Summary
In dit protocol werd een knieartrosemodel opgesteld met behulp van de aangepaste Videman-methode en worden de operatieprocedures en voorzorgsmaatregelen van acupodomie beschreven. De effectiviteit van acupotomie is aangetoond door de mechanische eigenschappen van quadriceps femoris en pees en de mechanische en morfologische eigenschappen van kraakbeen te testen.
Abstract
Artrose van de knie (KOA) is een van de meest voorkomende ziekten op de orthopedische afdeling, waardoor de kwaliteit van leven van mensen met KOA ernstig afneemt. Van de verschillende pathogene factoren is de biomechanische onbalans van het kniegewricht een van de belangrijkste oorzaken van KOA. Acupotomologie is van mening dat het herstellen van de mechanische balans van het kniegewricht de sleutel is tot de behandeling van KOA. Klinische studies hebben aangetoond dat acupotomie de pijn effectief kan verminderen en de mobiliteit van de knie kan verbeteren door adhesie, contractuur van zachte weefsels en stressconcentratiepunten in spieren en pezen rond het kniegewricht te verminderen.
In dit protocol gebruikten we de aangepaste Videman-methode om een KOA-model op te stellen door de linker achterpoot in een rechte positie te immobiliseren. We hebben de werkwijze en de voorzorgsmaatregelen met betrekking tot acupotomie in detail geschetst en de werkzaamheid van acupotomie geëvalueerd in combinatie met de theorie van "Modulerende spieren en pezen om botaandoeningen te behandelen" door de detectie van de mechanische eigenschappen van quadriceps femoris en pees, evenals kraakbeenmechanica en morfologie. De resultaten tonen aan dat acupotomie een beschermend effect heeft op het kraakbeen door de mechanische eigenschappen van de zachte weefsels rond het kniegewricht aan te passen, de kraakbeenstressomgeving te verbeteren en de kraakbeendegeneratie te vertragen.
Introduction
Artrose van de knie (KOA) is de meest voorkomende vorm van artrose, vaak erkend als een aandoening van het hele gewricht die wordt gekenmerkt door gewrichtskraakbeendegeneratie, die zich klinisch manifesteert als pijn, zwelling en beperkte beweging van de aangetaste gewrichten1. Volgens recente epidemiologische statistieken zou KOA in 2020 wereldwijd 654,1 miljoen personen hebben getroffen die 40 jaar of ouder waren. De prevalentie en incidentie van KOA stijgen met de leeftijd, zijn het hoogst bij volwassenen van middelbare leeftijd en oudere volwassenen en treffen meer vrouwen dan mannen. De prevalentie van KOA zal waarschijnlijk toenemen als gevolg van de vergrijzing van de bevolking en de obesitas-epidemie wereldwijd, wat een groeiende bedreiging vormt voor de wereldwijde volksgezondheid. Leeftijd, geslacht, obesitas, trauma en andere gecompliceerde risicofactoren die verband houden met KOA hebben allemaal een directe invloed op knie-instabiliteit, waardoor een biomechanische onbalans in kniegewrichten een van de belangrijkste oorzaken van KOA3 is.
Onder normale fysiologische omstandigheden bevindt het kniegewricht zich in een staat van mechanisch evenwicht, waardoor de mechanische belastingen in het gewricht gelijkmatig over het kraakbeen worden verdeeld. Elke mechanische onbalans in het kniegewricht kan leiden tot abnormale belasting van het kraakbeen, wat resulteert in kraakbeendegeneratie en het ontstaan van KOA4. Het spier-peessysteem is het belangrijkste dynamische systeem dat het mechanische evenwicht van het kniegewricht in stand houdt. De gecoördineerde beweging van het strek- en buigspier-peessysteem kan de belasting die wordt gegenereerd door de beweging op het kraakbeenoppervlak gelijkmatig verdelen, waardoor de metabole onbalans van lokale kraakbeenspanningen wordt vermeden die verder gaan dan de fysiologische belasting die resulteert in kraakbeenverlies5. Verminderde spierkracht is de belangrijkste oorzaak van intramusculaire bewegingsstoornis en kraakbeenschade, die kan optreden vóór symptomatische KOA.
KOA kan ook arthrogene spierremming (AMI) induceren, wat zich manifesteert als spierzwakte en verminderde spierkracht rond de knie6. Van deze spieren functioneert de quadriceps femoris-groep als de enige knie-extensor, een belangrijke structuur bij het handhaven van de stabiliteit van het kniegewricht. Studies hebben aangetoond dat een afname van de dwarsdoorsnede van de quadriceps en spierkracht significant en positief gecorreleerd is met KOA-progressie7. De afname van de kracht van de quadriceps beïnvloedt het looppatroon, de kniestabiliteit, bewegingspatronen en vele andere functies. Bovendien schaadt de afname van de spierkracht de peesfunctie, wat zich manifesteert als een afname van de peesstijfheid, elastische modulus en andere biomechanische eigenschappen8. Bij langdurig herstel van overbelasting kunnen veranderingen zoals verkleving en contractuur optreden in de spieren en pezen van het kniegewricht, waardoor hun mechanische eigenschappen worden beschadigd, gewrichtsinstabiliteit ontstaat en uiteindelijk een vicieuze cirkel van pathologische veranderingen van KOA ontstaat. Het is daarom van cruciaal belang voor een KOA-behandeling om de mechanische eigenschappen van het spier-peessysteem te verbeteren en de mechanische balans van de gewrichten te herstellen.
Een van de oorzaken van KOA is biomechanische onbalans de belangrijkste inducerende factor voor kniepijn, disfunctie, inflammatoire laesies en kraakbeendegeneratie9. Daarom is de sleutel tot de behandeling van KOA het herstellen van de biomechanische balans van het kniegewricht. Acupotomologie is van mening dat de etiologie en pathogenese van KOA "mechanische onbalans" zijn. Wanneer de mechanische eigenschappen van de zachte weefsels rond de knie abnormaal veranderen, verliest het kniegewricht zijn mechanische evenwicht en versnelt de abnormale mechanische stressomgeving van het gewricht de degeneratie, waardoor ontstekingsstimulatie de verklevingen, contracturen en verdere achteruitgang van de gewrichtsstabiliteit verder verergert. Deze vicieuze cirkel ontwikkelt zich uiteindelijk tot KOA. Door verklevingen en contracturen van zacht weefsel los te maken en de stressconcentratie in de spieren en pezen te verminderen, verbetert acupotomie in combinatie met de theorie van "Modulerende spieren en pezen om botaandoeningen te behandelen" de mechanica van zacht weefsel en "moduleert spieren en pezen", wat de mechanische belasting van het gewricht in evenwicht brengt, waardoor kraakbeendegeneratie effectief wordt verlicht en "botaandoeningen worden behandeld"10. In termen van selectie van diermodellen, op basis van het doel van deze studie, hebben we het KOA-model voorbereid door de aangepaste Videman-methode van immobilisatie van de linker achterpootextensie.
