Name: Constriction chronique du nerf sciatique et les essais hypersensibilité à la douleur chez le rat (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-13T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 23 s
Description: Découvrez la ligature chronique du nerf sciatique chez le rat pour étudier la douleur neuropathique. Cette méthode permet de mesurer quantitativement l'hypersensibilité mécanique et thermique de la patte arrière.

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Les auteurs tiennent à remercier la description originale du modèle de l&#39;ICC par Bennett et Xie (1988). Ce travail a été soutenu en partie par des subventions de la Santé nationale et du Medical Research Council of Australia (ID # 568637) et le Bureau NSW pour la science et la recherche médicale à l&#39;heure GMT.

1. Constriction du nerf sciatique chronique Des techniques aseptiques devraient être utilisées pour la procédure chirurgicale. Désinfecter la surface de travail chirurgical avec de l'éthanol 70% et se préparer à l'avance des instruments stériles (par exemple, des ciseaux fins, pinces, et rétracteurs), les gazes, des agrafes et des prélèvements à l'autoclave. Pour de multiples interventions chirurgicales, nettoyer et instruments restériliser d'éthanol à 70% ou un stérilisateur à sec cordon entre les rats. Un masque chirurgical, chapeau cheveux et des gants stériles devraient être portés. Pour la constriction du nerf, de préparer la suture intestinale chromique en le coupant en petits morceaux d'environ 3 cm de longueur immergés dans une solution saline stérile, pour éviter le dessèchement. Pour refermer la plaie, utilisez disponibles dans le commerce sutures de soie stériles. <ol><li> Anesthésier le rat dans une chambre d'induction en utilisant 5% d'isoflurane en O 2, puis elle émet 2% l'isoflurane en O 2 par l'intermédiaire d'une coutume fait un masque facial, et de surveiller l'animal anesthésié au cours de la procédure. Communes anesthésiques alternatives sont inhalées halothane ou de sodium par voie intrapéritonéale du pentobarbital. La kétamine, comme un antagoniste des récepteurs N-méthyl-D-aspartate (NMDA), devrait être évitée puisque ces récepteurs jouent un rôle important dans le développement de la douleur neuropathique. </li><li> Rasez la patte postérieure gauche du rat. Ensuite, placez l'animal sur un tapis chauffant thermo-régulée à 37 ° C et d'appliquer une pommade ophtalmique lubrifiante pour les yeux. </li><li> Stériliser la zone rasée avec trois applications de remplacement de l'alcool isopropylique à 70% et une solution d'iode. </li><li> Avec le rat couché sur sa poitrine / thorax, élever la jambe gauche de derrière et maintenir en position avec le femor à 90 ° par rapport à la colonne vertébrale à l'aide de ruban-cache sur le pied. </li><li> Faire une incision dans la peau parallèlement, mais de 3-4 mm en dessous de la femor, et libérer la peau des muscles entourant l'incision en coupant à travers le tissu conjonctif. </li><li> Avec des ciseaux émoussés, coupées à travers le tissu conjonctif entre les fessiers superficiel et les bicepsmuscles crural. </li><li> Utiliser un écarteur à creuser l'écart entre les deux muscles, ce qui permet une visualisation claire du nerf sciatique. </li><li> Utilisation de courbes atraumatiques pince et micro-ciseaux, doucement libre environ 10 mm du nerf sciatique (à proximité de la trifurcation sciatique) à partir du tissu conjonctif environnant. </li><li> Sous le microscope et une bonne source de lumière, attachez quatre ligatures (intestin chromique 4.0, Ethicon, États-Unis) avec un double nœud, 1 mm d'intervalle, à proximité de la trifurcation du nerf sciatique. Pour chaque ligature, commencer avec une seule boucle lâche, puis saisissez les deux extrémités à proximité de la boucle et serrer jusqu'à ce que la boucle est à peine serré et la ligature ne glisse pas le long du nerf. Pour maintenir la boucle dans sa position correcte, placer une deuxième boucle sur le dessus de la première à terminer le nœud. Enfin, couper les bouts de la ligature