Dosage de l’immunofluorescence CTC : une technique pour caractériser les cellules tumorales circulantes

- Pour commencer, diluez les cellules tumorales circulantes isolées ou CTC à la concentration requise à l’aide d’une solution anti-liaison qui protège les cellules des dommages causés par le cisaillement des fluides et la pression. Ensuite, assemblez une lame de microscope recouverte de polylysine et une carte de filtre de cytocentrifugeuse dans un ensemble d’entonnoir de cytocentrifugeuse. Transfert de la suspension cellulaire dans l’orifice de l’entonnoir de l’ensemble, suivi d’une cytocentrifugation.

La force centrifuge concentre et dépose une monocouche de cellules sur une zone circulaire de la lame. Isolez la zone déposée avec les cellules à l’aide d’un isolateur en silicone. Une fois sèches, fixez les cellules à l’aide de paraformaldéhyde. Ensuite, incubez les cellules avec une solution bloquante appropriée contenant des protéines qui se lient facilement à tous les sites de liaison non spécifiques à la surface de la cellule.

Maintenant, marquez les cellules avec une solution d’anticorps d’intérêt marquée par fluorescence. Les anticorps marqués au fluorophore reconnaissent et se lient à des molécules cibles spécifiques à la surface de la cellule. Lavez l’échantillon pour élimi