Constriction chronique du nerf sciatique et les essais hypersensibilité à la douleur chez le rat

L’objectif global de cette procédure est d’effectuer une constriction chronique, une lésion du nerf sciatique, un modèle de douleur neuropathique couramment utilisé chez les rongeurs, et de mesurer quantitativement les comportements douloureux qui en résultent. Ceci est accompli en plaçant d’abord quatre ligatures intestinales chromiques autour du nerf sciatique exposé au niveau de la mi-cuisse pour créer une lésion de constriction du nerf sciatique. Ensuite, surveillez les comportements douloureux de la patte arrière aux points temporels souhaités en mesurant quantitativement le seuil de retrait de la patte au stimulus mécanique à l’aide d’un anthes de von fray et la latence de retrait de la patte au stimulus thermique à l’aide d’un analgésique plantaire.

En fin de compte, des résultats peuvent être obtenus qui montrent l’existence de douleurs mécaniques et thermiques, d’une hypersensibilité de la patte arrière blessée grâce à la mesure des réponses de retrait évoquées à des stimuli mécaniques et thermiques. Cette méthode de lésion des nerfs périphériques, développée pour la première fois par bene et Z, peut nous aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la douleur chronique, telles que quels sont les mécanismes périphériques et centraux par lesquels la douleur neuropathique est générée. Les implications de cette technique s’étendent au traitement de la douleur neuropathique, car ce modèle fournit la base pour examiner de nouvelles stratégies visant à réduire l’hypersensibilité à la douleur.

En général, les personnes qui ne connaissent pas cette méthode auront du mal, car il est particulièrement difficile de placer les sutures de l’intestin cmic autour du nerf statique et une tension appropriée pour causer des lésions nerveuses suffisantes mais non excessives. Pour commencer cette procédure, désinfectez le plan de travail chirurgical avec de l’éthanol à 70 % et préparez les instruments stériles : des agrafes de gaze et des écouvillons, qui ont été préalablement autoclavés. Ensuite, anesthésez le rat dans une chambre d’induction avec du fluor ISO à 5 %.

Fournissez-lui 2 % de fluor ISO à travers un masque facial sur mesure pendant la chirurgie. Après cela, rasez la patte arrière gauche du rat, puis placez l’animal sur un tapis chauffant thermorégulé à 37 degrés Celsius. Appliquez une pommade ophtalmique lubrifiante sur les yeux.

Préparez ensuite la suture intestinale chromique en la coupant en petits morceaux d’environ trois centimètres, plongez-les dans une solution saline stérile. Ensuite, stérilisez la zone rasée avec trois applications alternées d’alcool et de solution iodée. Avec l’animal allongé sur le thorax, élevez sa patte arrière gauche et maintenez le fémur à 90 degrés par rapport à la colonne vertébrale à l’aide de ruban adhésif sur le pied.

Faites ensuite une incision dans la peau à environ trois à quatre millimètres sous le fémur. Séparez la peau du muscle entourant l’incision en coupant le tissu conjonctif. Utilisez une paire de ciseaux émoussés pour couper le tissu conjonctif entre les muscles fessiers superficiels et les muscles biceps féminins.

Ensuite, utilisez un écarteur pour élargir l’espace entre les deux muscles afin de permettre une visualisation claire du nerf sciatique, puis utilisez la pince et les micro-ciseaux pour libérer doucement environ 10 millimètres du nerf sciatique du tissu conjonctif environnant. Attachez la première ligature proximale à la trifurcation du nerf sciatique pour chaque ligature. Commencez par une seule boucle lâche.

Saisissez ensuite les deux extrémités près de la boucle et tirez jusqu’à ce que la boucle soit à peine bien ajustée et que la ligature ne glisse pas le long du nerf. Tenez ensuite la boucle dans sa bonne position et placez une deuxième boucle sur la première boucle pour terminer le nœud. Ensuite, coupez les extrémités libres de la ligature en un millimètre rond, la constriction du nerf doit être minimale.

