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Source : Kay Stewart, RVT, RLATG, CMAR ; Valerie A. Schroeder, RVT, RLATG. Université de Notre Dame, Indiana
La collecte du sang de souris et les rats pour l’analyse peut se faire par le biais de diverses méthodes. Chaque méthode de collection a des variations dans le type de contrainte nécessaire, le caractère invasif de la procédure et la nécessité d’une anesthésie générale. 1 Historiquement, l’utilisation de la cavité du sinus rétro-orbitaire a été utilisée, mais pas sans débat. La controverse concernant les dommages potentiels des tissus, ou même la cécité, causée par rétro-orbitaire saigne a conduit au développement de la veine faciale et sous-mandibulaire saignement méthodes chez les souris. Collecte de sang de la veine saphène dans les souris et les rats est une autre technique qui a été développée. Ces procédures ne nécessitent pas d’anesthésie et sont donc indiquées lors de l’utilisation d’anesthésiques peut-être entraîner des résultats de sang ou d’autres données.
1. du visage veine saigner chez la souris
La figure 1. Purge de veine faciale chez les souris.
2. sous-maxillaire saigner chez la souris : bien que très similaire à la technique pour la purge de la veine faciale, il y a des variations dans l’équipement et des différences subtiles dans cette procédure de purge.
La figure 2. Purge de veine sous-mandibulaire chez la souris.
3. saphène purge
La figure 3. Veine saphène saigner chez la souris.
4. fémorale veine pour les rats
La figure 4. Purge de la veine fémorale chez les rats.
Collecte de sang de rats et de souris est nécessaire pour une grande variété d’études scientifiques et chercheurs ont mis au point différentes méthodes pour atteindre des objectifs précis expérimentales.
Dans le premier épisode, nous discute l’examen retrait de sang générale et revu la purge d’oeil rétro-orbitaire, cisailles de queue et pseudos, ainsi que les méthodes de collecte de sang intracardiaque. Ici, nous énoncerons les modalités de collecte de sang des veines faciales, sous-maxillaire, saphènes et fémorale. Ces méthodes sont moins invasives et ne nécessitent pas d’anesthésie, ce qui les rend des méthodes de choix lors de l’utilisation d’anesthésiques peut-être entraîner des résultats de sang ou d’autres données.
Commençons par la procédure d’obtention d’un échantillon de sang d’une veine faciale murine. Sur la souris, il y a une veine faciale facilement accessible qui traverse la joue. Commencez par choisir l’équipement approprié pour la procédure. Fondamentalement, vous avez besoin d’un tube à centrifuger petit pour prélèvement sanguin et une lancette, qui est disponible dans différentes tailles. Sélection de lancet correct dépend de l’âge, le sexe et poids corporel de l’animal et la taille de l’échantillon à prélever. Voir protocole texte pour plus de détails sur la sélection lancette.
Commencer la procédure en limitant l’animal à l’aide de la technique scruffing. Bonne retenue minimise le mouvement à côté de la tête et contribue à assurer une ponction précise et sûre avec la lancette. Si la poignée est trop serrée, le flux sanguin peut être restreint, ce qui entraîne un diminution du volume collecté. Une fois que l’animal est immobilisé, localisez la superficie approximative de la veine faciale en mesurant la longueur de le œil sous le canthus latéral et la largeur de l’oeil direction caudale. Avec la pointe de la lancette doucement sentir pour le point où se termine la mâchoire. Pour une meilleure précision en perforant le navire, vous pouvez positionner la souris sur le côté.
Maintenant, sur le site d’insertion, maintenez la lancette perpendiculaire à la surface de la peau avec la pointe tournée légèrement vers le nez. C’est grave, car si la pointe de la lancette est dirigée en direction caudale, le conduit auditif soit percé causant une hémorragie de l’oreille. Ponction de la veine, appliquez une pression ferme et percer la peau jusqu'à l’épaule lancet. Lors du retrait, le sang commence à couler. Pour faciliter l’écoulement, placez l’animal avec la tête plus bas que le coeur. Pour arrêter l’hémorragie, épongez le site de ponction pour atteindre l’hémostase et éviter toute perte de sang excessive. Enfin, relâchez la pression sur la peau du cou et retourner l’animal de sa cage. Notez que les volumes de la collection peut varier, mais il est impératif de ne pas dépasser le volume maximum pour la collecte de sang de survie. Voir le protocole de texte de la retrait de sang une vidéo pour plus de détails sur le volume maximal recommandé de collection. Série échantillons peuvent être prélevés par l’alternance du côté utilisé. Aucune des deux parties devraient être utilisé plus souvent que tous les 5-7 jours.
