L’infection maternelle est un facteur de risque de troubles neurodéveloppementaux. Les modèles murins d’activation immunitaire maternelle (AMI) peuvent élucider l’impact de l’infection sur le développement et le fonctionnement du cerveau. Ici, des lignes directrices générales et une procédure sont fournies pour produire une progéniture résistante et sensible exposée à l’AMI.
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Article de méthode
Génération d’un modèle reproductible d’activation immunitaire maternelle en milieu de gestation à l’aide de Poly(I:C) pour étudier la susceptibilité et la résilience de la progéniture
Dans cet article
Résumé
Résumé
L’activation immunitaire maternelle (MIA) pendant la grossesse est systématiquement liée à un risque accru de troubles neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques chez la progéniture. Les modèles animaux d’AIM sont utilisés pour tester la causalité, étudier les mécanismes et développer des diagnostics et des traitements pour ces troubles. Malgré leur utilisation répandue, de nombreux modèles MIA souffrent d’un manque de reproductibilité et presque tous ignorent deux aspects importants de ce facteur de risque: (i) de nombreux descendants sont résilients à l’AIM, et (ii) les descendants sensibles peuvent présenter des combinaisons distinctes de phénotypes. Pour augmenter la reproductibilité et modéliser à la fois la susceptibilité et la résilience à l’AIM, l’immunoréactivité de base (BIR) des souris femelles avant la grossesse est utilisée pour prédire quelles grossesses entraîneront une progéniture résiliente ou une progéniture présentant des anomalies comportementales et moléculaires définies après une exposition à l’AIM. Ici, une méthode détaillée d’induction de l’AIM par injection intrapéritonéale (i.p.) du poly(I:C) mimique viral double brin (ARNds) à 12,5 jours de gestation est fournie. Cette méthode induit une réponse inflammatoire aiguë chez la mère, ce qui entraîne des perturbations du développement cérébral chez la souris qui correspondent à des domaines similaires touchés dans les troubles psychiatriques et neurodéveloppementaux humains (NDD).
Introduction
Les données épidémiologiques établissent un lien entre l’infection maternelle et un risque accru de troubles psychiatriques et de troubles du spectre autistique (TSA)1,2,3,4,5,6,7. Le modèle murin MIA a été développé pour tester la causalité et le rôle mécaniste de l’IMA dans l’étiologie de ces troubles, ainsi que pour identifier des biomarqueurs moléculaires et développer des outils diagnostiques et thérapeutiques....
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Protocole
Tous les protocoles sont effectués sous l’approbation du comité institutionnel de soin et d’utilisation des animaux (IACUC) de l’Université de Californie-Davis.
1. Préparation des animaux
- Lors de l’acquisition d’animaux, gardez les paramètres suivants cohérents pour assurer une reproductibilité maximale.
- Fournisseur et emplacement du fournisseur : comme indiqué précédemment, les souris sauvages de type C57BL/6J présentent des réponses différentes à la même dose de poly(I:C) selon le fournisseur8. Choisissez un fournisseur et une souche de souris qui montrent une réponse cohérente. Po....
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Résultats
Tous les animaux exposés à 30 mg/kg de poly(I:C) à E12.5 ne produisent pas de progéniture avec des anomalies comportementales constantes 8,31. Bien que 30 mg/kg et 40 mg/kg de poly(I:C) produisent de manière fiable des comportements de maladie chez les mères, y compris une diminution des niveaux d’activité, des réponses hypothermiques et une perte de poids, et provoquent également des élévations significatives de l’IL-6, seul un sous-ensemble de portées exposées .......
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Discussion
L’infection maternelle modifie le cours du développement du cerveau chez l’homme et chez les rongeurs et les primates non humains 4,5,7. Ici, une procédure pour induire l’AMI chez les souris à un point temporel de mi-gestation en utilisant poly(I: C) est décrite. Cette méthode intègre l’évaluation du BIR avant la grossesse, ce qui augmente la reproductibilité et offre la possibilité d’étudier mécaniquement les mécanismes qui con.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont aucun conflit d’intérêts à divulguer.
Remerciements
Nous remercions la Dre Myka Estes pour sa persévérance à aborder la variabilité dans le modèle d’AIM chez la souris et tous les contributeurs d’Estes et al.8 pour leur travail qui a mené à l’élaboration du protocole méthodologique décrit ici. La recherche rapportée ici a été soutenue par NIMH 2P50 MH106438-06 (A.K.M.) et NIMH T32MH112507 (K.P.).