Dit artikel beschrijft de totstandkoming van het KOA-model met behulp van de gemodificeerde Videman-methode van immobilisatie van de extensie van de linker achterpoot en de operatiemethode en voorzorgsmaatregelen van acupotomie. We tonen de effectiviteit van acupotomie aan door de mechanische eigenschappen van quadriceps femoris en pees te testen en veranderingen in gewrichtskraakbeenspanning en morfologie te detecteren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle dierproeven werden beoordeeld en goedgekeurd door de Dierethische Commissie van de Beijing University of Chinese Medicine (nr. BUCM-4-2022010101-1097). In dit protocol werden 24 mannelijke Nieuw-Zeelandse konijnen van 6 weken oud gehuisvest onder een specifieke voorwaarde, namelijk 20-25 °C, 50-60% luchtvochtigheid en een circadiane cyclus van 12 uur licht/12 uur donker, met vrije toegang tot een regelmatig chow-dieet. De konijnen werden verdoofd en opgeofferd door een combinatie van diepe anesthesie en luchtembolisatie. Pijn is een van de typische pathologische kenmerken van KOA en is ook een van de belangrijkste indicatoren die worden gebruikt om diermodellen van KOA en interventiemethoden te evalueren, dus pijnstillers worden niet gebruikt tijdens de modelvoorbereiding.
1. Het KOA konijnenmodel
- Verdoof konijnen met 3% pentobarbitalnatrium (30 mg/kg) intraveneus aan de oorrand. Om het juiste niveau van anesthesie te bevestigen, moet u letten op een aanzienlijk verzwakte of afwezige hoornvliesreflex en de afwezigheid van pijn bij het vastklemmen van de huid met een hemostatische pincet. Voeg tijdens de anesthesie elke 15 minuten 2-3 druppels glijmiddel toe aan de ogen van de konijnen om te voorkomen dat de ogen van de konijnen uitdrogen.
- Na de anesthesie fixeert u elk konijn in rugligging en trekt u de linker achterpoot in een volledig gestrekte positie.
- Fixeer de linker achterpoot van elk konijn in de uitgeschoven positie.
- Gebruik als eerste laag medische tape om de huid van het konijn van de lies tot het enkelgewricht te bedekken.
- Wikkel als tweede laag 36 mm brede, dubbelzijdige schuimtape over de medische tape en wikkel vervolgens een polymeerverband van de lies naar het enkelgewricht. Zorg ervoor dat het kniegewricht 180° recht is en het enkelgewricht 60° dorsaalgebogen.
- Immobiliseer als derde laag de gewrichten met kleine spalken aan de voor- en achterkant van de knie- en enkelgewrichten en wikkel stalen gaas om de buitenste laag om te beschermen tegen beten. Stel de tenen van de konijnen bloot om te zien of de bloedcirculatie normaal is.
- Immobiliseer de dieren gedurende 6 weken om het KOA-model vast te stellen (Figuur 1).
OPMERKING: 1) Inspecteer tijdens de voorbereiding van het model de mallen om de dag. Als er schimmels los of losgelaten zijn, verdoven de konijnen dan en immobiliseer de linker achterpoten opnieuw in een gestrekte positie. 2) Leg beschermende matten op de bodem van de kooien om te voorkomen dat de ledematen van de konijnen vast komen te zitten en letsel veroorzaken.
2. Acupotomie interventie
OPMERKING: Verdoof de konijnen vóór het begin van de acupotomie-interventie met 3% pentobarbital-natrium (30 mg/kg) door middel van intraveneuze injectie met de oorrand.
- Bepaal de behandelpunten.
- Scheer de vacht van het kniegewricht van de linker achterpoot van het konijn af.
- Palpeer de mediale femurspierpees van het konijnenkniegewricht, de insertie van de rectus femorale pees, de insertie van de biceps femorispees en de slijmbeurs van ganzenvoet. Markeer pathologische verharding van lokale spieren met een steriele huidmarker. Desinfecteer het kniegewricht drie keer met afwisselend medische jodofoor en 75% medische alcohol.
- Operatie van acupotomie
- Houd het acupotomiemes evenwijdig aan de rijrichting evenwijdig aan de pees en de lengteas van de ledemaat.
- Gebruik de duim van de linkerhand om op de huid te drukken die het markeringspunt binnenkomt en beweeg zijwaarts zodat bloedvaten en zenuwen aan de ventrale kant van de duim worden gescheiden.
- Met het acupotomiehandvat in de rechterhand drukt u snel met een kleine kracht naar beneden, zodat het acupotomiemesje onmiddellijk door de huid gaat. Beweeg het acupotomiemes langzaam naar de lokale spierverharding en maak longitudinale sneden en zwaaien zijwaarts.
- Nadat de acupotomie-operatie is voltooid, desinfecteert u het kniegewricht opnieuw en brengt u een pleister aan.
- Voer deze handeling eenmaal per week uit gedurende 4 weken (Figuur 2).
OPMERKING: 1) Als er geen verharding of koordachtig weefsel wordt aangeraakt bij het inbrengen van de pees van de vastus medialis, vastus lateralis, rectus femoris, biceps femoris of de anserine bursa, moet de acupotomienaald worden gebruikt om hun peesaanhechtingen direct los te maken. 2) Immobiliseer tijdens de acupotomie-interventie niet de linker achterpoten van konijnen in de acupotomiegroep en de modelgroep in extensiepositie.
3. Elastische modulus van quadriceps femoris
OPMERKING: 1) Dit experiment maakte gebruik van het real-time shear wave elastography (SWE) echografie diagnostisch instrument om de elastische modulus van de quadriceps femoris in vivo in elke groep konijnen te meten. 2) De tester moet een ervaren echoscopist zijn op het gebied van ultrasone detectie. Bij het meten moet de ultrasone sonde voorzichtig op het huidoppervlak van de quadriceps worden geplaatst om lokale spierspanning te voorkomen. Metingen moeten worden uitgevoerd wanneer het dier in een rustige toestand verkeert, zonder worsteling of activiteit. Als het dier actief is, wacht dan tot het kalm is voordat u de test uitvoert.