Maintenant passons en revue la méthode de purge de veine sous-maxillaire. Bien que cela soit très similaire à la technique pour la purge de la veine faciale, il y a des variations dans l’équipement et des différences subtiles dans la procédure de purge.
La veine sous-maxillaire s’étend le long de la mâchoire inférieure de la souris et converge avec la veine faciale dans la veine jugulaire. Au lieu d’une lancette, cette méthode est exécutée à l’aide d’aiguilles. Mais semblable à lancettes, mesure d’aiguille est dépendant de l’âge, le sexe et taille de poids et l’échantillon de l’animal - Voir le texte de protocole pour plus de détails.
Pour commencer, scruff l’animal de la même manière que pour le facial veine saigner afin qu’il y a mouvement minimal d’à côté de la tête. Rappel - poignée trop serré peut diminuer le volume de collecte de sang. Tout en retenant la souris, Imaginez une ligne allant de l’angle de la bouche sur le visage et une ligne allant du canthus latéral de le œil. Le point d’intersection de ces lignes est la surface approximative de la veine sous-maxillaire. Cela coïncide avec une petite fossette glabre trouvée caudale à l’angle de la bouche et un peu au-dessous de la ligne de la mâchoire.
Pour une meilleure précision, placez l’animal en décubitus latéral (3.6.1). Ensuite, tenez l’aiguille perpendiculairement à la surface de la peau et l’insérer avec une pression ferme. NE pas insérer l’aiguille au-delà de l’extrémité en biseau, comme la profondeur d’insertion supérieure qui peut entraîner un traumatisme pour les muscles, les nerfs et les autres navires qui se trouvent dans la tête, le cou et la cavité buccale. Lors du retrait de l’aiguille, le sang commence à couler. Comme pour la purge de la veine faciale, positionnez la souris avec la tête plus bas que le coeur pour aider à la circulation du sang. Enfin, épongez le site de ponction pour atteindre l’hémostase et de relâcher la pression sur la peau du cou pour retourner l’animal de sa cage.
Maintenant, nous allons apprendre à prélever le sang de la veine saphène. Cette veine est un vaisseau superficiel qui s’exécute sur le dos et ensuite latéralement à travers l’articulation du tarse.
L’équipement dont vous avez besoin pour cette procédure comprend un dispositif de retenue, ce qui pourrait être un flexible plastique pour rats ou, pour les souris qu'a mis à jour le tube à fond conique en plastique 50-millilitre peut être utilisé. Notez que l’extrémité du tube est coupée pour permettre à un trou de respiration, et une fente longue de demi-pouce, large et de 2 pouces est coupée de la fin de la PAC. Les bords sont recouverts de ruban caillot pour la sécurité de l’animal. Cette procédure requiert également un garrot--fabriqué à l’aide d’une seringue cc 3 et une longueur de 0-2 une suture non résorbable, onguent antibiotique triple avec un écouvillon--pour être utilisé comme une barrière d’humidité entre la peau et la goutte de sang, une tondeuse à cheveux, un 22 calibre aiguille de ponction veineuse et hématocrite tube de prélèvement sanguin.
Pour retenir une souris, placez-le dans le tube, tête en premier. Puis, doucement guider la patte dans la fente et se stabiliser à l’aide de l’index et le pouce. Par la suite, raser les poils de la face latérale de la jambe de la pointe du jarret à l’étouffer. Ensuite, étalez une couche très mince de l’onguent antibiotique triple vers la zone glabre. Par la suite, appliquer le tourniquet pour autant parotidien possible et serrez-la. Le navire saphène qui traverse la surface externe du genou jusqu'à la cheville va commencer à remplir et deviendra surélevé et facile à visualiser.