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| 0,9 % NaCl sérum physiologique sans endotoxine | Sigma-Aldrich | 7647-14-5 | Contrôle et véhicule pour boîte de Pétri Poly(I :C) |
| 35mm | Thomas Scientific | 1219Z45 | Utilisé pour retenir l’huile pendant le saignement de la queue |
| 7,5 % Gels TGX | Bio-rad | 4561084 | En option |
| Ancare Nestlets | Fisher Scientific | NC9365966 | En option |
| anti-& bêta ;-tubuline | Millipore | MAB3408 | en option |
| Bio-Plex Pro Souris Cytokines Standards Groupe I | Bio-rad | 171I50001 | |
| Bio-Plex Pro Kit de réactifs avec plaque plate | Bio-rad | 171304070M | |
| Albumine sérique bovine | ThermoFisher | 23209 | En option |
| Centrifugeuse | Eppendorf | 5810R | en option |
| Seringue à insuline Covidien Monoject 1/2 mL avec 28G x 1/2 po. Spectre d’aiguille | 552-58457-083 | ||
| Dithiothreitol | Sigma-Aldrich | D9779-10G | |
| Enrichissement de l’environnement | en option Bio-serv | K3327 et K3322 | En option |
| Ethovision | Noldus | Ethovision | En option |
| Fluorscent-agged seondary ntibodies | Li-cor | 925-32213 et 925-68072 | En option |
| Huile comestible de qualité alimentaire (comme l’olive, le canola ou les pépins de raisin) | Divers fournisseurs | Utilisé pour lubrifier la queue pendant les saignements de la queue | |
| HBSS | ThermoFisher | 14060040 | Facultatif |
| Polyinositique de haut poids moléculaire : acide polycytidilique | Invivogen | #tlrl-pic-5 | Utilisé pour établir le BIR |
| Humane Mouse Restrainer | des femelles AIMS | 1000 | Utilisé pour retenir la souris pendant la queue bleeds |
| Image Studio Software | Licor | 5.2 | Tampon |
| Laemmli | Bio-rad | 1610737EDU | |
| Luminex200 | ThermoFisher | APX10031 | |
| Microvette CB300 300&mu ; l Tube capillaire sérique | Sarstedt | 16.440.100 | |
| Poids moléculaire mixte polyinositique :acide polycytidilique | Sigma-Aldrich | #P0913 | Induction gestationnelle de MIA |
| monoclonal anti-MEF2A | AbCam | ab76063 | |
| Monoclonal anti-STAT3 | Facultatif Signalisation cellulaire | 12640S | Observateur facultatif |
| Noldus | Observateur | ||
| Tampon de blocage Odyssey (TBS) | Li-cor | 927-50003 | en option |
| Système d’imagerie Odyssey CLx | Li-cor | 9140 | en option Omnipure |
| PBS | Millipore | 65054L | en option Kit |
| dosage des protéines Pierce BCA | en option ThermoFisher | 23227 | |
| anti_TH polyclonal | en option Pel-Freez | P4101-150 | en option |
| Membrane PVDF | Bio-rad | 162-0177 | En option |
| Qsonica Sonicator Q500 | Fisher Scientific | 15-338-282 | En option |
| Bouchon de sang rapide | Petco | 17140 | |
| Seal-Rite 1,5 ml Tube à microcentrifuger, naturel non stérile | USA Scientific | 1615-5500 | |
| Support à souder | Amazon | B08Y12QC73 | Utilisé pour maintenir le tube capillaire pendant les saignements de la queue Graines |
| tournesol | Bio-serv | S5137-1 | Utiliser pour augmenter l’efficacité de la reproduction |
| Le Bio-Plex Pro Mouse IL-6 set,Bio-rad | 171G5007M | ||
| Base Tris | Fisher Scientific | BP152-1 | En option |
| Tween 20 | Bio-rad | 23209 | En option |
Références
- Adams, W., Kendell, R. E., Hare, E. H., Munk-Jørgensen, P. Epidemiological evidence that maternal influenza contributes to the aetiology of schizophrenia. An analysis of Scottish, English, and Danish data. The British Journal of Psychiatry: The Journal of Mental Science. 163 (4), 522-534 (1993).
- Brown, A. S., et al.
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Réimpressions et autorisations