- Scheer de vacht om de huid in het quadricepsgebied van de linker achterpoot bloot te leggen.
- Gebruik conventionele tweedimensionale echografie om de musculo-abdomen van de quadriceps te lokaliseren en het interessegebied (ROI) te bepalen, ingesteld op een diepte van 1-2 cm.
- Start de SWE-modus voor inspectie.
- Stel het interessegebied gelijkmatig in op een cirkelvormig gebied met een diameter van 2 mm en het interessegebied op ~0,5-1 cm diep vanaf het huidoppervlak.
- Gebruik het ultrasone diagnostische instrument om een akoestische stralingskrachtimpuls te genereren om het spierweefsel te stimuleren en weefselelastografie te verkrijgen.
- Wacht 2-3 seconden totdat het beeld is gestabiliseerd en bevries het beeld. Activeer de Q-BOX-functie van het instrument om de Young's modulus van de quadricepsspier te meten.
- Wacht tot het systeem automatisch de maximale, minimale en gemiddelde waarden (eenheid: KPa) van Young's modulus van de ROI berekent. Selecteer drie ROI's op dezelfde diepte voor drie metingen en neem de gemiddelde waarde voor statistische analyse.
NOTITIE: De tester moet een ervaren echoscopist zijn op het gebied van ultrasone detectie. Bij het meten moet de ultrasone sonde voorzichtig op het huidoppervlak van de quadriceps worden geplaatst om lokale spierspanning te voorkomen. Metingen moeten worden uitgevoerd wanneer het dier in een rustige toestand verkeert, zonder worsteling of activiteit. Als het dier actief is, wacht dan tot het kalm is voordat u de test uitvoert.
4. Meten van de contractiekracht van quadriceps femoris
OPMERKING: Na de meting van de contractiekracht van de quadriceps femoris werden de konijnen geëuthanaseerd door middel van luchtembolie onder narcose.
- Verdoof de konijnen met 3% pentobarbitalnatrium (30 mg/kg) intraveneus aan de oorrand. Om te bevestigen dat het juiste niveau van anesthesie is bereikt, moet u letten op een aanzienlijk verzwakte of afwezige hoornvliesreflex en de afwezigheid van pijn bij het vastklemmen van de huid met een hemostatische pincet. Voeg tijdens de anesthesie elke 15 minuten 2-3 druppels glijmiddel toe aan de ogen van de konijnen om te voorkomen dat de ogen van de konijnen uitdrogen.
- Leg de quadricepsspieren bloot en bevestig de spanningstransducer.
- Snijd de huid onder de knieschijf, langs de lengteas van de ledemaat omhoog tot aan de basis van de dij, en blijf de huid 3-4 cm naar boven snijden. Trek voorzichtig de huid en fascia eraf en leg de spier bloot. Snijd het patellaligament door en scheid voorzichtig de quadriceps van de iliacale overgang, waarbij de quadriceps in verbinding blijven met het iliacium.
- Ligate de chirurgische hechtingen op de peesovergang tussen de patella en de quadricepsspier. Rek de spier in zijn natuurlijke staat tot zijn volledige lengte en bevestig hem vervolgens aan de spanningstransducer. Houd de ligatielijn op de spier in een rechte lijn met de ligatielijn op de krachttransducer.
- Bevestig de spanningsopnemer aan de beugel. Sluit de signaalacquisitielijn op de spanningstransducer aan op de processor van het biosignaalacquisitiesysteem.
- Meet de contractiele prestaties van de quadricepsspier.
- Plaats de elektroden evenwijdig aan de buik van de quadriceps en vermijd elk contact tussen de elektroden.
- Druk op de oscilloscoopknop. Pas de positie van de krachttransducer op de beugel aan om de basislijn op nul te houden. Selecteer de stimulatieparameters van de stimulator met een golfbreedte van 5 ms en een vertraging van 10 ms.
- Gebruik eerst een enkele stimulus en pas de stimulusintensiteit geleidelijk aan vanaf nul met een increment van 0,1 V per keer. Observeer de veranderingen in de spiercontractiecurve en contractieamplitude totdat de maximale amplitude van de quadriceps is bepaald. Noteer het voor latere statistieken.
- Gebruik een clusterstimulus en gebruik de stimulusamplitude die de maximale amplitude van de enkele contractie induceert als basislijn om de spier continu te stimuleren en de stimulusfrequentie geleidelijk te verhogen. Observeer de veranderingen in de spiercontractiecurve totdat de maximale contractieamplitude (Pt) van de quadriceps is bepaald. Noteer het voor latere statistieken.
OPMERKING: 1) Na elke spiercontractie moet de spier 30 seconden de tijd krijgen om te ontspannen, waarbij de spierbufferoplossing continu op de spier wordt gedruppeld. 2) Beoordeel tijdens de operatie de anesthesiestatus door de ooglidreflex, het ademhalingsritme, de spierontspanning en de huidknijpreactie van de konijnen te controleren.
5. De mechanische prestaties van de quadricepspees
- Voorbewerking: Meet op de dag van testen de lengte, breedte en dikte van de quadricepspees met een schuifmaat en installeer een speciale antislipklem in de vermoeiingstestmachine. Herhaal het laden en lossen 15x voor voorbewerking.
- Stressontspanningstest: Gebruik de sensor van 0 N tot 100 N, rek deze uit met een snelheid van 5 mm/min totdat deze de vereiste lengte heeft bereikt en begin dan met het verzamelen van gegevens. Stel de tijd voor het verzamelen van computergegevens in op t (0) en verzamel gegevens elke 0.1 s, gedurende 1,800 s. Noteer na het bereiken van de ingestelde tijd gegevens en curves.
- Trekproef: Gebruik de sensor van 0 N tot 100 N en rek deze uit met een snelheid van 5 mm/min tot de maximale belasting totdat het sample uit elkaar wordt getrokken. Bereken na de test de maximale verplaatsing, de uiteindelijke belasting en de stijfheid van het sample.