d'environ 1mm. Constriction du nerf devrait être minime, et immédiatement arrêté si une secousse brève est observée, pour empêcher l'arrestation d'edébit sanguin e epineural. Au cours de serrer les ligatures conduit à axotomie, et autotomie (auto-mutilation), les deux effets secondaires indésirables qui empêchent succès les tests hypersensibilité à la douleur. </li><li> Utilisez des sutures (Mersilk 5.0, Ethicon) pour fermer la couche musculaire et des agrafes (Autoclip, 9 mm) pour fixer la peau. Ensuite, utilisez une solution d'iode (Riodine) pour stériliser la plaie. </li><li> Observez le rat étroitement au cours de la période de récupération d'anesthésie, et lui permettre de récupérer dans une cage séparée avec lit le papier à plat (pas la litière des animaux d'élevage norme), afin d'éviter l'animal inconscient d'étouffement. Avant de donner des enquêteurs analgésie post-opératoire doit tenir compte du fait cela peut interférer avec les tests hypersensibilité à la douleur. En fait, il existe des preuves que l'application locale d'anesthésique, la lidocaïne, au moment du traumatisme peut altérer le développement de la douleur neuropathique, et de diminuer le degré de l'hyperalgésie dans les semaines précédentes 7. Pour plus de détails sur ce mAtter voir revue par Bennett et al 8. </li></ol> 2. Les mesures de comportements de la douleur <ol><li> Des manipulations quotidiennes des rats pendant plusieurs jours avant de commencer l'expérience est recommandé afin d'habituer les rats à leur gestionnaire, réduire le stress et le risque de mordre. </li><li> Avant les tests de comportement, les rats ont besoin d'être habitué à la procédure de test et le compartiment des animaux. L'environnement du test devrait rester au calme et bien contrôlée, avec la température et hygrométrie constantes, et réalisé à la même époque de la journée chaque session de test. </li><li> Hypersensibilité à la douleur des tests doivent être effectués plusieurs fois avant de l'ICC (base) et à différents moments après l'ICC, comme vous le souhaitez. </li></ol> 3. Seuil de retrait mécanique <ol><li> Le jour du test, les rats placer dans la cage des tests de maille élevée étages 15-30 minutes avant de mesurer les seuils de retrait, ce qui permet la cage d'exploration et de Grooactivités ming de cesser et de rats de devenir détendu et immobile. </li><li> En utilisant une dynamique plantaire von Frey esthésiomètre (Ugo Basile, Italie), la position de l'unité de contact-stimulateur avec le filament directement sous la surface mi-plantaire de la patte arrière, en évitant le treillis métallique, et appuyez sur la touche de démarrage. Ce lève le filament à stimuler mécaniquement la surface plantaire de la patte arrière avec une force croissante. </li></ol> Manuelles von poils Frey sont une série de filaments de diamètre croissant qui sont calibrés pour induire une force spécifique lorsqu'elle est appliquée sur la peau. Ils peuvent être utilisés comme une alternative à un esthésiomètre électronique plantaire dynamique von Frey pour la mesure du seuil de retrait de la patte, comme décrit précédemment 4. Il ya également plusieurs autres fabricants de von électronique esthésiomètres Frey (p. ex IITC, Etats-Unis et Somedic, Suède). <ol start="3"><li> Enregistrez le seuil de retrait mécanique de hindpa fois blessé et saufsws, dans un ordre contrebalancé. Ce dispositif applique une pression sur la patte et de la réaction de retrait le système enregistre et affiche automatiquement la force maximale appliquée (en grammes). Si une réponse ambiguë se produit (c.