर्ण रूप से प्रभावित नहीं किया और महिला संतानों के प्रतिशत पर केवल मामूली प्रभाव पड़ा (एक तरफा एनोवा, भिन्नता को स्थिर करने के लिए आवश्यकतानुसार विश्लेषण से पहले डेटा लॉगिट-रूपांतरित किया गया था, एफ3,52 = 2.796, पी = 0.049), हालांकि प्रति व्यक्ति महिला उत्पादन दक्षता (एक तरफा एनोवा, एफ3,52 = 3.576, पी = 0.020) उच्च परजीवी घनत्व पर कम हो गई। 5 दिनों से अधिक का एक्सपोजर समय उत्पादकता में वृद्धि करने के लिए प्रकट नहीं हुआ। परजीवी घनत्व में वृद्धि इसी तरह उत्पादकता में वृद्धि करने के लिए प्रकट नहीं हुई। इसलिए, छह जोड़े और 5-दिवसीय एक्सपोजर समय का संयोजन प्रयोगशाला पालन के लिए सबसे उपयुक्त प्रतीत होता है।

चित्रा 5 2021 में एडमंड मच फाउंडेशन (ट्रेंटो, इटली) की संगरोध सुविधा में जी 1 गनास्पिस ब्रासीलिएंसिस के बड़े पैमाने पर पालन की 6 महीने की उत्पादकता प्रवृत्ति को दर्शाता है। स्विट्जरलैंड के डेलेमोंट में सीएबीआई की संगरोध प्रयोगशाला में छोटे पैमाने पर पालन से प्राप्त 150 तीन दिवसीय, संभोग वाली मादा ततैया का उपयोग करके पालन शुरू किया गया था। पालन से अधिक ततैया धीरे-धीरे परजीवी पिंजरे में जोड़े गए, जब तक कि सप्ताह 5 पर 1,500-2,000 व्यक्तियों (लिंग अनुपात 50:50) तक नहीं पहुंच गया। परजीवीवाद पिंजरे की अधिभोग को इसके बाद बड़े पैमाने पर पालन में उत्पादित नए ततैया को जोड़कर उसी स्तर पर बनाए रखा गया था। पूरी अवधि के दौरान, परजीवी पिंजरे को हर 2-3 दिनों में ताजा संक्रमित फल प्रदान किया गया था। फल (ब्लूबेरी) को पेश किया गया था जी 1 जी ब्रासिलिएंसिस रात भर एक्सपोजर के तुरंत बाद ड्रोसोफिला सुजुकी। प्रारंभिक मेजबान एक्सपोजर (चित्रा 5 ए) के 5 सप्ताह बाद परजीवी उत्पादन शुरू हुआ। सप्ताह 8 से सप्ताह 22 तक, परजीवी उत्पादन उजागर फल की मात्रा के आनुपातिक था, औसतन 0.44 ± 0.03 ग्राम ± / चित्रा 5 बी)। कुल 53,736 परजीवी एकत्र किए गए थे, जिसमें 45.9% (सीमा: 32.4% -79.0%) की औसत महिला संतान थी।