6. Druk van het gewrichtscontactoppervlak en druk per oppervlakte-eenheid van het kraakbeen
- Bevestig de dijbeen- en scheenbeenmonsters aan beide zijden in een rechte positie op het armatuur en voer een voorspanningstest uit. Meet het geschatte bereik van het kniegewricht, knip het drukgevoelige papier in dezelfde vorm en sluit het af met plasticfolie.
- Plaats het verzegelde drukgevoelige papier tussen het scheenbeen en het dijbeen en voer een druktest uit op het kniegewricht met een druk van 5 mm/min en een maximale druk van 50 N. Houd de druk gedurende 2 minuten vast totdat deze 50 N bereikt wanneer het drukgevoelige papier stabiel gekleurd is.
- Verwijder na 2 minuten het drukgevoelige papier, fixeer het gekleurde oppervlak op een vel papier van A4-formaat en maak afbeeldingen met de schaal opzij.
- Upload de afbeelding naar de computer. Gebruik de software waarnaar wordt verwezen voor oppervlaktemeting en meersegmentmeting voor onregelmatige cijfers. Meet de druk aan de binnen- en buitenkant van de gewrichten van het dijbeen en het scheenbeen en noteer de resultaten.
7. Safranin O/Fast Green kleuring van het kraakbeen van het kniegewricht
- Neem na het einde van de acupotomie-interventie de kraakbeen-subchondrale botcomplexweefsels en bedin ze in paraffine. Snijd de voorbereide weefselwasblokken in plakjes en bereid glaasjes voor. Deparaffiniseer de geprepareerde weefselglaasjes met omgevingswasoplossing (I) en omgevingswasoplossing (II) elk gedurende 15 minuten; dompel ze vervolgens achtereenvolgens in xyleen en watervrije ethanol (1:1), watervrije ethanol (I), 95% ethanol, 85% ethanol en 75% ethanol, 2-5 minuten per stap; En tot slot, laat ze 15 minuten weken in gedestilleerd water.
- Voer kleuring uit.
- Kleur de objectglaasjes gedurende 1 minuut met een Fast Green-oplossing. Haal tijdens dit proces de objectglaasjes uit de oplossing en observeer ze onder de microscoop totdat het weefsel donkergroen gekleurd is.
- Kleurscheiding: Spoel de overtollige Fast Green-oplossing af met ultrapuur water. Week de glaasjes snel in 1% azijnzuuroplossing gedurende 5 - 10 seconden. Spoel het glaasje opnieuw af met ultrapuur water.
- Kleur de objectglaasjes gedurende 10-15 minuten in Safranine O-oplossing totdat het kraakbeen rood gekleurd is.
- Dehydrateer en verhelder het weefsel, sluit de glasplaatjes af en observeer ze onder de microscoop.
- Week de objectglaasjes achtereenvolgens 3 - 5 seconden in 75% ethanol, 85% ethanol, 95% ethanol en 100% ethanol.
- Dompel de objectglaasjes achtereenvolgens gedurende 10 minuten in omgevingswasoplossing (I) en omgevingswasoplossing (II). Haal de glaasjes eruit en laat het neutrale harsachtige medium op de voorkant van de glaasjes vallen, vermijd het weefsel. Plaats de rand van het dekglaasje op het glaasje en leg het dan langzaam neer om de neutrale balsem te bedekken. Verwijder de lucht en vermijd luchtbellen. Veeg het extra xyleen en de neutrale balsem eraf en laat het een nacht op kamertemperatuur staan.
- Bekijk de objectglaasjes onder de microscoop en maak beelden. Selecteer voor elke groep zes monsters van konijnenkniekraakbeen en selecteer willekeurig vier verschillende weergavevelden voor elk monster voor evaluatie. Scoor de kraakbeenhistologie van elke groep volgens de Mankin-methode (tabel 1).
8. Statistische analyse
- Gegevens uitdrukken als gemiddelde ± standaarddeviatie (
± s). - Voer eenrichtingsvariantieanalyse (ANOVA) en LSD-test uit voor het bepalen van de statistische significantie van vergelijkingen met meerdere groepen.
- Beschouw verschillen die statistisch significant zijn wanneer P < 0,05.
± s).Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Experimentele resultaten van mechanische eigenschappen van quadriceps femoris en pees
Om het effect van acupotomologie op de mechanische eigenschappen van quadriceps femoris bij konijnen met KOA te evalueren, gebruikten we respectievelijk real-time shear wave elastische echografie en een spierspanningstransducer. Vergeleken met de controlegroep was Young's modulus van de quadriceps femoris in de KOA-groep afgenomen (P < 0,05). Vergeleken met de KOA-groep was Young's modulus van de acupotomiegroep verhoogd (P < 0,05, figuur 3A). In termen van het contractievermogen van de quadriceps femoris, vergeleken met de controlegroep, waren de amplitude van enkelvoudige contractie en de tetanische contractieamplitude van de quadriceps femoris significant verminderd in de KOA-groep (P < 0,05, P < 0,01). Vergeleken met de KOA-groep waren de amplitude van enkelvoudige contractie en de tetanische contractieamplitude van de quadriceps femoris in de acupotomiegroep significant verhoogd (P < 0,05, P < 0,01, figuur 3B,C). Deze resultaten tonen aan dat acupotomie de modulus en spiercontractiliteit van quadriceps femoris bij konijnen met KOA zou kunnen verbeteren.
Om het effect van acupodomie op de mechanische eigenschappen van de quadricepspees bij konijnen met KOA te evalueren, hebben we een trektest en een stressrelaxatietest op de quadricepspees uitgevoerd. In termen van de trekkarakteristieken van de quadricepspees waren in vergelijking met de controlegroep de uiteindelijke belasting en maximale verplaatsing van de quadricepspees in de KOA-groep significant afgenomen (P < 0,01, P < 0,01), terwijl de stijfheid van de quadricepspees in de KOA-groep een neerwaartse trend vertoonde (P > 0,05). Vergeleken met de KOA-groep waren de uiteindelijke belasting en maximale verplaatsing van de quadricepspees in de acupotomiegroep significant afgenomen (P < 0,01, P < 0,01), en de stijfheid van de quadricepspees in de acupotomiegroep vertoonde een opwaartse trend (P > 0,05, figuur 4A-C). In termen van de stressrelaxatiesnelheid, vergeleken met de controlegroep, was de stressrelaxatiesnelheid van de quadricepspees in de KOA-groep afgenomen (P < 0,05). Vergeleken met de KOA-groep was de stressrelaxatiesnelheid van de quadricepspees in de acupotomiegroep verhoogd (P < 0,05, figuur 4D). Deze resultaten tonen aan dat acupotomie de trek- en stressontspanningskenmerken van de quadricepspees bij konijnen met KOA kan verbeteren.