Ensuite, tenir une aiguille de calibre 22 directement sur les vaisseaux sanguins et perpendiculaire à la surface de la peau. Et perforation du navire, en veillant à ne pas insérer l’aiguille trop profondément et perforer des muscles ou d’os. Le sang sera billes vers le haut sur la surface de la jambe pour la collecte dans un tube de l’hématocrite. Une fois que le sang a été prélevé, desserrer le garrot et appliquer une pression sur la piqûre pour l’hémostase. Après que le saignement a cessé, retirer l’animal de la retenue et le retourner à sa cage. Les volumes collectés grâce à cette méthode sont entre 10 et 150 μL, selon la fréquence d’échantillonnage. Et la qualité de l’échantillon est variable, car elle pourrait contenir des produits tissues. Aucuns plus que des échantillons de sang 4 ne devrait être prise dans un délai de 24 heures de la même jambe.
Enfin, nous allons apprendre à prélever le sang de la veine fémorale, ce qui est une autre option pour le prélèvement sanguin sur un rat. La veine fémorale commune fonctionne sur la face médiale de la patte de l’aine à l’articulation de genou avant de traverser le genou et devient la veine saphène latérale, rendant facilement accessible.
L’avantage de la purge de la veine fémorale est qu’un plus grand volume est plus facilement récolté que dans la veine saphène. L’inconvénient est que cette procédure, chez des animaux conscient, nécessite deux personnes. Le matériel nécessaire pour cette procédure sont semblables à la méthode de la veine saphène, sauf qu’il ne nécessite pas le garrot et le dispositif de retenue préférable est un cône flexible. Pour sélectionner le cône correct, mesurer la longueur du corps de l’animal et ensuite faire un trou ovale coupé au niveau de la cuisse.
Pour maîtriser l’animal, placez-le dans le tube, tête en premier. Puis, plier l’extrémité du cône et le fermer à l’aide d’une pince-petites notes pour empêcher l’animal de quitter. Maintenant, tirez la patte arrière par l’intermédiaire de l’ovale d’ouverture pour accéder à la veine fémorale. Ne pas serrer trop fort car il pourrait exacerber la formation d’hématome. Ensuite, raser la surface intérieure de la jambe de l’aine au genou et appliquer une couche mince d’onguent antibiotique triple sur la zone glabre. Par la suite, la personne retenue doit occlure la veine fémorale et saisir le rat avec une surface intérieure de la jambe, face à la personne qui va prélever du sang. L’aiguille de calibre 22 maintenant perpendiculaire au vaisseau sanguin, directement ponction de la veine et de recueillir le sang dans des tubes de l’hématocrite comme il perle sur la surface de la peau. La ponction doit être aussi près du genou que possible pour permettre un prélèvement futur antérieur à ce site. En outre, assurez-vous que la profondeur de la ponction est n’est pas supérieure à la longueur du biseau de l’aiguille. Pour aider la circulation sanguine, placez le rat avec la jambe inférieure à cœur. Enfin, relâchez la pression sur la jambe et appliquer une pression sur le site de ponction pour atteindre l’hémostase et éviter toute perte de sang excessive. Notez que beaucoup plus de quantité de sang peuvent être collectées à l’aide de cette procédure.
Après avoir discuté les rudiments des techniques de collecte de sang, passons en revue quelques exemples de la raison pour laquelle ces procédures peuvent être utiles pour la recherche scientifique
Sang est souvent analysé pour confirmer la réponse immunitaire au cours de l’élaboration de vaccins. Ici, les chercheurs envoyées un vaccin peptidique aux animaux souffrant de cancer de la vessie. Ensuite, ils recueilli le sang par la veine sous-maxillaires et séparé du sérum pour détecter les niveaux de différentes cytokines, qui servent d’indicateurs de l’efficacité des vaccins.
Collecte de sang est aussi couramment effectuée pour tester l’efficacité d’un traitement par l’étude de biomarqueurs de la maladie humaine, comme les taux de glycémie dans le diabète. Ces chercheurs ont été intéressés par l’évaluation de l’efficacité d’une thérapie de gène envoyée via la veine caudale chez les animaux diabétiques. Après l’injection, ces enquêteurs recueilli le sang de la veine saphène à plusieurs points dans le temps d’analyser l’effet des protocoles de traitement différent sur le taux de glycémie.
