Article de méthode

Biodosage de létalité à l’aide d’Artemia salina L.

DOI :

10.3791/64472

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11 octobre 2022

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1CBIOS - Lusófona University's Center for Research in Biosciences & Health Technologies, Universidade Lusófona de Humanidades e Tecnologias, 2Facultad de Farmacia, Departamento de Ciencias Biomédicas (Área de Farmacologia; Nuevos agentes antitumorales, Acción tóxica sobre células leucémicas), Universidad de Alcalá de Henares, 3Instituto de Investigação do Medicamento (iMed.ULisboa), Faculdade de Farmácia da Universidade de Lisboa

* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

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Ce travail vise à évaluer et à examiner la procédure d’essai biologique de létalité d’Artemia salina , également identifiée comme test de létalité des artémias. Cette méthode simple et peu coûteuse donne des informations sur la toxicité générale (considérée comme une évaluation préliminaire de la toxicité) des échantillons, à savoir les produits naturels.

Résumé

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Les produits naturels sont utilisés depuis l’Antiquité pour produire des médicaments. De nos jours, il existe de nombreux médicaments chimiothérapeutiques obtenus à partir de sources naturelles et utilisés contre une pléthore de maladies. Malheureusement, la plupart de ces composés présentent souvent une toxicité systémique et des effets indésirables. Afin de mieux évaluer la tolérabilité de certains échantillons potentiellement bioactifs, la crevette salée (Artemia salina) est généralement utilisée comme modèle dans les études de létalité. Le test A. salina est basé sur la capacité des composés bioactifs étudiés à tuer les microcrustacés au stade larvaire (nauplii). Cette méthode représente un point de départ pratique pour les études de cytotoxicité, ainsi que pour le dépistage général de la toxicité des produits synthétiques, semi-synthétiques et naturels. Il peut être considéré comme un test simple, rapide et peu coûteux, comparé à de nombreux autres tests (cellules in vitro ou souches de levure, poisson zèbre, rongeurs) généralement adapté aux fins susmentionnées; De plus, il peut être facilement effectué même sans aucune formation spécifique. Dans l’ensemble, le dosage d’A. salina représente un outil utile pour l’évaluation préliminaire de la toxicité de composés sélectionnés et le fractionnement bioguidé d’extraits de produits naturels.

Introduction

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Les produits naturels issus de plantes, d’animaux ou de micro-organismes ont été un domaine d’intérêt croissant au fil des ans dans le développement de nouvelles molécules bioactives en raison de leur gamme variée d’activités biologiques et pharmacologiques1. Cependant, les effets secondaires associés, la résistance aux médicaments ou la spécificité insuffisante des agents, en particulier lorsqu’ils sont utilisés comme médicaments anticancéreux, représentent les principaux facteurs pouvant conduire à un traitement inefficace 1,2.

Au cours des dernières décenn....

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Protocole

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1. Préparation de l’équipement

  1. Acquérir du matériel d’éclosion disponible dans le commerce. Choisissez un endroit approprié pour installer l’équipement d’éclosion (figure 2A). Placez le récipient en forme d’entonnoir dans le support noir (inclus dans l’ensemble) et tournez l’entonnoir dans une direction appropriée pour voir la marque de niveau et le robinet.
  2. Pour fabriquer de l’équipement de migration fait à la main, coupez le dessus de deux bouteilles en plastique de 0,5 L (5,8 cm de diamètre) pour obtenir une hauteur finale de 12 cm. Créez un trou de 1,5 cm de diamètre d’un côté à 7 cm du fond de cha....

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Résultats

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La toxicité générale de certains produits naturels récemment étudiés par notre groupe a été évaluée par le biais du bioessai de létalité des artémias. Quatre extraits (Pa- P. ambigerus; Pb- P. barbatus; Pc-P. cylindraceus; et Pe- P. ecklonii) du genre Plectranthus , connus pour leur activité antioxydante (résultats non publiés), ont été testés. De plus, deux composés naturels (1 et 2) obtenus à partir de Plectranthus spp., et trois dérivés semi-synthétiques (3, 4, 5; .......