Experimentele resultaten van druk en druk per oppervlakte-eenheid op het kraakbeencontactoppervlak en kraakbeenmorfologie
In termen van de maximale druk op het kraakbeencontactoppervlak was er in vergelijking met de controlegroep geen significant verschil in de maximale druk op het kraakbeencontactoppervlak in de KOA-groep (P > 0,05), maar er was een neerwaartse trend. Vergeleken met de KOA-groep was er geen significant verschil in de maximale druk op het kraakbeencontactoppervlak in de acupotomiegroep (P > 0,05), maar er was wel een opwaartse trend (Figuur 5A). In termen van de druk per oppervlakte-eenheid van het kraakbeencontactoppervlak, vergeleken met de controlegroep, was er geen significant verschil in de maximale druk per oppervlakte-eenheid in de KOA-groep (P > 0,05), maar er was een neerwaartse trend. Vergeleken met de controlegroep was er geen significant verschil in de maximale druk per oppervlakte-eenheid in de acupotomiegroep (P > 0,05), maar er was wel een opwaartse trend (Figuur 5B). Deze resultaten tonen aan dat de acupotomie-interventie de neiging had om de maximale druk en druk per oppervlakte-eenheid van het kraakbeencontactoppervlak te verhogen, wat wijst op positieve effecten op de kraakbeenstressomgeving.
Om het effect van acupodomie op de morfologie van het kraakbeen te evalueren, gebruikten we Safranin O-Fast Green-kleuring. In de controlegroep was het kraakbeenoppervlak glad; de chondrocyten in alle lagen waren netjes en ordelijk gerangschikt; de oppervlakkige chondrocyten waren gerangschikt in een spoelvorm; de middelste en diepe lagen chondrocyten waren gerangschikt in een zuilvormige opstelling; de vloedlijn was duidelijk en compleet; en er was geen pannusformatie (Figuur 6A). In de KOA-groep was het oppervlak van het kraakbeen ruw of waren er afbladderingsdefecten; het aantal oppervlakkige chondrocyten werd verminderd; De hiërarchie en rangschikking van chondrocyten waren ongeordend; de chondrocyten van de middelste laag vertoonden tekenen van uitdroging, samentrekking en necrose; Clustering van chondrocyten werd waargenomen; getijdenlijnen waren wazig of vervormd en er werd een breuk gezien; In sommige gebieden waren herhaalde getijdenlijnen te zien; bloedvaten kunnen door de vloedlijn in het niet-verkalkte kraakbeen zijn terechtgekomen; of er was sprake van pannusvorming (Figuur 6B). In de acupotomiegroep was de oppervlaktelaag van kraakbeen relatief glad; de structuur van chondrocyten was normaal; de rangschikking van chondrocyten in alle lagen was relatief netjes; de vloedlijn was vrij of af en toe waren er herhaalde vloedlijnen; er was geen pannusformatie (Figuur 6C). In termen van kraakbeenmorfologische scores, vergeleken met de controlegroep, was de kraakbeen Markin-score van de KOA-groep significant verhoogd (P < 0,01). Vergeleken met de KOA-groep was de kraakbeen Markin-score van de acupotomiegroep significant verlaagd (P < 0,01, figuur 6D). Deze resultaten tonen aan dat de kraakbeenintegriteit van konijnen met KOA was aangetast en dat acupotomie-interventie de degeneratie van kraakbeen zou kunnen vertragen en een beschermend effect op kraakbeen zou kunnen hebben.
Figuur 1: Aangepaste Videman-methode om een model van knieartrose op te stellen. (A) Materialen die nodig zijn voor het opstellen van het KOA-model. (B) Gebruik medische drukgevoelige tape om de linker achterpoot van konijnen te bedekken. (C) Wikkel polymeerverband om de linker achterpoot van konijnen. (D,E) Gebruik spalken om de knie- en enkelgewrichten van het konijn te immobiliseren. (F) Wikkel gaas om te voorkomen dat de konijnen gaan knagen. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 2: Operatiemethode acupotomie-interventie. (A) Voorbereiding van de huid bij het kniegewricht van de linker achterpoot van een konijn. (B) Selecteer inbrengpunten en gebruik een chirurgische huidmarker om de posities te markeren. (C) Gebruik medische jodofoor om te desinfecteren. (D) Zet druk en scheid om zenuwen en bloedvaten te vermijden. (E) Doorbreek de acupotomie en opereer. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 3: Mechanische eigenschappen van de quadriceps femoris. (A) Analyse van Young's modulus van quadriceps femoris; (B) analyse van enkelvoudige contractieamplitude van quadriceps femoris; (C) analyse van de tetanische contractieamplitude van quadriceps femoris. Waarden zijn gemiddelden ± SD. N = 6 per groep. Vergeleken met de overeenkomstige controlegroep: *P < 0,05 en **P < 0,01; vergeleken met de overeenkomstige modelgroep: #P < 0,05 en ##P < 0,01. Afkorting: KOA = knieartrose. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 4: Mechanische eigenschappen van de quadricepspees. (A) Analyse van de uiteindelijke belasting van de quadricepspees; B) analyse van de maximale verplaatsing van de quadricepspees; (C) analyse van de stijfheid van de quadricepspees; (D) stressontspanning van de quadricepspees. Waarden zijn gemiddelden ± SD. N = 6 per groep. Vergeleken met de overeenkomstige controlegroep: *P < 0,05 en **P < 0,01; vergeleken met de overeenkomstige modelgroep: #P < 0,05 en ##P < 0,01. Afkorting: KOA = knieartrose. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 5: Druk op het contactoppervlak van het kraakbeen. (A) Analyse van de maximale druk op het contactoppervlak van het kraakbeen; B) analyse van de druk per oppervlakte-eenheid van het kraakbeencontactoppervlak. Waarden zijn gemiddelden ± SD. N = 6 per groep. Afkorting: KOA = knieartrose. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 6: Kleuring van kraakbeen met Safranin O-Fast green en markinescore van het kraakbeen. (A) controlegroep, (B) modelgroep, (C) acupotomiegroep, (D) analyse van de markinescore van het kraakbeen. Waarden zijn gemiddelden ± SD. N = 6 per groep. Vergeleken met de overeenkomstige controlegroep: **P < 0,01; vergeleken met de overeenkomstige modelgroep: ##P < 0,01. Schaalbalken = 50 μm (A-C). Afkorting: KOA = knieartrose. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