Figure 1
चित्रा 1: ड्रोसोफिला सुजुकी और जी 3 गनास्पिस ब्रासीलिएंसिस की छोटे पैमाने पर प्रयोगशाला पालन प्रक्रियाओं के लिए एक प्रवाह चार्ट। बाईं ओर मेजबान मक्खी पालन प्रक्रियाओं को दर्शाता है जबकि दाईं ओर परजीवी पालन चक्र को दर्शाता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 2
चित्रा 2: ड्रोसोफिला सुजुकी और जी 1 गनास्पिस ब्रासीलिएंसिस की बड़े पैमाने पर पालन प्रक्रियाओं के लिए एक प्रवाह चार्ट। बाईं ओर मेजबान मक्खी पालन प्रक्रियाओं को दर्शाता है जबकि दाईं ओर परजीवी पालन चक्र को दर्शाता है। संक्षिप्त नाम: एसडीएम = मानक ड्रोसोफिला माध्यम। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 3
चित्रा 3: बड़े पैमाने पर पालन से जी 1 गनास्पिस ब्रासीलिएंसिस को स्टोर करने और जहाज करने के लिए उपयोग किए जाने वाले कंटेनर और ट्यूब। (ए) कंटेनर के अंदर एक पानी की ट्यूब दिखाने वाले भंडारण कंटेनर का एक क्षैतिज दृश्य, (बी) कंटेनर का एक ऊर्ध्वाधर दृश्य एक हवादार ढक्कन और एक फोम स्टॉपर दिखा रहा है, और (सी) एक हवादार ढक्कन और (डी) शिपिंग ट्यूब के लिए शोषक कागज का एक टुकड़ा। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 4
चित्रा 4: जी 3 गनास्पिस ब्रासीलिएंसिस के छोटे पैमाने पर प्रयोगशाला पालन के लिए प्रतिनिधि उदाहरण। (ए) प्रति फ्लास्क उत्पन्न संतानों की संख्या, (बी) प्रति मादा ततैया उत्पन्न संतानों की संख्या, और (सी) मादा संतानों का प्रतिशत, दो अलग-अलग परजीवी घनत्व और जोखिम समय के तहत। एसई ± मूल्यों का मतलब है, और विभिन्न अक्षरों वाले बार काफी अलग हैं (एनोवा, टुकी का एचएसडी, पी < 0.05)। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 5
चित्रा 5: सप्ताह 23 के माध्यम से इसकी शुरुआत से बड़े पैमाने पर पालन की उत्पादकता प्रवृत्ति बार्स परजीवी पिंजरे (गहरे हरे) में पुराने व्यक्तियों को बदलने के लिए एक्लोजन पिंजरों से साप्ताहिक रूप से एकत्र किए गए जी 1 गनास्पिस ब्रासिलिएंसिस संतानों की संख्या को इंगित करते हैं और संग्रहीत या शिप (हल्के हरे) होने के लिए। नारंगी रेखा परजीवी पिंजरे के भीतर परजीवी को प्रत्येक सप्ताह प्रदान किए जाने वाले मेजबान-संक्रमित फल (ब्लूबेरी के किलोग्राम) की मात्रा को इंगित करती है। (बी) मेजबान-संक्रमित फल के वजन का साप्ताहिक अनुपात एक्सपोजर के 5 सप्ताह बाद उत्पन्न परजीवी संतानों की संख्या (यानी, एक वयस्क परजीवी का उत्पादन करने के लिए आवश्यक फल के ग्राम)। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

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Discussion

दीर्घकालिक अनुसंधान और जैविक नियंत्रण एजेंट के बाद के क्षेत्र रिलीज प्रभावी और किफायती पालन तकनीकों की उपलब्धता पर निर्भर करते हैं। इस अध्ययन में वर्णित विधियां गैनास्पिस ब्रासीलिएंसिस के छोटे पैमाने पर और बड़े पैमाने पर पालन दोनों के लिए कुशल प्रोटोकॉल साबित हुई हैं। छोटे पैमाने पर पालन प्रोटोकॉल श्रम की मात्रा को अनुकूलित करने और परजीवी और मेजबान कॉलोनियों को एक साथ बनाए रखने के लिए आवश्यक विशेष उपकरणों को कम करने के लिए कई वर्षों में विकसित किया गया है। यह प्रयोगशाला अनुसंधान या बायोएसेस के लिए एक कॉलोनी बनाए रखने के लिए उपयुक्त है। इस परजीवी के संगरोध मूल्यांकन के लिए इस परजीवी को पालने के लिए लेखकों द्वारा इसी तरह के तरीकों का उपयोग किया गया है। बड़े पैमाने पर पालन प्रोटोकॉल क्षेत्र रिलीज के लिए बड़ी संख्या में ततैया का उत्पादन करने की अनुमति देगा, जैसा कि हाल ही में इटली में आयोजित किया गया था। इन प्रौद्योगिकियों को निकट भविष्य में बड़े पैमाने पर पालन के लिए अन्य प्रयोगशालाओं, उत्पादकों या कंपनियों को आसानी से स्थानांतरित किया जा सकता है, साथ ही साथ पद्धतियों में और सुधार के आधार के रूप में कार्य किया जा सकता है।

