Réaction en chaîne de la polymérase quantitative pour dénombrer les bactériophages

Préparez le prémélange qPCR pour 10 échantillons de phages biopanés de concentration inconnue et 7 échantillons de concentrations standard en trois exemplaires, ce qui donne un prémélange pour 51 échantillons contenant 255 microlitres de qPCR Master Mix, 51 microlitres d’amorces et 102 microlitres d’eau.

Aliquote 8 microlitres de la PCR préparée se mélangent dans 51 puits d’une plaque qPCR de 96 puits. Ensuite, ajoutez deux microlitres d’échantillons de phages T7 traités thermiquement dans chacun de ces puits, en les distribuant sous la surface du prémélange qPCR. À l’aide d’un film adhésif, scellez la plaque.

Enveloppez la plaque dans du papier d’aluminium pour minimiser le photoblanchiment par fluorescence, puis passez la plaque sur l’équipement qPCR. Configurez les conditions de cycle et les paramètres de la courbe de fusion comme indiqué dans le protocole texte.