Isolement et Excision de murin Aorte; Une technique polyvalente dans l'étude des maladies cardiovasculaires

L’objectif global de cette procédure est de stériliser, d’isoler et d’exciser l’aorte murine. Ceci est accompli en exposant d’abord les cavités thoracique et abdominale. La deuxième étape consiste à perfuser avec une solution saline froide et stérile.

Ensuite, les organes des cavités thoracique et abdominale sont retirés, laissant le cœur attaché à l’aorte. La dernière étape consiste à exciser le tissu adipeux périvasculaire et le tissu d’avènement de l’aorte. En fin de compte, un microscope de dissection est utilisé pour vérifier que tous les tissus environnants sont enlevés, et l’aorte peut être utilisée pour une variété d’analyses expérimentales.

Cette technique est donc utile pour répondre à des questions clés dans le domaine de la recherche cardiovasculaire, telles que le développement d’anévrismes et la formation de plaques d’athérosclérose. Vous pouvez donc les examiner en examinant les changements dans la biologie moléculaire, tels que l’expression des gènes et des protéines. Après avoir euthanasié la souris, vérifiez l’état euthanasié par un pincement des orteils.

Ensuite, stérilisez la peau en mouillant la fourrure abdominale avec de l’éthanol à 70 %. Fixez ensuite la souris à la planche chirurgicale en décubitus dorsal avec un appendice tendu. Commencez la chirurgie en utilisant des pinces pour localiser et isoler la peau abdominale juste inférieure au processus xiphoïde.

Ensuite, soulevez la peau et coupez-la avec des ciseaux. Cela devrait exposer la partie supérieure du péritoine et la cavité thoracique inférieure. Ensuite, à l’aide de pinces et de ciseaux, soulevez l’apophyse xiphoïde et faites des incisions latérales juste inférieures le long des marges sous-costales.

Pour disséquer la cavité thoracique, entrez par le diaphragme, en faisant attention de ne pas endommager le cœur ou les principaux vaisseaux dans le processus. Maintenant, les incisions latérales sont prolongées le long des marges sous-costales. Ainsi, retirez la partie antérieure de la cage thoracique.

Une dissection émoussée pour retirer le cœur de la paroi thoracique antérieure peut être nécessaire pour compléter ces incisions. Maintenant, à l’aide de gaze, nettoyez la cavité thoracique de l’excès de liquides pour rendre les organes plus faciles d’accès. Ensuite, retirez les poumons à l’aide d’une pince et de ciseaux, lobe par lobe.

Le cœur et l’aorte doivent ensuite être entièrement exposés et facilement accessibles pour recueillir le sang via une ponction cardiaque. Faites-le maintenant avant de procéder à la perfusion pour perfuser le cœur, remplissez une seringue de 10 cc avec 10 millilitres de glace stérile une XPBS. Fixez ensuite une aiguille de calibre 25.

Insérez soigneusement l’aiguille dans le ventricule gauche. Faites ensuite une incision dans l’oreillette droite afin qu’une pression excessive ne s’accumule pas dans le système circulatoire à l’étape suivante. Maintenant, au cours des deux à trois prochaines minutes, éjectez lentement le PBS de la seringue dans le cœur.

Lors de l’éjection PBS, utilisez de la gaze stérile pour absorber le liquide qui s’écoulera de l’oreillette au niveau de l’incision. Lorsque le PERFUSE huit est entièrement éjecté, absorbez tout liquide restant avec de la gaze qui obscurcit une vue nette de la cavité thoracique. Pour exposer le contenu gastro-intestinal, coupez de manière coddée à travers la paroi abdominale, en étendant l’incision à la région sus-pubienne.

Une fois là, coupez bilatéralement vers les membres inférieurs pour faire un lambeau de peau, qui peut être épinglé ou excisé. Passer à autre chose permet d’enlever plusieurs organes, les lobes du foie, le pancréas, la rate, les intestins et la partie inférieure de l’œsophage. Cela ouvre la vue sur l’aorte.

Soyez très prudent lors de la dissection de la région de Perren car il y a des branches superficielles de l’aorte aux artères rénales dans cette région. Faites cette dissection avec précision et soin, car les bactéries du GI peuvent contaminer les autres tissus, rincez la zone dégagée avec un XPBS et absorbez l’excès de solution avec de la gaze, l’aorte doit être facilement accessible. Donc, avec des ciseaux et des pinces, séparez l’aorte de la colonne vertébrale.

Une dissection contondante est appropriée, et l’utilisation d’un microscope à dissection est fortement recommandée. L’aorte peut être enlevée, en commençant par coddly ou cran. Ce qui compte, c’est un processus ordonné de nettoyage et de séparation des tissus.

Lors de la dissection du tissu adipeux périvasculaire, retirez-le à l’aide de micro-ciseaux fins pour éviter d’endommager la paroi aortique. Cela minimise le risque de contamination par les fibroblastes lors de la culture de cellules musculaires lisses aortiques. L’excision soigneuse du tissu périvasculaire, adipeux et adventice est très importante.

Tout tissu restant pourrait provoquer une contamination lors de la culture cellulaire, mais aussi biaiser vos tests moléculaires. À l’aide de cette procédure, une aorte intacte provenant du cœur descend dans les cavités thoracique et abdominale. Avec les artères rénales encore attachées est obtenue, l’aorte peut être imagée in situ pour quantifier les changements morphométriques, qui sont diagnostiques dans l’étude des anévrismes de l’aorte abdominale.

Par la suite, l’aorte peut être enlevée, fixée et colorée pour examiner les changements histologiques tels que la coloration à l’hémat, au toin et à l’eoïne, ou avec la coloration ver Hoff Van Geen pour examiner les bandes d’élastine et ainsi voir l’intégrité structurelle de l’aorte. Les cellules aortiques peuvent également être utilisées pour l’isolement de cellules primaires et pour des études in vitro telles que des études de viabilité et de localisation de protéines. Après la procédure, vous pouvez utiliser d’autres techniques telles que l’isolement de protéines et d’ARN pour examiner l’expression des protéines, l’activité enzymatique ainsi que l’expression des gènes.