इन प्रोटोकॉल का उपयोग लेप्टोपिलिना जैपोनिका को पीछे करने के लिए भी किया जा सकता है, क्योंकि गैनास्पिस ब्रासिलिएंसिस और एल जैपोनिका दोनों अपने मेजबान निवास स्थान वरीयता 7,8, मेजबान चरण वरीयता या प्रजनन जीव विज्ञान 15, थर्मल प्रदर्शन18, और प्रयोगशाला बायोएसेस13,15 में फोर्जिंग दक्षता के साथ-साथ मेजबान से जुड़े संकेतों के प्रति व्यवहार प्रतिक्रियाओंके संदर्भ में समान हैं, सिवाय इसके कि एल। ऐसा लगता है कि जी 3 जी ब्रासिलिएंसिस20 की तुलना में एक व्यापक मेजबान रेंज है। दोनों परजीवी को यहां वर्णित समान तरीकों का उपयोग करके पाला गया है। छोटे पैमाने पर पालन के लिए, दोनों परजीवी को ड्रोसोफिला शीशियों में भी पाला जा सकता है, आमतौर पर 20 युवा (1-2 दिन पुराना) ड्रोसोफिला सुजुकी लार्वा को 2 सेमी कृत्रिम आहार से भरे ड्रोसोफिला शीशी में स्थानांतरित करके, या दो संक्रमित फल रखकर, प्रत्येक में 5-10 युवा डी। दोनों प्रति शीशी ~ 10संतानों का उत्पादन करते हैं 13,15,22।

जैसा कि ऊपर चर्चा की गई है, इस प्रोटोकॉल में उपयोग किए जाने वाले जी 1 और जी 3 गनास्पिस ब्रासीलिएंसिस कुछ होस्ट-खोज व्यवहार और मेजबान विशिष्टता21,22 में थोड़ा भिन्न हो सकते हैं। गिरोड एट अल .21 की रिपोर्ट है कि जापानी जी 1 जी ब्रासिलिएंसिस ड्रोसोफिला सुजुकी के लिए अधिक सख्ती से विशिष्ट था, और मेजबान फल पर इसके प्रदर्शन की तुलना में शीशियों में शुद्ध कृत्रिम आहार में अच्छा प्रदर्शन करने के लिए प्रकट नहीं हुआ था। मात्सुरा एट अल .25 ने यह भी बताया कि जापान में डी सुजुकी-संक्रमित चेरी से एकत्र जी 1 जी ब्रासिलिएंसिस आबादी डी सुजुकी के विशेषज्ञ हैं। ब्लूबेरी के साथ मिश्रित आहार का उपयोग करके छोटे पैमाने पर पालन विधि शुरू में जी 3 जी ब्रासिलिएंसिस के पालन के लिए विकसित की गई थी क्योंकि जी 1 जी ब्रासिलिएंसिस उस समय उपलब्ध नहीं था। बाद में, इस पद्धति को जी 1 जी ब्रासिलिएंसिस (वांग एट अल अप्रकाशित डेटा) के पालन के लिए अच्छी तरह से काम नहीं करने के लिए पाया गया था।

इसलिए, जी 1 जी ब्रासीलिएंसिस के छोटे पैमाने पर पालन के लिए, मेजबान सब्सट्रेट को संशोधित करने का सुझाव दिया जाता है (1) फल में मेजबान लार्वा इकट्ठा करने के लिए मक्खियों को सीधे ब्लूबेरी (या अन्य मेजबान फल) में उजागर करना, और (2) लार्वा के लिए एक मानक ड्रोसोफिला संस्कृति माध्यम में उजागर फल को स्थानांतरित करना। यह परजीवीकृत लार्वा को आहार पर फ़ीड करने की अनुमति देगा, विशेष रूप से उच्च मेजबान घनत्व पर, और परजीवी मेजबान प्यूपा को पेपर तौलिया से एकत्र किया जाएगा। वैकल्पिक रूप से, जी 1 जी ब्रासिलिएंसिस को 4-5 दिनों के लिए 5-10 मादा ततैया को 10-20 संक्रमित ब्लूबेरी में उजागर करके प्लास्टिक के कंटेनरों (विभिन्न आकारों) में सीधे फल पर पाला जा सकता है, जो मेजबान घनत्व (वांग एट अल। इस विधि के लिए, संक्रमित फल को एक उठाए गए धातु जाल ("हार्डवेयर कपड़ा") पर रखने की सिफारिश की जाती है ताकि परजीवी सभी दिशाओं से संक्रमित फल तक पहुंच सकें, खासकर यदि बहुत सारे फल एक कंटेनर में रखे जाते हैं। आदर्श रूप से, इस पालन विधि के लिए प्रत्येक कंटेनर में संक्रमित फल की एक या दो परतें रखी जानी चाहिए। इन वैकल्पिक छोटे पैमाने पर तरीकों को जी 3 जी ब्रासिलिएंसिस के पालन के लिए भी अच्छी तरह से काम करना चाहिए।

