Name: Développement dun In vitro Système modèle pour létude de linteraction de Equus Caballus IgE avec son récepteur de haute affinité FcsRI (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-11-01T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 31 s
Description: Découvrez un test de libération de médiateurs utilisant des cellules RBL transfectées avec le gène FcεRIα équin. Cette méthode quantifie la réponse allergique IgE-dépendante pour développer des traitements.

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Les auteurs remercient la Dre Lynda Partridge pour ses conseils et ses installations de laboratoire.

1) Préparation de la lignée cellulaire: <ol><li> Le développement de la lignée de cellules RBL-de 2H3.1 exprimer équins α FceRI: <ol><li> En utilisant des techniques de base de culture de tissus de lignées de cellules en monocouche, transfecter des cellules RBL-2H3.1 parentales en utilisant le plasmide pEE6, portant le gène équine FcεRIα (GenBank: Y18204.1) 28. Ajouter 2 ul -1 pg de l'ADN plasmidique de 0,8 ml de cellules à une densité de 1,2 x 10 7 cellules ml -1. L'électroporation des cellules à 250 V 960 pF en utilisant un 0,4 cm electrocuvette puis incuber immédiatement sur la glace pendant 10 min. </li><li> Sélectionnez les cellules transformées en utilisant les médias contenant 0,4 g de sulfate de généticine G418, puis trier les cellules vivantes restantes par FACS en les étiquetant avec un anticorps fluorescent IgE. Utilisez le RBL-2H3.1 résultant lignée cellulaire exprimant FcεRIα équine de l'enquête 2, 3. </li></ol></li><li> Pré-test anticorps sensibilisation: <ol><li r la rbl-2h3.1 cellules exprimant fc d en provenance bo de p confluence. laver ensuite remettre suspension les dans un milieu culture une densit cellulaire>5 cellules ml-1. </li><li> Ajouter l'IgE de l'intérêt pour les cellules en suspension à une concentration finale de 1 ng ml-1, puis la plaque 100 pl de cellules sur une plaque à 96 puits à colonnes 1-6 et incuber à 37 ° C + 5% de CO 2 + 90% humidité relative pendant 16 heures. Après le temps d'incubation, et avant d'effectuer le test de libération, vérifier les puits sous un microscope pour bien confluence et l'adhérence des cellules. </li></ol></li></ol> 2) Dosage de libération: <ol><li> Lavage des cellules: <ol><li> Un tampon de sortie chaud (25 mM de PIPES, du chlorure de sodium 120 mM, 5 mM de chlorure de potassium, 0,04 mM de chlorure de magnésium et 1 mM de chlorure de calcium) à 37 ° C pour permettre le lavage des cellules en douceur. </li><li> Laver les cellules en tapotant la plaque pour enlever médias cellulaires et ajouter 100 ul chaud, 37 ° C, tampon de sortie. Répéter deux fois. </li></ol></li><li> Défi antigène: <ol><li> Préparer une série de dilutions de l'antigène (NIP-HSA ou DNP-HSA) de 0 ng ml -1, 0,1 ng ml -1, 1 ng ml -1, 10 ng ml -1, 100 ng ml -1, 1 000 ng ml -1, 10 000 ng ml -1 dans le tampon de sortie et chaud à 37 ° C. </li><li> Après le second lavage de cellules, éliminer les médias et remplacé par 100 ul de la solution d'antigène. Veiller à ce que les puits dans la même rangée (A1-6, par exemple) ont la même concentration ajoutée à leur antigène. </li><li> Mettre en place un contrôle négatif à la ligne A en ajoutant 0 antigène -1 ml ng. Ajouter augmentation de la concentration de l'antigène dans les rangées (BG), suivie par triton x-tampon (5% de Triton X-100) dans les cellules de rangées H à lyser les cellules pour être utilisé en tant que contrôle positif. Incuber à 37 ° C pendant 20 min pour permettre aux cellules de libérer ses médiateurs. </li></ol></li><li> Configuration du contrôle de puits individuels: <ol><li> Après l'incubation, transférer 50 pi de surnageant de cellules à l'autre moitié de la plaque (A1-6 puits à puits A7-12, etc.). Jeter les 50 ul de surnageant restant et le remplacer par 50 ul de Triton X-tampon pour permettre la mesure de la quantité de médiateurs libérés à chaque puits dans les colonnes 7 à 12 en pourcentage du total des médiateurs à l'intérieur des cellules dans la colonne 1-6 . </li></ol></li><li> Substrat enzymatique: </li><li> Ajouter 50 ul de substrat de β-hexosaminidase (mM 4-nitrophényl N-acétyl-β-D-de glucosaminide préparé dans du DMSO dilué jusqu'à 2 mM en l'ajoutant à un tampon de citrate 0,2 M d'acide citrique et 0,2 M d'acétate de sodium, pH 4,5 à 50) dans tous les puits de la facilité de conversion du substrat de 4-nitrophénol par l'enzyme β-hexosaminidase. Incuber les plaques à 37 ° C pendant 2 heures. </li></ol><img alt="Figure 2.4.1" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/52222/52222fig241.jpg" width='"400"'><ol start="5"><li> Mettre fin à la réaction: <ol><li> Arrêter la réaction par l'ajout de 150 ul de tampon Tris (1 M de Tris-HCl, pH 9) à chaque puits comme le pH élevé de la mémoire tampon arrête la réaction et le transforme en 4-nitrophénol de couleur jaune. </li></ol></li><li> La lecture et l'analyse des résultats: <ol><li> Lire la plaque à l'aide d'un spectrophotomètre de plaque à 405 nm pour mesurer l'absorbance de la couleur jaune. Calculé le pourcentage de β-hexosaminidase libéré en utilisant la formule suivante: </li></ol></li></ol><img alt="Figure 2.6.1" fo:content-width="1in" src="/files/ftp_upload/52222/52222fig261.jpg" width="100"><ol start="2"><li> Appliquer cette formule à chaque puits, après quoi une moyenne est calculée pour chaque ligne. A1 et A7 représentent la position des puits dans la plaque à 96 puits. Tracer la courbe de pourcentage de β-hexosaminidase de presse (qui correspond à la libération totale du médiateur) contantigène NST de concentration 2, 3. </li></ol>

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</ol>

Les auteurs déclarent qu’ils n’ont pas d’intérêts financiers concurrents dans cet article.

