Évaluation des foyers de dommages à l’ADN : pour identifier les foyers de dommages à l’ADN induits par les radiations dans les lignées cellulaires cancéreuses à l’aide de la coloration par immunofluorescence

- Les rayonnements ionisants induisent différents types de dommages à l’ADN, tels que les cassures simple brin ou SSB et les ruptures double brin ou DSB. Les cassures simple brin ou SSB se produisent lorsque le rayonnement endommage les bases et clive le squelette de l’ADN, tandis que les cassures double brin, DSB, se développent lorsque deux SSB se produisent sur des brins d’ADN opposés. La première étape de la formation des DSB est la phosphorylation de l’histone H2AX, qui peut être visualisée par coloration par immunofluorescence.

Pour effectuer une coloration par immunofluorescence, ajoutez des anticorps primaires à un échantillon fixé sur une lamelle placée dans une boîte de Pétri. Les anticorps se lient à la protéine d’histones phosphorylée gamma-H2AX. Incuber l’échantillon et le laver avec du PBS pour éliminer les anticorps non liés. Ensuite, ajoutez des anticorps secondaires porteurs de fluorophores, qui reconnaissent les anticorps primaires et se lient à eux. Ajoutez la quantité souhaitée de colorant fluorescent DAPI pour contre-colorer les noyaux.

Montez délicatement la lamelle sur une lame de verre à l’aide d’un support de montage et observez les cellules au microscope f