पालन के तरीकों और तराजू (शीशी, फ्लास्क, कंटेनर, या पिंजरे) के बावजूद, उपयुक्त तापमान, आर्द्रता बनाए रखना महत्वपूर्ण है, साथ ही साथ मेजबान या मादा ततैया उम्र, घनत्व और जी 1 गनास्पिस ब्रासिलिएंसिस और जी 3 जी ब्रासिलिएंसिस दोनों के पालन के लिए एक्सपोजर समय को नियंत्रित करना महत्वपूर्ण है। ड्रोसोफिला सुजुकी लार्वा सामान्य प्रयोगशाला स्थितियों (जैसे, 22 ± 2 डिग्री सेल्सियस) के तहत लगभग 1 सप्ताह में विकसित हुआ। ब्रासिलिएंसिस ने पुराने (3-4 दिन पुराने) मेजबान लार्वा की तुलना में युवा (1-2 दिन पुराना) पर हमला करना पसंद किया, हालांकि मेजबान लार्वा की विभिन्न उम्र पर हमला किया जा सकता था15. 22 ± 2 डिग्री सेल्सियस पर, जी ब्रासिलिएंसिस मादाएं परिपक्व अंडे के अपने जीवनकाल के पूरक के काफी उच्च अनुपात (~ 50%) के साथ उभरीं, और परिपक्व अंडे का भार 2-3 दिनों15 के बाद चरम पर पहुंच गया। वयस्क महिलाएं ~ 20 दिनों तक जीवित रहीं जब मेजबानों तक असीमित पहुंच प्रदान की गई और उद्भव के बाद 2 दिनों के भीतर ओविपोजिशन शुरू हो गया, 5-10 दिनों के भीतर ओविपोजिशन के चरम पर पहुंच गया और उसके बाद धीरे-धीरे ओविपोजिशन15 को कम कर दिया। इसलिए, पालन में युवा (<10 दिन पुरानी) मादा ततैया का उपयोग किया जाना चाहिए, लेकिन मादा ततैया को कम आपूर्ति में होने पर पालन के लिए पुन: उपयोग किया जा सकता है। परजीवी आसानी से 21-25 डिग्री सेल्सियस पर विकसित हो सकता है, लेकिन 17.2 डिग्री सेल्सियस से नीचे का तापमान एक संकाय डायपॉज17 को ट्रिगर करने के लिए दिखाई दिया। इसलिए मक्खी और परजीवी दोनों के इष्टतम विकास के लिए 21-25 डिग्री सेल्सियस की तापमान सीमा का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है।

इसके अलावा, 5 दिनों से अधिक के एक्सपोजर समय से परजीवी की उत्पादकता में वृद्धि नहीं होगी। जी 3 जी ब्रासिलिएंसिस के लिए छोटे पैमाने पर पालन के आधार पर परजीवी घनत्व में वृद्धि उत्पादकता में वृद्धि नहीं करती है, संभवतः फोर्जिंग मादा ततैया के बीच पारस्परिक हस्तक्षेप के कारण। छह पुरुष-महिला जोड़े और 5-दिवसीय एक्सपोज़र समय प्रयोगशाला के छोटे पैमाने पर पालन के लिए एक आदर्श संयोजन प्रतीत होता है, हालांकि भविष्य में मेजबान से परजीवी के अनुपात को और अनुकूलित करके पालन विधियों में सुधार किया जा सकता है। परजीवी के लिए एक प्रमुख मृत्यु दर कारक कम आर्द्रता से संबंधित प्रतीत होता है, क्योंकि कई परजीवी शुष्क सब्सट्रेट स्थितियों के साथ संलग्न करने में असमर्थ पाए गए थे। फल के नीचे शोषक पेपर तौलिया का एक टुकड़ा जोड़ना न केवल रस को अवशोषित करता है क्योंकि फल खराब हो जाता है, बल्कि एक सब्सट्रेट भी प्रदान करता है जिसे आर्द्रता बढ़ाने या मक्खी के लिए प्यूपेशन सब्सट्रेट प्रदान करने के लिए गीला किया जा सकता है।

