Programmé stimulation électrique chez la souris

La souris anesthésiée est collée sur une planche chauffante en position couchée. La veine jugulaire droite est séparée et l’extrémité proximale de la veine est attachée. Le cathéter 1.1 French OC Apolar est inséré dans la veine, puis le cathéter est avancé dans l’oreillette droite et le ventricule droit.

Enfin, l’extrémité distale de la veine est attachée pour sécuriser la position du cathéter et éviter les saignements. Bonjour, je m’appelle Naali et je travaille dans le laboratoire du Dr Zver au Département de physiologie moléculaire et de biophysique du Baylor College of Medicine. Aujourd’hui, nous allons vous montrer une procédure pour programmer la stimulation électrique chez la souris.

Nous utilisons cette procédure dans notre laboratoire pour étudier les arythmies inductibles chez la souris. Alors commençons. Avant l’intervention chirurgicale pour la canulation et l’insertion d’un cathéter, utilisez une tondeuse à cheveux pour raser la fourrure de la souris anesthésiée de la ligne du cou jusqu’au milieu de la poitrine.

Désinfectez la zone chirurgicale avec 10 % de povidone iodée. Placez la souris en position couchée et collez ses membres sur des électrodes ECG incorporées. Dans une planche chauffante, nous recommandons un système qui comprend une sonde de température rectale reliée à un coussin chauffant contrôlé par un système d’analyse thermique, de sorte que la température corporelle soit maintenue à 37 plus ou moins un degré Celsius.

Après avoir confirmé par une pincée que la souris est complètement anesthésiée, faites une incision d’un demi-pouce à droite de la ligne médiane avec l’extrémité codale au niveau de la clavicule. Séparez le tissu sous-cutané, les glandes salivaires et les tissus lymphatiques par dissection contondante. Pour visualiser la veine jugulaire droite, attachez l’extrémité proximale de la veine avec six points de suture.

Placez une autre suture sous la veine à l’extrémité distale du segment visualisé. Lancez maintenant l’acquisition de données sur ordinateur pour enregistrer l’ECG de surface. Connectez le cathéter à un stimulateur externe en mode enregistrement.

Ensuite, à l’aide de micro-ciseaux, faites une petite incision dans le sens longitudinal de la veine tout en tirant doucement sur la suture proximale. Pour aider à maintenir la veine droite, faites passer le cathéter d’extraction French Octo 1.1 à travers la veine jusqu’à l’oreillette et le ventricule droits. La position correcte du cathéter est vérifiée par la visualisation des formes d’onde des quatre électrogrammes intracardiaques au niveau de l’apex du ventricule droit, de la base du ventricule droit, du ganglion ventriculaire auriculaire et de l’oreillette droite, et enfin de la suture distale pour sécuriser la position du cathéter et prévenir d’éventuels saignements pour la stimulation auriculaire.

La paire d’électrodes située à l’intérieur de l’oreillette passe du mode d’enregistrement au mode de stimulation tandis que les autres paires d’électrodes restent en mode d’enregistrement. Pour déterminer si une souris présente une vulnérabilité accrue aux arythmies auriculaires, une stimulation électrique programmée de l’oreillette droite est effectuée. Tout d’abord, déterminez le seuil de stimulation auriculaire en appliquant des impulsions de courant d’au moins 52 millisecondes à différentes longueurs de cycle de base ou BCL pour tester la cohérence de la capture du stimulus.

Le BCL du train d’impulsions initial est légèrement inférieur au BCL intrinsèque et est diminué de 10 millisecondes. L’amplitude de courant typique requise pour la capture de stimulus est de 100 à 200 microampères. Après avoir appliqué un train de stimulation auriculaire de 15 secondes à un BC de 100 millisecondes, mesurez le temps de récupération du nœud sinusal ou SNRT, qui est défini comme l’intervalle entre le dernier stimulus du train de stimulation et le début du premier battement sinusal spontané

Pour déterminer la période réfractaire efficace auriculaire ou A, appliquez une série de trains de stimulation auriculaire à un BCLS fixe, un avec un couple de stimulus prématuré plus court, S deux. L’intervalle S un à S deux est progressivement réduit de deux millisecondes dans chaque train de stimulation, passant de 70 millisecondes à 20 millisecondes avec une période de récupération d’au moins 30 secondes entre chaque protocole de stimulation. L’ERP A est défini comme l’intervalle de couplage S un à S deux le plus long pour les oreillettes qui n’ont pas réussi à générer un battement propagé avec S deux.

Une application similaire des trains de stimulation auriculaire et des stimuli prématurés est utilisée pour déterminer la période réfractaire effective du nœud ventriculaire auriculaire AV NERP. L’AV NERP est défini comme l’intervalle de couplage S un à S deux le plus long pendant lequel la stimulation prématurée délivrée à l’oreillette est suivie d’un potentiel de sifflement, mais pas d’un complexe QRS. L’inductibilité des arythmies auriculaires, y compris la fibrillation auriculaire, peut être testée à l’aide du protocole de stimulation en rafale où une série de rafales de deux secondes est appliquée.

La première rafale de deux secondes a une durée de cycle ou CL de 40 millisecondes, et chaque rafale successive de deux secondes a une CL de deux millisecondes plus courte que la rafale précédente jusqu’à la CL finale de 20 millisecondes. Une fois tous les protocoles de stimulation terminés, l’acquisition de données est arrêtée. Dans le cas des études EP terminales, le nœud est doucement desserré pour libérer le cathéter.

Ici, nous montrons quelques électrogrammes ECG et intracardiaques de surface représentatifs chez une souris. Cet ECG de surface montre un rythme sinusal régulier avec une fréquence d’environ 540 battements par minute. Ces quatre électrogrammes suivants montrent des enregistrements d’électrogrammes intracardiaques bipolaires au niveau de l’oreillette droite.

Le ganglion ventriculaire auriculaire, la base du ventricule droit et l’apex du ventricule droit. L’onde A intracardiaque dans l’enregistrement de l’électrogramme au niveau de l’oreillette droite correspond à l’onde P à la surface. Le CCG. L’onde V sur l’électrogramme ventriculaire correspond à l’onde QRS sur la CCG de surface.

Ensuite, nous montrons des électrogrammes CCG et intracardiaques représentatifs de surface et une souris qui a développé une fibrillation auriculaire après une stimulation en rafale auriculaire sur la surface. CCG, l’intervalle RR est irrégulier et il n’y a pas d’ondes P apparentes. D’autre part, l’électrogramme auriculaire révèle des signaux auriculaires rapides et irréguliers compatibles avec une fibrillation auriculaire.

L’électrogramme ventriculaire a une fréquence plus lente similaire aux intervalles RR de dérivation de surface. Nous venons de vous montrer comment programmer la stimulation électrique chez la souris en effectuant cette procédure, il est important de se rappeler d’éviter les saignements étendus et de maintenir la température corporelle dans la plage normale de 36 à 37 degrés. De plus, essayez de minimiser l’exposition à Asof Florin, car l’exposition à une concentration plus élevée pourrait supprimer la fonction cardiaque et respiratoire chez la souris.

Par conséquent, nous avons recommandé que tout commence à être compliqué dans les deux heures. Donc c’est tout. Merci d’avoir regardé et bonne chance dans vos expériences.