Microscopie statique à force atomique pour visualiser et caractériser les nucléosomes assemblés
Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 5:09 min • July 8th, 2025
Les nucléosomes, l’unité répétitive de base de la chromatine eucaryote, comprennent des spires d’ADN enroulées autour d’un noyau de protéines histones.
Pour visualiser les nucléosomes assemblés par microscopie statique à force atomique, AFM, commencez par une fine bande de mica, fonctionnalisée pour rendre la surface chargée positivement. Coupez la bande en petits carrés. Pipeter une suspension de nucléosomes assemblée.
L’ADN chargé négativement dans le nucléosome se lie au groupe chargé positivement de la bande de mica fonctionnalisée par des interactions électrostatiques. Laver avec un tampon pour éviter l’encombrement des nucléosomes.
Fixez la bande de mica sur un disque de support d’échantillon. Montez-la sur la platine de l’instrument AFM.
Fixez le support de sonde à la tête optique de l’instrument. Le support contient un cantilever AFM prémonté avec une pointe à son sommet.
Alignez le faisceau laser sur le dos du porte-à-faux pour une mesure précise de la déflexion. Positionnez l’extrémité en contact direct avec la surface contenant le nucléosome.
Lors de l’imagerie en mode contact, lorsque l’extrémité en porte-à-faux balaye la surface du nucléosome, des forces répulsives se
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