-à-dans le cas de la marche ou de toilettage), répétez le stimulus et enregistrer le seuil à nouveau. Lécher ou en secouant de la stimulation suivante patte arrière est un signe de comportement associé à la douleur. </li><li> Répétez la stimulation mécanique 3 fois avec un intervalle d'environ 5 min entre les stimuli, enregistrer les seuils, puis calculer la moyenne des seuils de retrait de la patte. </li></ol> 4. Latence de retrait thermique L'intensité de chaleur infra-rouge (IR) de l'instrument d'essai plantaire doit être ajustée avant de commencer l'expérience. Dans notre laboratoire, nous ajustons l'intensité IR de donner un temps de latence moyen de patte de retrait d'environ 10 secondes chez les rats naïfs, et nous avons mis le temps de latence de coupure à 20 secondes pour éviter d'endommager les tissusl'âge en cas d'échec pour supprimer une patte. <ol><li> Le jour du test, les rats placer dans la cage de verre tests étages 15-30 minutes avant de mesurer la latence, permettant l'exploration cage et le toilettage des activités de cesser et les rats de devenir détendu et immobile. </li><li> L'utilisation d'un instrument de l'analgésie thermique plantaire (Ugo Basile, Italie), la position de la source infrarouge directement sous la surface mi-plantaire de la patte arrière, et appuyez sur la touche de démarrage. Cette situation expose la surface plantaire de la patte arrière d'un faisceau de chaleur rayonnante à travers une surface en verre transparent. Il ya aussi d'autres fabricants de thermiques instruments analgésie plantaires (p. ex IITC, Etats-Unis et Stoelting, Etats-Unis). </li><li> Noter le temps de latence de retrait à partir de pattes de derrière à la fois blessés et saufs, dans un ordre contrebalancé. Ce dispositif enregistre automatiquement le temps nécessaire (en secondes) depuis le début de la stimulation thermique pour le retrait de la patte de la source de chaleur. Si une réponse ambiguë se produit (c.-à-dans le cas de ambulation ou de la toilette), répétez le stimulus et enregistrer le temps de latence à nouveau. Lécher ou en secouant de la stimulation suivante patte arrière est un signe de comportement associé à la douleur. </li><li> Répétez la stimulation de la chaleur au moins 3 fois avec un intervalle d'environ 5 min entre les stimuli, enregistrer les temps de latence, puis calculer la moyenne des temps de latence retrait de la patte. </li></ol> 4. Les résultats représentatifs Un exemple de seuil de retrait mécanique et de la latence de retrait thermique dans les pattes ipsilatéral (blessé) et controlatéral (indemne) de rats Wistar est montré avant (de référence) et 2-12 jours après l'ICC à la figure 3A, et la figure 3B. De ces chiffres, il peut être vu que de l'ICC entraîne une réduction significative dans les deux seuils de retrait mécaniques et thermiques latences de retrait de la patte postérieure ipsilatérale, indiquant la présence d'hypersensibilité à la douleur mécanique et thermique, les deux caractéristiques de la douleur neuropathique chronique . <img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/3393/3393fig1.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figure 1"> Figure 1. Un schéma illustrant le positionnement des ligatures dans le modèle ICC. Ce modèle animal de la douleur neuropathique implique le placement de quatre lâches chromique-intestinale ligatures sur le nerf sciatique, à mi-cuisse. Il en résulte qu'une partie blesser des afférents allant de l'hypersensibilité à la douleur pied et postérieure de la patte arrière. <img alt="Figure 2" src="/files/ftp_upload/3393/3393fig2.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figure 2"> Figure 2. Schéma de la zone patte arrière utilisé pour le test de douleur. La surface à mi-plantaire juste derrière les coussinets plantaires, comme indiqué par le cercle rouge en pointillés, est utilisé pour le test de douleur. Cette zone est innervé principalement par les branches terminales du nerf sciatique. Le talon et coussinets doivent être évités en raison de la sensibilité cutanée différentielle. 3.jpg "/&gt; Hypersensibilité à la douleur la figure 3. À la suite de constriction chronique du nerf sciatique chez le rat. Après l'ICC, il ya une réduction significative du seuil de retrait de la patte à des stimuli mécaniques (A) et la latence de retrait de patte à des stimuli thermiques (B) en la personne lésée (ipsilatéral) patte arrière par rapport à la non blessé (controlatéral) patte arrière (P &lt;0,01 mesures répétées 2 ANOVA). Les données montrent moyenne ± SEM, n = 7 rats Wistar.