| Ik. Structuur | III. Kleuring | ||
| een. Normaal | 0 | een. Normaal | 0 |
| b. Onregelmatigheden in het oppervlak | 1 | b. Lichte reductie | 1 |
| c. Pannus en onregelmatigheden in het oppervlak | 2 | c. Matige reductie | 2 |
| d. Schisis naar de overgangszone | 3 | d. Ernstige reductie | 3 |
| e. Spleten naar radiale zone | 4 | e. Geen kleurstof genoteerd | 4 |
| f. Schisis tot verkalkte zone | 5 | ||
| g. Volledige desorganisatie | 6 | ||
| II. Cellen | IV. Integriteit van het getij | ||
| een. Normaal | 0 | een. Intact | 0 |
| b. Diffuse hypercellulariteit | 1 | b. Doorkruist door bloedvaten | 1 |
| c.Klonen | 2 | ||
| d. Hypocellulariteit | 3 | ||
Tabel 1: Gewijzigde Mankin-score.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Een geschikt diermodel is een van de belangrijkste factoren om experimentele doelstellingen te bereiken en een specifieke wetenschappelijke vraag op te helderen. Deze studie was gebaseerd op de theorieën van "Zongjin die botten controleert en gewrichten smeert" en "mechanische onbalans" in de acupotomologie, met als doel de wetenschappelijke connotatie achter de behandeling van KOA te verklaren door "spieren en pezen te moduleren om botaandoeningen te behandelen" in acupotomietherapie. Met andere woorden, acupotomie verbetert de abnormale mechanische omgeving van het kraakbeen door de mechanische eigenschappen van de zachte weefsels rond de knie te reguleren om de degeneratie te vertragen en het kraakbeen te beschermen. KOA-diermodellen worden over het algemeen ingedeeld in twee categorieën: spontane en geïnduceerde modellen. Spontane KOA-modellen worden minder gebruikt vanwege de relatief lange modelleringsduur en grotere beperkingen. Geïnduceerde KOA-modellen kunnen worden vastgesteld door chirurgische benaderingen (bijv. gemodificeerde Hulth-methode, meniscectomie, ruptuur van de voorste kruisband, intra-articulaire injectie en gewrichtsimmobilisatie). Chirurgische methoden, waaronder het doorsnijden van de mediale collaterale ligament, de voorste kruisband, het verwijderen van de mediale meniscus en andere structuren, worden gebruikt om het kniegewricht te destabiliseren, wat zal leiden tot interne mechanische onbalans en directe wrijving tussen de gewrichtsoppervlakken, waardoor KOA11 wordt geïnduceerd. Dit type model is meer geschikt voor de studie van traumatische artritis. De intra-articulaire injectie levert medicijnen af aan de holte van het kniegewricht om ontstekingen, stofwisselingsstoornissen van chondrocyten en toxische reacties van chondrocyten in de gewrichtsholte te induceren, waardoor KOA wordt ontwikkeld terwijl het weinig effect heeft op gewrichtsstress12. Gewrichtsimmobilisatie ontwikkelt en verergert gewrichtskraakbeendegeneratie door de beweging van het kniegewricht te beperken, waardoor atrofie van de spieren en ligamenten rond de knie ontstaat, wat resulteert in veranderingen in gewrichtsspanning, waardoor een KOA-model wordt vastgesteld12.
De gemodificeerde Videman-methode is een gewrichtsimmobilisatiemethode, die meer in overeenstemming is met het pathologische proces van KOA veroorzaakt door zwakte van de menselijke kniespieren, zoals te zien is bij in onbruik geraakte atrofie van de kniespieren en ligamenten door de knie in een overbelaste positie te immobiliseren, wat resulteert in veranderingen in gewrichtsspanning en kraakbeendegeneratie. In vergelijking met chirurgische methoden die gewrichtsinstabiliteit veroorzaken met KOA tot gevolg, sluit de gemodificeerde Videman-methode beter aan bij de natuurlijke pathogenese van KOA waarbij peesletsel de eerste fase is, gevolgd door de pees- en botziekte; Het is daarom geschikter voor deze studie13. Aangezien het effect van acupodomie bij de behandeling van KOA in een vroeg of middenstadium duidelijker is, is de vormtijd 6 weken, wat consistent is met de pathologische veranderingen van KOA in het middenstadium. Tijdens het inductieproces van het model kan langdurig overstrekkend remmen leiden tot onbruik atrofie van de spieren rond het kniegewricht, en het ongemak in de linker achterpoot zorgt er vaak voor dat konijnen aan modelapparaten knagen. Omdat modelapparaten los kunnen zitten, is het noodzakelijk om regelmatig de dichtheid van het konijnachtige apparaat te controleren en ze op tijd te versterken. Bovendien is het noodzakelijk om altijd aandacht te besteden aan de bloedtoevoer van de ledematen van het konijn, zwelling, huidlaesies en symptomen van het spijsverteringskanaal, en indien nodig de modelapparaten te verwijderen. Omdat de konijnen tijdens dit proces in een staat van anesthesie verkeren, is het noodzakelijk om de konijnen warm te houden en in realtime aandacht te besteden aan de toestand van de konijnen totdat de konijnen wakker worden.
Acupotomie omvat een scalpelfunctie naast de bestaande acupunctuurnaald, waarbij het concept van acupunctuur wordt gebruikt om het lichaam binnen te dringen, met snij- en scheidingseffecten die superieur zijn aan een acupunctuurnaald, terwijl het veel minder trauma aan het menselijk lichaam toebrengt dan een scalpel14. Acupotomologie is van mening dat de hoofdoorzaak van KOA de mechanische onbalans is als gevolg van beschadiging van zacht weefsel rond het kniegewricht. Daarom is de sleutel tot de behandeling van KOA met acupotomie het herstellen van de mechanische balans van het kniegewricht. Wat betreft de selectie van behandelpunten, aan de ene kant, is acupodomie gebaseerd op de theorie van meridianen en pezen en neemt pijnlijke lokaliteit als acupunt. Aan de andere kant wordt acupotomie geleid door moderne anatomie en biomechanica en gelooft dat schade aan zacht weefsel rond het kniegewricht adhesie en samentrekking veroorzaakt, wat de mechanische balans van het kniegewricht vernietigt en hoge stresspunten in het gewricht veroorzaakt. Daarom worden weefseladhesie, samentrekking en hoge stresspunten vaak als behandelpunten genomen15,16.