Enfin, pour certaines expériences, il est important de connaître l’état de base de l’animal, comme le niveau d’inflammation ou de stress. Dans cet exemple, le plasma sanguin a été prélevé un rat avant et après un événement stressant. Et comme vous pouvez le voir, la corticostérone, ou l’hormone de stress, le niveau est plus élevé chez les animaux de dix minutes qui suivent l’événement stressant.
Vous avez juste regardé deuxième tranche de JoVE sur les techniques de retrait de sang pour les souris et les rats. Après avoir vu les deux ces vidéos, vous devriez avoir une meilleure compréhension des considérations et des procédures pour la collecte de sang de ces animaux et comment ils sont utilisés en recherche biomédicale aujourd'hui. Comme toujours, Merci pour regarder !
La collecte de sang de souris et de rats est nécessaire pour une grande variété d’études scientifiques, et les chercheurs ont développé différentes méthodes pour atteindre des objectifs expérimentaux spécifiques.
Dans le premier épisode, nous avons discuté de la considération générale du prélèvement sanguin et avons examiné l’hémorragie oculaire rétro-orbitale, les coupures et les entailles de queue, ainsi que les méthodes de prélèvement de sang intra-cardiaque. Ici, nous décrirons les procédures de prélèvement de sang dans les veines faciales, sous-mandibulaires, saphènes et fémorales. Ces méthodes sont moins invasives et ne nécessitent pas d’anesthésie, ce qui en fait des méthodes de choix lorsque l’utilisation d’anesthésiques peut fausser les résultats sanguins ou d’autres données.
Commençons par la procédure d’obtention d’un échantillon de sang à partir d’une veine faciale murine. Sur la souris, il y a une veine faciale facilement accessible qui traverse la joue. Commencez par choisir l’équipement approprié pour la procédure. Fondamentalement, vous avez besoin d’un petit tube à centrifuger pour le prélèvement sanguin et d’une lancette, qui est disponible en différentes tailles. Le choix de la bonne lancette dépend de l’âge, du sexe et du poids corporel de l’animal ainsi que de la taille de l’échantillon à collecter. Voir le protocole textuel pour plus de détails sur la sélection des lancets.
Commencez la procédure en immobilisant l’animal à l’aide de la technique de grattage. Une contention adéquate minimise les mouvements latéraux de la tête et aide à assurer une ponction veineuse précise et sûre avec la lancette. Si la prise est trop serrée, le flux sanguin peut être restreint, ce qui entraîne une réduction du volume collecté. Une fois l’animal immobilisé, localisez la zone approximative de la veine faciale en mesurant la longueur de l’œil sous le canthus latéral et la largeur de l’œil caudalement. Avec la pointe de la lancette, tâtez doucement le point où se termine l’os de la mâchoire. Pour une meilleure précision dans la perforation du vaisseau, vous pouvez positionner la souris sur son côté.
Maintenant, au site d’insertion, tenez la lancette perpendiculairement à la surface de la peau avec la pointe légèrement tournée vers le nez. Ceci est essentiel, car si la pointe de la lancette est dirigée vers la queue, le conduit auditif sera percé, provoquant des saignements de l’oreille. Pour percer la veine, appliquez une poussée ferme et percez la peau jusqu’à l’épaulement de la lancette. Une fois retiré, le sang commencera à couler. Pour faciliter l’écoulement, positionnez l’animal avec la tête plus basse que le cœur. Pour arrêter le saignement, épongez le site de ponction pour obtenir l’hémostase et prévenir une perte de sang excessive. Enfin, relâchez la pression sur la peau et remettez l’animal dans sa cage. Notez que les volumes de collecte varient, mais il est impératif de NE PAS dépasser le volume maximal pour la collecte de sang de survie. Voir le protocole textuel de la vidéo Blood Withdrawal One pour plus de détails sur le volume maximal recommandé de prélèvement. Des échantillons en série peuvent être prélevés en alternant le côté utilisé. Aucun des deux côtés ne doit être utilisé plus de 5 à 7 jours.
Passons maintenant en revue la méthode de saignement de la veine sous-mandibulaire. Bien que cela soit très similaire à la technique du saignement des veines faciales, il existe des variations dans l’équipement et des différences subtiles dans la procédure de saignement.