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</ol>

Des expériences sur des animaux ont été approuvés par le soin des animaux et le Comité d&#39;éthique de l&#39;Université de New South Wales, en Australie, et est conforme aux directives émises par l&#39;Association internationale pour l&#39;étude de la douleur.

CCI est largement utilisé modèle de périphérique des lésions nerveuses de la douleur neuropathique chronique. Il est relativement simple à réaliser, et produit hypersensibilité à la douleur robuste et stable pour au moins un mois après une blessure. Après l&#39;ICC, les rats présentent une posture anormale de la patte arrière lésée (orteils maintenues ensemble et flexion plantaire et la patte éversée), ainsi que répété en secouant, de gardiennage et le léchage de la patte arrière lésée suggérant la présence de la douleu...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom du réactif / équipements </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires </td></tr><tr><td> Intestin chromique </td><td> Ethicon </td><td> G-211 </td><td> Épaisseur de 4-0 </td></tr><tr><td> L&#39;isoflurane </td><td> Delvet Pty Ltd, Seven Hills, NSW </td><td> n / a </td><td></td></tr><tr><td> Mersilk </td><td> Ethicon </td><td> W-580 </td><td> 5-0 épaisseur </td></tr><tr><td> Autoclip </td><td> Becton Dickinson </td><td> 427631 </td><td> 9 mm acier inoxydable </td></tr><tr><td> Riodine </td><td> Orion </td><td> R1000802F </td><td> 1% p / v d&#39;iode </td></tr><tr><td> Thermique instrument analgésie plantaire </td><td> Ugo Basile </td><td> 37370 </td><td></td></tr><tr><td> Dynamique esthésiomètre plantaire </td><td> Ugo Basilee </td><td> 37400 </td><td></td></tr></tbody></table>

constriction chronique du nerf sciatique et les essais hypersensibilité à la douleur chez le rat

Chronic Constriction of the Sciatic Nerve and Pain Hypersensitivity Testing in Rats

Douleur neuropathique chronique, résultant de dommages au système nerveux central ou périphérique, est une condition fréquente et invalidante, affectant 7-18% de la population 1,2. Les symptômes comprennent spontanée (picotements, sensation de brûlure, des chocs électriques comme) la douleur, dysesthésie, paresthésie, allodynie (douleur résultant de normalement non douloureuses stimuli) et l&#39;hyperalgésie (une réponse accrue aux stimuli douloureux). Les symptômes sensoriels sont co-morbide avec des troubles du comportement, comme l&#39;insomnie et la dépression. Pour étudier la douleur neuropathique chronique des modèles animaux mimant plusieurs lésion du nerf périphérique ont été développés, l&#39;un des plus couramment utilisé est Bennett et Xie (1988) du nerf sciatique unilatérale de constriction blessure chronique (ICC) 3 (Figure 1). Nous présentons ici une méthode pour effectuer des CCI et hypersensibilité à la douleur des tests. CCI est réalisée sous anesthésie, avec le nerf sciatique d&#39;un côté exposé en faisant le plusincision parents, et couper à travers le tissu conjonctif entre les fessiers et superficiel biceps fémoral muscles. Quatre ligatures intestinale chromiques sont liés de façon lâche autour du nerf sciatique à intervalles de 1 mm, à un peu boucher, mais pas arrêter le flux sanguin epineural. La plaie est refermée avec des sutures dans le muscle et les agrafes dans la peau. L&#39;animal est ensuite autorisé à récupérer d&#39;une chirurgie pendant 24 heures avant le test hypersensibilité à la douleur commence. Pour les tests comportementaux, les rats sont placés dans l&#39;appareil d&#39;essai et sont autorisés à s&#39;habituer à la procédure de test. La zone testée est la surface mi-plantaire de la patte arrière (Figure 2), qui s&#39;inscrit dans la distribution du nerf sciatique. Seuil de retrait mécanique est évaluée par les deux pattes de derrière mécaniquement stimuler blessés et saufs en utilisant une électronique dynamique plantaire von Frey esthésiomètre ou manuel von Frey poils 4. Le seuil de retrait mécanique est la pression maximale exercée(En grammes) qui déclenche retrait de la patte. Pour la mesure de temps de latence de retrait thermique, la première fois par Hargreaves et al (1988), la patte arrière est exposée à un faisceau de chaleur rayonnante à travers une surface de verre transparente à l&#39;aide d&#39;un compteur plantaire analgésie 5,6. Le temps de latence de retrait de la relance de la chaleur est comptabilisé comme du temps de retrait de la patte dans les deux pattes de derrière blessés et saufs. Après l&#39;ICC, seuil de retrait mécanique, ainsi que la latence de retrait thermique dans la patte blessée sont à la fois considérablement réduit, par rapport à des mesures de référence et la patte indemne (figure 3). Le modèle CCI de lésion du nerf périphérique associée à des tests hypersensibilité à la douleur constitue un système modèle pour étudier l&#39;efficacité d&#39;agents thérapeutiques potentiels pour modifier la douleur neuropathique chronique. Dans notre laboratoire, nous utilisons CCI aux côtés de la sensibilité thermique et mécanique des pattes postérieures pour enquêter sur le rôle des interactions neuro-immunes dans la pathogenèseet le traitement de la douleur neuropathique.