De biomechanische analyse van zachte weefsels toont aan dat de aanhechtingspunten van pezen en botten zich meestal bevinden waar de spanningen van zacht weefsel geconcentreerd zijn, ook wel stressconcentratie genoemd, en waar pathologische producten zoals verklevingen, contracturen en koordachtige knobbeltjes gemakkelijk kunnen worden geproduceerd17. Bovendien heeft de klinische praktijk bewezen dat de gevoelige punten die door palpatie worden gevonden, vaak overlappen met de aanhechtingspunten van pezen en botten. Daarom werd in deze studie gekozen voor het inbrengen van de pees van vastus medialis, vastus lateralis, rectus femoris, biceps femoris en anserine bursa. Hoewel acupotomie minder trauma aan de weefsels veroorzaakt, is het nog steeds een methode van invasieve interventie. Tijdens de interventie is het noodzakelijk om de vierstappenprocedure van acupotomie strikt te volgen: locatie, richting, persen-loslaten en punctie. Bovendien moeten gebruikers voorzichtig zijn met de mate van ontspanning en behandelingsfrequentie van elke interventie. Het is raadzaam om elk behandelpunt 2-3 keer per week vrij te geven om overmatige schade aan de weefsels te voorkomen. Nadat de acupotomie-interventie is voltooid, wordt het kniegewricht van de linker achterpoot van het konijn opnieuw gedesinfecteerd en worden pleisters aangebracht op het ingangspunt van de acupotomie.
Stabiele kniegewrichten zijn een voorwaarde voor het handhaven van het mechanische evenwicht en het uitvoeren van normale fysiologische bewegingen18. Spieren en pezen - belangrijke factoren bij het handhaven van de stabiliteit van het kniegewricht - zijn visco-elastische weefselstructuren die de verschillende mechanische eigenschappen van spieren bij samentrekking en passieve trek bepalen, die belangrijke componenten zijn van de mechanische eigenschappen van spieren en zorgen voor de normale motorische functie van spieren. De elasticiteitsmodulus, een indicator van de mechanische eigenschappen van zachte weefsels, is positief gecorreleerd met veranderingen in de mechanische functie van de quadriceps femoris19. Fysiologisch gezien omvat contractie van skeletspieren twee vormen: enkelvoudige contractie en tetanische contractie. De eerste is de basiseenheid van spieractiviteit, terwijl de laatste voornamelijk een soepele beweging van skeletspieren produceert. Daarom wordt de maximale amplitude van enkelvoudige en tetanische contractie vaak gebruikt om de contractiele functie van de spieren te evalueren.
In onbruik geraakte skeletspieratrofie leidt tot verminderde tetanische contractie en maximale vrijwillige contractie, wat wijst op een afname van het spiercontractiele vermogen20. De afname van de spierkracht kan de functie van pezen beschadigen, wat zich manifesteert als een afname van de visco-elasticiteit van de pezen en een afname van het vermogen van pezen om vervorming te weerstaan8. Onder pathologische omstandigheden kunnen stressontspanning en trekeigenschappen van pezen afnemen, waardoor het kniegewricht uit balans raakt en de ontwikkeling van KOA wordt versneld. Daarom werden in deze studie de elastische modulus, amplitude van enkelvoudige contractie, amplitude van tetanische contractie van de quadriceps, trekkenmerken van de quadricepspees zoals ultieme belasting, maximale verplaatsing, stijfheid en de spanningsontspanning van de quadricepspees geselecteerd om het effect van acupotomie op de mechanische eigenschappen van de quadriceps te evalueren. De stress- en druktest van het draaggebied van het kraakbeen en de Safranin O/Fast Green-kleuring van het kraakbeen van het kniegewricht werden gebruikt om te evalueren of acupotomietherapie de mechanische eigenschappen van de quadriceps femoris verbeterde en een beschermend effect op het kraakbeen uitoefende. De experimentele resultaten tonen aan dat acupotomie in combinatie met de theorie van "het moduleren van spieren en pezen om botaandoeningen te behandelen" de stressomgeving van kraakbeen kan verbeteren, kraakbeendegeneratie kan vertragen en een beschermend effect op kraakbeen kan hebben door de mechanische eigenschappen van spieren en pezen van quadriceps te moduleren.
Er zijn bepaalde beperkingen aan dit experiment. Aan de ene kant hebben we de verkeerde uitlijning van de knie en het effect ervan op biomechanische onevenwichtigheden in de knie niet geëvalueerd. Aan de andere kant koos deze studie voor de gemodificeerde Videman-methode van immobilisatie van de linker achterpootextensie voor KOA-modellering om de rol van acupotomie bij het vertragen van kraakbeendegeneratie op te helderen door de mechanische eigenschappen van zachte weefsels rond de knie te moduleren. De rol van acupotomie bij artrose van de knie veroorzaakt door traumatische factoren, zoals ligament- en meniscusscheuren, is echter niet onderzocht. Bovendien is acupotomie-interventie een soort gesloten, minimaal invasieve operatie. In deze studie werden zowel palpatie- als acupotomie-interventies uitgevoerd zonder het zieke weefsel bloot te stellen in niet-directe zichtomstandigheden. Om de impact van subjectieve factoren op de experimentele resultaten te verminderen, werden zowel palpatie als acupotomie-interventie uitgevoerd door hetzelfde personeel. Hoewel er dus bepaalde beperkingen zijn, hebben deze geen invloed op de betrouwbaarheid van de conclusies van deze studie.
Samenvattend beschrijft dit artikel in detail de inductie van het KOA-model met de gemodificeerde Videman-methode (immobilisatie van de extensie van de linker achterpoot) en de acupotomie-interventie. Het toont ook de analyse van het mechanisme van acupotomiebehandeling voor KOA door middel van experimenten met de elastische modulus en contractiele functie van de quadriceps, de mechanische eigenschappen van de quadricepspees, de kracht en druk van het draaggebied van het gewrichtskraakbeen en de Safranin O/Fast Green-kleuring van het kraakbeen van het kniegewricht. Het bestuderen van het mechanisme van acupodomie om de biomechanische eigenschappen van zachte weefsels te verbeteren, kan nieuw inzicht geven in de behandeling van KOA en andere sportgerelateerde systemische blessures.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs hebben geen belangenconflicten om bekend te maken.
