Co-culture 3D de cellules cancéreuses du poumon avec des CAF : un système de modèle in vitro pour étudier la progression tumorale

- Dans les co-cultures 3D, plusieurs types de cellules sont cultivés ensemble dans des matrices comme une matrice de membrane basale, qui imite le microenvironnement naturel de la matrice extracellulaire, facilitant les interactions cellule-cellule et cellule-matrice. Pour établir une co-culture 3D intégrée, préparez une suspension uniforme de fibroblastes associés au cancer ou CAF et de cellules cancéreuses du poumon prélevés dans un rapport de deux à un, dans la matrice de la membrane basale. Maintenir la suspension sur la glace pour éviter la solidification de la matrice à température ambiante.

Transvaser un volume approprié de suspension dans une plaque de culture cellulaire. Incuber à 37 degrés Celsius pendant la durée requise pour co-encastrer les cellules dans la matrice. Pour établir une co-culture 3D superposée, préparez une suspension de cellules cancéreuses du poumon dans la matrice de la membrane basale, dans la densité cellulaire souhaitée. Maintenez la suspension sur la glace. Pipeter un volume approprié de cette suspension de matrice cellulaire dans une plaque de culture cellulaire. Incuber à 37 degrés Celsius pour mettre en place la monoculture de cellules cancéreuses intégrée.

Transférez ensuite le volume souhaité de CAF en suspension dans le milieu de culture préféré, sur les cellules cancéreuses intégrées. Dans les co-cultures 3D, les CAF améliorent la formation de sphéroïdes des cellules cancéreuses et attirent les cellules cancéreuses, ce qui donne des structures en forme de goutte d’eau. Dans ce protocole, nous co-cultiverons des cellules cancéreuses du poumon TUM622 et des CAF pour étudier leur interaction.

- Après avoir préparé des suspensions cellulaires de TUM622 et de CAF, comme décrit précédemment, comptez la densité cellulaire de la CAF en mélangeant 10 microlitres de suspension cellulaire avec 10 microlitres de bleu de trypan. Ajoutez 10 microlitres du mélange dans chacune des deux chambres sur un hémocytomètre pour compter et calculer la densité cellulaire. Pour co-intégrer des cellules TUM622 et des CAF dans la matrice de membrane basale, calculez d’abord le nombre souhaité de cellules utilisées pour le placage, en fonction des informations de densité cellulaire. Les CAF sont ensemencés à un rapport de 2 à 1 de cellules TUM622. Transférez le volume calculé du TUM622, ainsi que de la suspension des cellules CAF, dans le même tube de centrifugation. Tournez vers le bas et aspirez tout support. Remettez en suspension dans la matrice de la membrane basale et plaquez 310 microlitres du mélange dans chaque puits d’une plaque de 24 puits. Pour l’immunofluorescence, transférez 60 microlitres de mélanges TUM622 et CAF dans des lames de chambre comme décrit précédemment.

Pour co-cultiver TUM622 avec des CAF superposés dans une matrice de membrane basale, il faut d’abord mettre en place la monoculture de TUM622 comme décrit précédemment. Transférez deux fois le nombre de suspension CAF dans un tube à centrifuger et tournez à 300 fois « g » pendant cinq minutes à température ambiante. Aspirez le surnageant et remettez en suspension les CAF dans un millilitre de milieu de culture 3D. Transférez la suspension CAF d’un millilitre dans le puits contenant les cellules TUM622 intégrées.