La veine sous-mandibulaire longe la mâchoire inférieure de la souris et converge avec la veine faciale dans la veine jugulaire. Au lieu d’une lancette, cette méthode est réalisée à l’aide d’aiguilles. Mais comme pour les lancettes, le choix de la jauge de l’aiguille dépend de l’âge, du sexe, du poids de l’animal et de la taille de l’échantillon - voir le protocole de texte pour plus de détails.
Pour commencer, ébouriffez l’animal de la même manière que pour le saignement des veines faciales afin qu’il y ait un minimum de mouvement latéral de la tête. Rappel - une prise trop serrée peut diminuer le volume de collecte de sang. Tout en retenant la souris, imaginez une ligne du coin de la bouche à travers le visage et une ligne du canthus latéral de l’œil. Le point d’intersection de ces lignes est l’aire approximative de la veine sous-mandibulaire. Cela coïncide avec une petite fossette glabre située caudale au coin de la bouche et légèrement en dessous de la ligne de la mâchoire.
Pour une meilleure précision, placez l’animal en position couchée latérale (3.6.1). Ensuite, tenez l’aiguille perpendiculairement à la surface de la peau et insérez-la avec une poussée ferme. N’insérez PAS l’aiguille au-delà de la pointe du biseau, car une profondeur d’insertion supérieure à cela peut entraîner des traumatismes aux muscles, nerfs et autres vaisseaux qui se trouvent dans la tête, le cou et la cavité buccale. Une fois l’aiguille retirée, le sang commencera à couler. Comme pour le saignement des veines faciales, positionnez la souris avec la tête plus basse que le cœur pour aider à la circulation sanguine. Enfin, épongez le site de ponction pour obtenir l’hémostase et relâchez la pression sur la peau pour ramener l’animal dans sa cage.
Maintenant, apprenons comment prélever du sang dans la veine saphène. Cette veine est un vaisseau superficiel qui traverse dorsalement puis latéralement l’articulation tarsienne.
L’équipement dont vous avez besoin pour cette procédure comprend un dispositif de retenue, qui peut être un dispositif en plastique flexible pour les rats ou, pour les souris, un tube conique en plastique modifié de 50 millilitres peut être utilisé. Notez que l’extrémité du tube est coupée pour permettre un trou de respiration, et qu’une fente d’un demi-pouce de large et de 2 pouces de long est découpée à partir de l’extrémité du capuchon. Les bords sont recouverts de ruban adhésif pour la sécurité de l’animal. Cette procédure nécessite également un garrot - fabriqué à l’aide d’une seringue de 3 cc et d’une longueur de suture non résorbable de 0 à 2, d’une pommade antibiotique triple avec un écouvillon - à utiliser comme barrière anti-humidité entre la peau et la gouttelette de sang, une tondeuse à cheveux, une aiguille de calibre 22 pour la ponction veineuse et un tube d’hématocrite pour le prélèvement de sang.
Pour retenir une souris, placez-la dans le tube, le nez en premier. Ensuite, guidez doucement la patte arrière dans la fente et stabilisez-la à l’aide de l’index et du pouce. Par la suite, rasez les poils de la face latérale de la jambe, du jarret au grasset. Ensuite, étalez une très fine couche de la pommade antibiotique triple sur la zone glabre. Ensuite, appliquez le garrot aussi loin que possible vers le crâne et serrez-le. Le vaisseau saphène qui traverse la surface externe du genou à la cheville commencera à se remplir et deviendra surélevé et facile à visualiser.
Ensuite, tenez une aiguille de calibre 22 directement sur le vaisseau sanguin et perpendiculairement à la surface de la peau. Et percez le vaisseau en faisant attention de ne pas insérer l’aiguille trop profondément et de percer le muscle ou l’os. Le sang perlera à la surface de la jambe pour être recueilli dans un tube d’hématocrite. Une fois que le sang a été prélevé, desserrez le garrot et appliquez une pression sur la ponction pour l’hémostase. Une fois que le saignement a cessé, retirez l’animal de la contention et remettez-le dans sa cage. Les volumes collectés avec cette méthode sont compris entre 10 et 150 ? L, en fonction de la fréquence d’échantillonnage. Et la qualité de l’échantillon est variable, car il peut contenir des produits tissulaires. Pas plus de 4 échantillons de sang ne doivent être prélevés dans une période de 24 heures sur la même jambe.
