카노르하비티스 예르간단일세포 해리 : 살아있는 세포를 분리하는 방법

- 세척된 펠릿 웜으로 시작하고 SDS, 세제 및 DDT를 포함하는 용해 버퍼를 추가합니다.

다음으로, 감기 절연 버퍼의 여러 세정제로 리시스 시약을 제거합니다. 이 완충은 세포 사멸을 방지하기 위한 올바른 삼투압의 것이 중요합니다.

체루를 함유한 미디어를 추가하여 효소 반응과 항생제를 막아 오염을 방지합니다.

마지막으로, 중력 침전을 허용하기 위해 얼음에 튜브를 배치합니다.

예제 프로토콜에서, 우리는 그 세포를 격리하고 분석하기 위하여 관심있는 뉴런에 있는 GFP를 표현하는 형질 전환 벌레를 해리할 것입니다.

- 동물을 수거한 후 5분 동안 1,600배 g로 원심분리.

원심분리기는 벌레를 펠릿하는 데 5분 동안 1,600배 g의 원심분리기를 넣은 다음, SDS-DDT 버퍼 200마이크로리터를 넣고 실온에서 5분 동안 배양합니다.

다음으로, 800 마이크로리터의 얼음 냉간 절연 버퍼를 넣고 튜브를 부드럽게 가볍게 가볍게 밀어 넣고 13,000배, 섭씨 4도에서 1분간 심루를 제거합니다.

이 원심 분리 및 세척 공정을 총 5회 반복하여 매번 격리 버퍼를 조심스럽게 제거하십시오.

실온에서 10~15분 동안 배양하십시오. 튜브 바닥에 200 마이크로리터 마이크로파이펫 팁으로 60~70회 위아래로 파이프를 하여 기계적 혼란을 가중시키십시오.

5~7분 후에, 벌레 단편은 눈에 띄게 감소된 큐티클을 가져야 하며 세포의 슬러리가 쉽게 볼 수 있을 것입니다.

원심분리기는 10,000배, 섭씨 4도에서 5분간 분리된 단편과 세포를 펠릿으로 씻어내고 있습니다.

이어서, 약 700~800마이크로리터인 상부층을 마이크로센심심분리기 튜브로 이송합니다.