छोटे पैमाने पर पालन के लिए, एक फ्लास्क एक शीशी की तुलना में आर्द्रता को बेहतर बनाए रख सकता है क्योंकि पूर्व में एक संकीर्ण गर्दन होती है। इस अध्ययन में यह भी पाया गया कि सक्रिय शुष्क खमीर की धूल के साथ लेपित ताजा ब्लूबेरी ने मोल्ड के गठन को रोकने में मदद की और मक्खियों के लिए फल के आकर्षण को बढ़ाया। परजीवी पालन के अन्य पहलुओं का पता लगाया जाना बाकी है, उनमें (1) वैकल्पिक मेजबानों या मेजबान फलों पर इस परजीवी को पालने की संभावना और वैकल्पिक मेजबान या मेजबान फल परजीवी की दक्षता को कैसे प्रभावित करेंगे, (2) परजीवी की संतान फिटनेस और लिंग अनुपात को प्रभावित करने वाले कारक, (3) कृत्रिम आहार स्थितियों के अनुकूल होने के लिए इस परजीवी (जी 1 और जी 3 दोनों) की क्षमता, और (4) आनुवंशिक या व्यवहार परिवर्तन जो अनुकूलन के साथ हो सकते हैं।

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Disclosures

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए हितों का कोई टकराव नहीं है।