Répétez les étapes pour les trois ligatures restantes en attachant chaque ligature supplémentaire un millimètre plus proximale que la précédente. De plus, avec une constriction minimale à la fin de la chirurgie, utilisez des sutures pour fermer la couche musculaire et des agrafes pour fixer la peau. Ensuite, utilisez une solution iodée pour stériliser la plaie.

Observez attentivement l’animal pendant la période de récupération de l’anesthésie et laissez-le se rétablir dans une cage séparée avec une litière en papier plat. Avant de commencer l’expérience. Manipulez l’animal quotidiennement pendant plusieurs jours.

Ensuite, avant le test comportemental, habituez le rat dans l’enclos. L’environnement d’essai doit être maintenu calme et bien contrôlé avec des niveaux de température et d’humidité constants, et chaque séance d’essai doit être effectuée à un moment similaire de la journée. Pour étudier le seuil de retrait mécanique le jour du test, placez le rat dans la cage d’essai du sol grillagé surélevé, 15 à 30 minutes avant l’expérience, à l’aide d’un plantaire dynamique von fray anter, positionnez l’unité de stimulation tactile avec le filament directement sous la surface médiane de la jardinière de la patte arrière et appuyez sur la touche de démarrage.

Celui-ci soulève le filament pour stimuler mécaniquement la surface de la jardinière de la patte arrière avec une force croissante. Ensuite, notez le seuil de retrait mécanique des pattes arrière blessées et non blessées. Cet appareil enregistre et affiche automatiquement le maximum fourni lors de la réaction de retrait.

Répétez la stimulation mécanique trois fois avec un intervalle d’environ cinq minutes entre les tests de stimuli et les pattes arrière non blessées dans un ordre contrebalancé, puis calculez la moyenne des seuils de retrait des pattes. Pour étudier la latence de retrait thermique le jour du test, placez le rat dans le sol en verre. Testez la cage 15 à 30 minutes avant l’expérience à l’aide d’un instrument d’analgésie de jardinière thermique, placez la source infrarouge directement sous la surface médiane de la jardinière de la patte arrière et appuyez sur la touche de démarrage.

Cela expose la surface de la jardinière de la patte arrière à un faisceau de chaleur rayonnante à travers une surface en verre transparent. Enregistrez ensuite la latence de retrait des pattes arrière blessées et non blessées. Cet appareil enregistre automatiquement le temps écoulé entre le début de l’stimulus thermique et le retrait de la patte de la source de chaleur.

Répétez la stimulation par la chaleur au moins trois fois avec un intervalle d’environ cinq minutes entre les stimuli en testant les pattes arrière blessées et non blessées dans un ordre contrebalancé, puis calculez la moyenne du retrait des pattes Les latences montrent ici le seuil de retrait mécanique chez les pattes blessées et non blessées des rats wistar avant et jusqu’à 12 jours après la constriction chronique du nerf sciatique. Il y a une réduction significative du seuil de retrait de la patte aux stimuli mécaniques dans la patte arrière ipsilatérale blessée par rapport à la patte arrière controlatérale non blessée. La latence de retrait thermique chez les pattes blessées et non blessées avant et jusqu’à 12 jours après la constriction chronique du nerf sciatique est illustrée.

De même, la latence de retrait thermique est significativement réduite chez la patte arrière ipsilatérale blessée par rapport à la patte arrière controlatérale non blessée. Une fois maîtrisée, la chirurgie CCI peut être correctement effectuée en aussi peu que 20 minutes par animal, ce qui entraîne une hypersensibilité à la douleur à long terme de la patte arrière. Lors de la tentative de cette procédure, il est important de se rappeler d’attacher les ligatures sans serrer car c’est l’auto-étranglement sous les ligatures suite à l’œdème, qui provoque une constriction après son développement.

Cette technique de lésion des nerfs périphériques combinée à l’essai de l’onde P d’hypersensibilité à la douleur pour les chercheurs dans le domaine de la douleur neuropathique afin d’explorer les mécanismes sous-jacents à la douleur chronique due à une lésion nerveuse.