Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
0 vues • 4:34 min • July 8th, 2025
Commencez avec une plaque multipuits contenant une suspension unicellulaire de cellules myéloïdes rétiniennes de souris, y compris des microglies, des monocytes et des neutrophiles.
Les cellules microgliales - ou cellules immunitaires phagocytaires rétiniennes, présentent une fluorescence due à des bioparticules d’origine fongique marquées au fluorophore englouties, préinjectées par voie intravitréenne.
Centrifuger et ajouter des anticorps récepteurs Fc, en bloquant les sites d’interaction non spécifiques.
Introduire un cocktail d’anticorps marqués au fluorophore ciblant les protéines de surface CD11b, Ly6C et Ly6G, interagissant avec les cellules myéloïdes qui les expriment.
Retirez les anticorps non liés. Traiter avec de l’iodure de propidium, qui pénètre à travers les membranes endommagées, colorant exclusivement les cellules mortes.
En cytométrie en flux, excitez l’iodure de propidium pour exclure les cellules mortes et identifier les cellules vivantes non fluorescentes.
Illuminez les cellules avec un laser violet ; les cellules vivantes excitées signifient les cellules myéloïdes exprimant CD11b.
Ensuite, illuminez avec un laser rouge, excitant le fluorophore rouge proche du ro
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