Acknowledgments
Dit werk werd ondersteund door de National Natural Science Foundation of China (nr. 82074523,82104996).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Acupotomy | Beijing Zhuoyue Huayou Medical Devices Co., Ltd. | 0.4 x 40 mm | |
| Connect Cast Orthopedic Casting Tape | Suzhou Connect Medical Technology Co.,Ltd. | KCP06 | 15.0 cm x 360 cm |
| Double-sided Foam Tape | Deli Group Co.,Ltd. | NO.30416 | 36 mm x 5 yard x 2.5 mm |
| Environmental Dewaxing Solution | Wuhan Servicebio Technology Co.,Ltd. | G1128 | |
| Ethanol absolute | Beijing Hengkangda Medicine Co., Ltd. | ||
| Fast Green solution | Wuhan Servicebio Technology Co.,Ltd. | G1031 | |
| Fast grenn FCF | Sigma,America | 2353-45-9 | |
| Fatigue testing machine | BOSE, America | Bose Electro Force 3300 | |
| Four-channel physiological recorder | Chengdu Instrumeny Frctory | RM-6420 | |
| FPD-305E | Fuji, Japan | ||
| FPD-306E | Fuji, Japan | ||
| Hematoxylin solution | Wuhan Servicebio Technology Co.,Ltd. | G1005 | |
| Medical iodophor disinfectant | Shan Dong Lircon Medical Technology Co., Ltd. | ||
| Medical Tape | Shandong Rongjian Sanitary Products Co., Ltd. | 200402 | 1.5 x 500 cm |
| Muscle tension transducer | Chengdu Instrumeny Frctory | JH-2204005, 50 g | |
| Prescale | Fuji, Japan | ||
| Real-time SWE ultrasound diagnostic instrument | SuperSonic Imagine SA,France | SuperSonic Imagine AixPlorer | |
| Rhamsan gum | Wuhan Servicebio Technology Co.,Ltd. | WG10004160 | |
| Safranine O | Sigma,America | 477-73-6 | |
| Safranine O solution | Wuhan Servicebio Technology Co.,Ltd. | G1015 | |
| Statistical Package for the Social Sciences (SPSS) | IBM, America |
References
- Roseti, L., Desando, G., Cavallo, C., Petretta, M., Grigolo, B.
- Cui, A. Y., et al. Global, regional prevalence, incidence and risk factors of knee osteoarthritis in population-based studies. EClinicalMedicine. 29-30, 100587 (2020).
- Miyauchi, A., et al. Alleviation of murine osteoarthritis by deletion of the focal adhesion mechanosensitive adapter, Hic-5. Sci Rep. 9 (1), 15770 (2019).
- Wright, T. Biomechanical factors in osteoarthritis: the effects of joint instability. HSS J. 8 (1), 15-17 (2012).
- Patsika, G., Kellis, E., Kofotolis, N., Salonikidis, K., Amiridis, I. G. Synergetic and antagonist muscle strength and activity in women with knee osteoarthritis. J Geriatr Phys Ther. 37 (1), 17-23 (2014).
- Blalock, D., Miller, A., Tilley, M., Wang, J. X.
- Henriksen, M., Christensen, R., Danneskiold-Samsøe, B., Bliddal, H. Changes in lower extremity muscle mass and muscle strength after weight loss in obese patients with knee osteoarthritis: a prospective cohort study. Arthritis Rheum. 64 (2), 438-442 (2012).
- Schwartz, A. G., Lipner, J. H., Pasteris, J. D., Genin, G. M., Thomopoulos, S. Muscle loading is necessary for the formation of a functional tendon enthesis. Bone. 55 (1), 44-51 (2013).
- Felson, D. T. Osteoarthritis as a disease of mechanics. Osteoarthr Cartil. 21 (1), 10-15 (2013).
- Ma, S. N., et al. Effect of acupotomy on FAK-PI3K signaling pathways in KOA rabbit articular cartilages. Evid Based Complement Alternat Med. 2017, 4535326 (2017).
- Yu, P., et al. Research progress of experimental animal models of knee osteoarthritis. China Medical Herald. 16 (27), 41-44 (2019).
- Li, L. H., et al. Research progress of rabbit knee osteoarthritis model. Journal of Jiangxi University of Chinese Medicine. 31 (4), 108-113 (2019).
- Zhang, W., Gao, Y., Guo, C. Q., Khattab, I. Z. A., Mokhtari, F. Effect of acupotomy versus electroacupuncture on ethology and morphology in a rabbit model of knee osteoarthritis. J Tradit Chin Med. 39 (2), 229-236 (2019).
- An, X. Y., et al. Chondroprotective effects of combination therapy of acupotomy and human adipose mesenchymal stem cells in knee osteoarthritis rabbits via the GSK3 beta-cyclin D1-CDK4/CDK6 signaling pathway. Aging Dis. 11 (5), 1116-1132 (2020).
- Guo, C. Q., Liu, N. G. Analysis on the distribution features of Ashi points in Jingjin disorders. Journal of Basic Chinese Medicine. 17 (8), 899-900 (2011).
- Guo, C. Q., et al. Effects of acupotomy therapy on tenderness point around knee joint in patients with knee osteoarthritis: a randomized controlled clinical trial. Journal of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine. 33 (3), 3-5 (2010).
- Zhao, Y., Dong, F. H., Zhang, K. Analysis of soft tissues mechanical changes and treatment of meridian tendon pain. Beijing Journal of Traditional Chinese Medicine. (9), 705-707 (2008).
- Zhang, L. P., Cheng, F., Liu, D. Y., Zhu, L. G. Application progress of biomechanics in knee osteoarthritis. Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine. 34 (7), 1644-1647 (2016).
- Thomas, A. C., Sowers, M., Karvonen-Gutierrez, C., Palmieri-Smith, R. M. Lack of quadriceps dysfunction in women with early knee osteoarthritis. J Orthop Res. 28 (5), 595-599 (2010).
- Li, L., et al. Effects of unloaded muscle atrophy on contractile characteristics of hind-limb skeletal muscles in mice. Space Med Med Eng. 25 (5), 322-325 (2012).
