0 vues • 4:51 min • April 30th, 2023
- Commencez avec des vers granulés lavés et ajoutez un tampon de lyse contenant du SDS, un détergent, et du DTT, un agent réducteur. Cela décompose la cuticule protectrice du ver, exposant le corps à la dissociation cellulaire. Évitez l’exposition prolongée au tampon de lyse pour minimiser la lyse et la mort cellulaires.
Ensuite, retirez les réactifs de lyse avec plusieurs lavages de tampon d’isolement à froid. Il est important que ce tampon ait la bonne osmolarité pour prévenir la mort cellulaire. Utilisez une enzyme protéase pour briser les connexions entre les cellules. Aidez le processus d’homogénéisation avec l’énergie mécanique en pipetant le mélange contre la paroi du tube.
Ajoutez un milieu contenant du sérum pour arrêter la réaction enzymatique et des antibiotiques pour prévenir la contamination. Granulez et lavez l’échantillon plusieurs fois pour enlever la plupart des débris.
Enfin, placez le tube sur de la glace pour permettre la sédimentation par gravité. Les débris, y compris les restes de la cuticule ou les amas cellulaires, se déposeront, tandis que les cellules dissociées resteront en suspension dans la couche supérieure du support. Ces cellules peuvent être utilis
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