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Discussion

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Au cours des dernières années, la communauté scientifique a porté une attention accrue aux modèles alternatifs pour les examens de toxicité21. Outre le bioessai de létalité d’A. salina, d’autres méthodologies sont généralement utilisées pour évaluer la tolérabilité des échantillons et comprennent des essais biologiques sur les vertébrés (tels que les rongeurs), les invertébrés (tels que le poisson zèbre), les méthodes in vitro utilisant des souches ou des cellules de levure et le.......

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Déclarations de divulgation

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Les auteurs ne déclarent aucun conflit d’intérêts, financier ou autre.

Remerciements

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En mémoire du professeur Amilcar Roberto.

Ce travail a été soutenu financièrement par la Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT, Portugal) dans le cadre des projets UIDB/04567/2020 et UIDP/04567/2020 attribués au CBIOS et à la bourse de doctorat SFRH/BD/137671/2018 (Vera Isca).

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Plaques à 24 puitsThermo Fisher Scientific, Danemark174899Thermo Scientific Nunc Up Cell 24 multiparabole
Feuille d’aluminiumAlbal-Peut être acheté au supermarché
Artemio SetJBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Germany61066000Peut être acheté dans les animaleries
Microscope binoculaireCeti, Belgique  ; 1700.0000Flexum-24AED, 220-240 V, 50 Hz
Bouteilles--0,5 L Diamètre : 5,8 cm ; Hauteur : 12 cm
Kystes d’artémiasJBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Allemagne3090700Peut être acheté en animalerie
Sel d’artémiasJBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Allemagne3090600Peut être acheté en animalerie
Diméthylsulfoxyde (DMSO)Produits chimiques VWRCAS : 67-68-5  ; Pureté de 99 %
Pointes discartablesDiamantF171500Gamme de volume : 100 - 1000 & micro ; L
Microtubes EppendorfMARQUE7,80,546Microtubes, PP, 2 mL, BIO-CERT  ; PCR QUALITÉ
Erlenmeyer flaskVWR chemicals4,47,109volume : 100 mL
Bécher en verreNormax3.2111654NVolume : 1000 mL
GantsGuantes LunaGLSP3-GraphPad
PrismGraphPad Software, San Diego, CA, USA-GraphPadPrism version 5.00 pour Windows, www.graphpad.com, consulté le 5 février 2021 ; statistiques commerciales logiciel d’analyse Fait
maison A. salina Grower  ;-  ;-Faitmaison : deux bouteilles en plastique reliées par un tuyau
Colle chaudeParksidePHP500E3230 V, 50 Hz, 25 W
IncubateurHeidolph Instruments, Danemark  ;-Un équipement Heidolph Unimax 1010 et un Heidolph Inkubator 1006
LightRoblanSKYC3008FE14ampoule LED
MicropipettesVWR chemicals613-5265Plage de volume : 100 - 1000 µ ; L
Dichromate de potassium (K2Cr2O7)Produits chimiques VWRCAS : 7778-50-9  ; Pureté de 99 %
Pompe ProAir a50JBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Allemagne  ;-Inclus dans le kit Artemio Set+1
Tube en caoutchouc--1 cm de diamètre extérieur et 0,9 cm de diamètre intérieur
Tige d’agitationVWR chemicals441-0147figure-materials-1 6 mm, 250 mm
TermomètreVWR chemicals620-08210 - 100 ° ; L

Références

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  1. Ntungwe, N. E., et al. Artemia species: An important tool to screen general toxicity samples. Current Pharmaceutical Design. 26 (24), 2892-2908 (2020).
  2. Cragg, G. M., Newman, D. J. Natural products: A continuing sour....

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Mots-clés

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