Acknowledgments

लेखक लुकास सीहॉसेन और मार्क केनिस (सीएबीआई, स्विट्जरलैंड) को जी 1 जी ब्रासीलिएंसिस प्रदान करने के लिए धन्यवाद देते हैं। इटली में वित्त पोषण प्रोविंसिया ऑटोनोमा डी ट्रेंटो, ट्रेंटो, इटली और अमेरिका में नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ फूड एंड एग्रीकल्चर, यूएसडीए स्पेशियलिटी क्रॉप्स रिसर्च इनिशिएटिव अवार्ड (# 2020-5118-32140), यूएसडीए पशु और पौधे स्वास्थ्य निरीक्षण सेवा (फार्म बिल, फंड 14-8130-0463), और यूएसडीए एआरएस सीआरआईएस बेस फंड (परियोजना 8010-22000-033)) द्वारा प्रदान किया गया था। यूएसडीए एक समान अवसर प्रदाता और नियोक्ता है और इस प्रकाशन में उल्लिखित उत्पादों का समर्थन नहीं करता है।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Active dry yeast Fleischmanns Yeast, Cincinatti, OH, USA None Used to cover fruit to reduce mold growth and enhance the frui attraction to the flies
Bacteriological agar Merk Life Science S.r.l., Milan, Italy A1296 - 5KG Used to prepare the Standard Drosophila Medium
Bleach solution Clorox Company, Oakland, CA, USA None Used to disinfect flesh fruit
Blue stopper Azer Scientific, Morgantown, PA, USA ES3837 Used for sealing the tube while allowing ventilation for insects
Blueberries Grocery Store, Newark, DE, USA None Provided as host fruit for the flies (various other fruit can also be used)
BugDorm insect rearing cage (W24.5 x D24.5 x H63.0 cm) Mega View Science Co. Ltd., Taichung, Taiwan 4E3030 Used for rearing parasitoids (parasitism cage)
BugDorm insect rearing cage (W32.5 x D32.5 x H32.5 cm) Mega View Science Co. Ltd., Taichung, Taiwan 4E4590 Used for rearing flies
BugDorm insect rearing cage (W32.5 x D32.5 x H32.5 cm) Mega View Science Co. Ltd., Taichung, Taiwan 4E4545 Used for rearing parasitoids (eclosion cage)
Chicken wire (0.64 cm, 19 gauge) Everbilt, OH, USA 308231EB Used to lift up the fruit to allow maximum parasitoid oviposition
Cornmeal Grocery Store, Trento, TN, Italy None Used to prepare the Standard Drosophila Medium
Dental cotton roll (1 x 3.8 cm) Gima S.p.A., Gessate, MI, Italy 35000 Used for providing water to the parasitoids within the storage container
Drosophila diet Frontier Scientific, Newark, DE, USA TF1003 Custom diet used to rear flies
Drosophila vial narrow, Polystirene (2.5 x 9.5 cm) VWR International, LLC., Radnor, PA, US 75813-160 Used for providing water to the parasitoids within the cage
Drosophila vial plugs, Cellulose acetate (2.5 cm) VWR International, LLC., Radnor, PA, US 89168-886 Used for providing water to the parasitoids within the cage
Erlenmeyer flask (250 mL) Carolina Biological, Burlington, NC, USA 731029 Used for rearing flies and parasitoids
Falcon-style centrifuge tube (50 mL) VWR International, LLC., Radnor, PA, US VWRI525-0611 Modified to ship adult parasitoids
Foam stopper Jaece Industries, North Tanawanda, NY, USA L800-C Used for sealing the flasks while allowing ventilation for insects
Honey Grocery Store, Newark, DE, USA None Provided as food for parasitoids
Identi-Plug plastic foam stopper Fisher Scientific Company, L.L.C., Pittsburg, PA, US 14-127-40E Used as feeder for parasitoids and to seal the storage container
Industrial paper towel Grocery Store, Newark, DE, USA None Provided as a pupation substrate for pupae and mitigated moisture
Micron mesh fabric (250 mL) Industrial Netting, Maple Grove, MN, USA WN0250-72 Used to make ventilation lid for insects
Nutritional yeast (flakes) Grocery Store, Trento, TN, Italy None Used to prepare the Standard Drosophila Medium
Paper coaster (10.2 cm) Hoffmaster, WI, USA 35NG26 Porvided as pupation substrate for flies and parsitized pupae
Plastic cup (Ø 13.3 cm, 800 mL) Berry Superfos, Taastrup, Denmark Unipak 5134 Modified to store adult parasitoids
Plastic lid (Ø 13.3 cm) Berry Superfos, Taastrup, Denmark PP 2830 Modified to store adult parasitoids
Propionic acid Merk Life Science S.r.l., Milan, Italy P1386 - 1L Used to prepare the Standard Drosophila Medium
Saccharose Grocery Store, Trento, TN, Italy None Used to prepare the Standard Drosophila Medium
Soup cup with lid (475 mL) StackMan, Vietnam DC1648 Used for parasitized larvae to pupate
Soybean flour Grocery Store, Trento, TN, Italy None Used to prepare the Standard Drosophila Medium
White felt washer (0.64 cm thick, 5 mm ID x 20 mm OD) Quiklok, Lincoln, NH, US WFW/.25 x 5 x 20 mm Used as feeding ring for parasitoids

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References

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जीव विज्ञान अंक 184 जैविक नियंत्रण फिगिटिडे आक्रामक कीट परजीवी पालन चित्तीदार-पंख ड्रोसोफिला
परजीवी <em>गैनास्पिस ब्रासीलिएंसिस</em> को पालने के तरीके, आक्रामक <em>ड्रोसोफिला सुजुकी</em> के लिए एक आशाजनक जैविक नियंत्रण एजेंट
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Rossi-Stacconi, M. V., Wang, X., Stout, A., Fellin, L., Daane, K. M., Biondi, A., Stahl, J. M., Buffington, M. L., Anfora, G., Hoelmer, K. A. Methods for Rearing the Parasitoid Ganaspis brasiliensis, a Promising Biological Control Agent for the Invasive Drosophila suzukii. J. Vis. Exp. (184), e63898, doi:10.3791/63898 (2022).

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