Grâce à la simplicité de la chirurgie et le résultat robuste du comportement, de constriction chronique du nerf sciatique est l&#39;un des modèles animaux pré-éminents de la douleur neuropathique. Dans les 24 heures suivant la chirurgie, hypersensibilité à la douleur est établi et peut être mesurée quantitativement l&#39;aide d&#39;un von Frey esthésiomètre (essais mécaniques) et le compteur analgésie plantaire (essai thermique).

Constriction chronique du nerf sciatique et les essais hypersensibilité à la douleur chez le rat

La douleur neuropathique chronique, résultant de lésions du système nerveux central ou périphérique, est une affection prévalente et débilitante qui touche 7 à 18 % de ...

L'objectif général de cette procédure est de réaliser une constriction chronique du nerf sciatique, un modèle couramment utilisé chez le rongeur pour étudier la douleur neuropathique, et de mesurer quantitativement les comportements douloureux qui en résultent. Cela est réalisé en plaçant d'abord quatre ligatures en boyau chromatique autour du nerf sciatique exposé au niveau moyen de la cuisse, afin de provoquer une lésion par constriction du nerf sciatique. Ensuite, surveiller les comportements douloureux au niveau de la patte postérieure à des intervalles de temps choisis, en mesurant quantitativement le seuil de retrait de la patte en réponse à un stimulus mécanique à l’aide d’un esthésiomètre von Frey, et la latence de retrait de la patte en réponse à un stimulus thermique à l’aide d’un analgésimètre plantaire.Des résultats finaux peuvent être obtenus, montrant l'existence de douleur mécanique et thermique, ainsi qu'une hypersensibilité de la patte arrière lésée, grâce à la mesure des réponses évocatrices de retrait face à des stimuli mécaniques et thermiques. Cette méthode de lésion du nerf périphérique, initialement développée par Bene et Z, peut nous aider à répondre à des q

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Le modèle du nerf Epargnée blessures animal est décrit ici comme un modèle murin de douleur neuropathique périphérique suivantes dénervation partielle du nerf sciatique par lesioning les branches du tibia et du nerf péronier commun, laissant le nerf saphène reste intacte. Modification du comportement résultant d'allodynie mécanique est quantifiée par des filaments de von Frey.

Les blessures du nerf Epargnée (SNI) Modèle d&#39;allodynie mécanique induite chez la souris

Nous décrivons deux méthodes de tests sensoriels tactiles pour des périodes aiguës ou chroniques de lésions de la moelle épinière chez le rat. Ces procédures validées peut détecter le développement et la maintenance de l'allodynie des sensations semblables.

Aiguë et chronique Test tactile sensorielle après un traumatisme médullaire chez le rat

La douleur neuropathique est une conséquence d'une lésion ou d'une maladie affectant le système somatosensoriel. Le «modèle de manchette» de la douleur neuropathique chez les souris se compose de l'implantation d'un brassard de polyéthylène autour de la branche principale du nerf sciatique. L'allodynie mécanique est testée en utilisant des filaments de von Frey.