Enfin, nous allons apprendre comment prélever du sang dans la veine fémorale, ce qui est une autre option pour la collecte de sang sur un rat. La veine fémorale s’étend sur la face médiale de la patte arrière de l’aine à l’articulation du genou avant de traverser le genou et de devenir la veine saphène latérale, la rendant facilement accessible.
L’avantage du saignement de la veine fémorale est qu’un volume plus important est plus facilement collecté que de la veine saphène. L’inconvénient est que cette procédure, chez un animal conscient, nécessite deux personnes. L’équipement nécessaire pour cette procédure est similaire à la méthode de la veine saphène, sauf qu’il ne nécessite pas de garrot et que le dispositif de contention préférable est un cône flexible. Pour sélectionner le bon cône, mesurez-le par rapport à la longueur du corps de l’animal, puis faites un trou ovale coupé au niveau de la cuisse.
Pour retenir l’animal, placez-le dans le tube, le nez en premier. Ensuite, pliez l’extrémité du cône et fermez-le à l’aide d’une petite pince à reliure pour empêcher l’animal de sortir. Tirez maintenant la patte arrière à travers l’ouverture ovale pour accéder à la veine fémorale. Ne serrez pas trop fort car cela pourrait exacerber la formation d’hématomes. Ensuite, rasez la surface interne de la jambe, de l’aine au genou, et appliquez une fine couche de pommade antibiotique triple sur la zone glabre. Par la suite, la personne qui doit immobiliser doit obstruer la veine fémorale et saisir le rat avec la surface interne de la jambe face à la personne qui va prélever du sang. En tenant l’aiguille de calibre 22 perpendiculairement au vaisseau sanguin, percez directement la veine et recueillez le sang dans des tubes d’hématocrite pendant qu’il perle à la surface de la peau. La ponction doit être aussi près que possible du genou pour permettre un échantillonnage futur à l’avant de ce site. Assurez-vous également que la profondeur de la perforation n’est pas plus profonde que la longueur du biseau de l’aiguille. Pour faciliter la circulation sanguine, positionnez le rat avec la jambe plus basse que le cœur. Enfin, relâchez la pression sur la jambe et appliquez une pression sur le site de ponction pour obtenir l’hémostase et prévenir une perte de sang excessive. Notez que beaucoup plus de sang peut être prélevé à l’aide de cette procédure.
Après avoir discuté des bases des techniques de prélèvement sanguin, passons en revue quelques exemples de raisons pour lesquelles ces procédures peuvent être utiles pour la recherche scientifique
Le sang est souvent analysé pour confirmer la réponse immunitaire lors du développement d’un vaccin. Ici, les chercheurs ont administré un vaccin peptidique à des animaux atteints d’un cancer de la vessie. Ensuite, ils ont prélevé du sang via la veine sous-mandibulaire et séparé le sérum pour détecter les niveaux de différentes cytokines, qui servent d’indicateurs de l’efficacité du vaccin.
Le prélèvement sanguin est également couramment effectué pour tester l’efficacité d’un traitement en étudiant les biomarqueurs de la maladie humaine, comme le taux de glucose dans le diabète. Ces chercheurs souhaitaient tester l’efficacité d’une nouvelle thérapie génique administrée par la veine de la queue chez des animaux diabétiques. Après l’injection, ces chercheurs ont prélevé du sang dans la veine saphène à plusieurs moments pour analyser l’effet de différents protocoles de traitement sur la glycémie.
Enfin, pour certaines expériences, il est important de connaître l’état de base de l’animal, comme les niveaux d’inflammation ou de stress. Dans cet exemple, le plasma sanguin a été prélevé sur un rat avant et après un événement stressant. Et comme vous pouvez le constater, le taux de corticostérone, ou hormone du stress, est plus élevé chez les animaux dix minutes après l’événement stressant.
Vous venez de regarder le deuxième épisode de JoVE sur les techniques de prélèvement sanguin pour les souris et les rats. Après avoir regardé ces deux vidéos, vous devriez avoir une meilleure compréhension des considérations et des procédures de prélèvement de sang sur ces animaux et de la façon dont ils sont utilisés dans la recherche biomédicale aujourd’hui. Comme toujours, merci d’avoir regardé !
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