Le nerf sciatique menottes modèle de douleur neuropathique chez les souris

Fourni ici est un protocole qui détaille les étapes pour établir un modèle animal de la douleur chronique post-ischémie (CPIP). C'est un modèle bien-reconnu imitant le type régional humain de syndrome de douleur-I. Les hypersensibilités mécaniques et thermiques sont davantage évaluées, ainsi que les comportements nocifensives induits par la capsaïcine observés dans le modèle de rat CPIP.

Modèle chronique de douleur de poteau-ischémie pour le syndrome régional complexe de douleur type-I chez les rats

Pour développer de nouvelles interventions thérapeutiques pour la prévention et la prise en charge des maux de dos, des modèles animaux sont nécessaires pour examiner les mécanismes et l’efficacité de ces thérapies dans une perspective translationnelle. Le présent protocole décrit le test BMS, une méthode normalisée pour évaluer la sensibilité mécanique dorsale chez le rat.

Évaluation de la sensibilité mécanique du dos chez le rat pour l’étude mécaniste des maux de dos chroniques

La ligature partielle du nerf sciatique induit une douleur neuropathique chronique de longue durée, caractérisée par des réponses exagérées aux stimuli thermiques et mécaniques. Ce modèle murin de douleur neuropathique est couramment utilisé pour étudier des thérapies innovantes pour la gestion de la douleur. Cet article décrit en détail l’intervention chirurgicale pour améliorer la standardisation et la reproductibilité.

Ligature partielle du nerf sciatique : un modèle murin de douleur neuropathique chronique pour étudier l’effet antinociceptif de nouvelles thérapies

Nous présentons un protocole d’utilisation de l’aiguilletage sous-cutané de Fu dans un modèle de lésion de constriction chronique pour induire une douleur du nerf sciatique chez le rat.

Efficacité de l’aiguilletage sous-cutané de Fu sur la douleur du nerf sciatique : changements comportementaux et électrophysiologiques dans un modèle de rat de constriction chronique

Les lésions de constriction chronique du nerf infraorbitaire distal chez la souris induisent des changements dans le comportement spontané (augmentation de l’activité de toilettage du visage) et le comportement nocifensif en réponse à la stimulation tactile (hyperréactivité à la stimulation des cheveux de von Frey) qui sont des signes de douleur continue et d’allodynie et servent de modèle pour la douleur neuropathique du trijumeau.

Lésion de constriction chronique du nerf sous-orbitaire distal (DIoN-CCI) chez la souris pour étudier la douleur neuropathique du trijumeau

Ici, nous présentons une méthode pour évaluer l’activation et le blocage des axones sensoriels dans les nerfs périphériques lors d’expériences aiguës, anesthésiées et in vivo sur des rats, en utilisant deux types de mesures électrophysiologiques spinales capables de discriminer l’activité des sous-types de fibres nerveuses : les potentiels de champ local et les enregistrements mononeuronaux à large plage dynamique.

Méthodes électrophysiologiques pour évaluer le blocage de la douleur périphérique chez un rat anesthésié

Nous décrivons un procédé par étapes pour la création d'une surcharge de pression et de l'hypertrophie ventriculaire gauche chez des rats Wistar par constriction de l'aorte ascendante en utilisant une petite pince métallique. Ce modèle est largement utilisé pour étudier les changements de remodelage pendant l'hypertrophie cardiaque et pour identifier et évaluer les stratégies pour la régression de ces changements.

Aortique ascendant constriction chez les rats pour la création de la surcharge de pression hypertrophie cardiaque Modèle

Découvrez la ligature chronique du nerf sciatique chez le rat pour étudier la douleur neuropathique. Cette méthode permet de mesurer quantitativement l'hypersensibilité mécanique et thermique de la patte arrière.

Constriction chronique du nerf sciatique et les essais hypersensibilité à la douleur chez le rat

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