En résumé, les résultats de cette enquête ont montré que lorsque les cellules RBL-2H3.1 exprimant FcεRIα équins sont sensibilisées avec équine IgE et remis en cause par un antigène, ils donnent un pic de libération de médiateur de 36,68% ± 4,88% du montant total de médiateur à l&#39;intérieur du cellules, par rapport à la RBL-2H3.1 cellules parentales non exprimant équine FcεRIα. Ainsi, ce test fournit un outil utile pour étudier et étudier les réponses allergiques équins in vitro. ...

Allergie est connue depuis des millénaires. Un traitement de l&#39;asthme a été décrit dans le texte médical égyptien antique connu sous le papyrus Ebers (~ 1550 avant notre ère) et discuté remèdes pour traiter 7. allergie est aujourd&#39;hui considéré comme une réponse d&#39;hypersensibilité de type I, où le type T cellulaire auxiliaire 2 (TH 2) du bras du système immunitaire dirige la production d&#39;immunoglobulines E (IgE), des anticorps en réponse à des antigènes environnementaux appelés allergènes. Ce sont diverses substances qui interagissent couramment avec les cellules du système immunitaire et stimuler la synthèse et la sécrétion de cytokines pro-inflammatoires, y compris l&#39;interleukine-4 et l&#39;interleukine-13, 8, 9 comme ne particules dans les particules de fumée de cigarette ou diesel échappement qui augmente la synthèse des IgE 10. La hausse des manifestations allergiques dans les pays industrialisés au cours des 50 dernières années a été attribué à une combinaison de l&#39;effet depolluants de l&#39;environnement et une tendance à un environnement plus aseptisé, qui se combinent pour décaler la réponse immunitaire vers un profil prédominé par Th 2 cytokines, telle que proposée par la &#39;hypothèse hygiénique »11. Comme mentionné ci-dessus, l&#39;homme ne sont pas les seuls mammifères affligés par une allergie. Notamment les chevaux et les chiens peuvent aussi développer des réactions allergiques classiques et une étude de 12 a montré que, comme chez les humains, l&#39;allergie équin est attribuée à des facteurs génétiques et environnementaux. En conséquence, ces animaux présentent de bons modèles pour étudier l&#39;interaction entre les facteurs génétiques et environnementaux de l&#39;allergie, la progression de la sensibilisation à la maladie et les stratégies d&#39;intervention possibles une fois les manifestations cliniques sont fixés dans En 1887, Stömmer était la première personne pour décrire la similitude entre l&#39;homme et l&#39;asthme équine 13, l&#39;effet de l&#39;histamine sur le système cardio-vasculaire équine esttrès similaire à celui des humains 14. Les chevaux sont aussi la pierre angulaire de l&#39;industrie des courses de chevaux, qui vaut 72 milliards de dollars, un chiffre d&#39;affaires de paris de 115 milliards de dollars par an 15. La plupart des chevaux de course contemporains sont des descendants du petit nombre de chevaux arabes élevés par Lady Anne Blunt à partir de 1878. Chevaux de course modernes sont souvent consanguins à sélectionner pour les capacités de performance. Ils sont sujets à des troubles génétiques, dont l&#39;un est leur susceptibilité à monter des réponses allergiques. Ils ont aussi 1000 fois plus élevés que les niveaux d&#39;IgE sériques même les êtres humains plus sévèrement allergique 16. réactions allergiques à cheval sont se manifeste habituellement par une hypersensibilité insecte morsure (IBH) 17, 18. IBH résultats dans des dermatoses dues aux piqûres d&#39;insectes forment dans le genre Culicoides. Une autre forme de la maladie allergique équine est obstructions des voies respiratoires récurrentes (RAO), cela se manifeste dans les poumons et les voies respiratoires. Elle est caractérisée par une respiration sifflante et laboratoirerespiration ORed. RAO se produit généralement en réponse à spores de moisissures, et des niveaux élevés d&#39;IgE spécifiques des allergènes ont été enregistrés chez les chevaux atteints de RAO dans une étude 19 mais une autre enquête n&#39;a pas confirmé cette 20. Des études sur l&#39;allergie équine ont tourné autour de l&#39;essai de contrôle et de neutraliser équine IgE par le développement d&#39;anticorps anti-équin IgE monoclonal (mAb) 21, 22. En outre, l&#39;étude de 23 traite de la production de domaines extracellulaires de l&#39;α de l&#39;équin haute affinité Fc récepteur chaîne (FcεRIα) récepteur dans le but de détecter et de quantifier le sérum équin IgE. Une étude connexe par Ledin 24 traite d&#39;une nouvelle approche visant à neutraliser les IgE sériques en amorçant le système immunitaire en utilisant un auto / non-soi immunogène. Toutes ces études, cependant, manquait un dosage efficace pour tester l&#39;innocuité et l&#39;efficacité de leurs protocoles. Dans cet article, nous présentons un tel sys d&#39;essaisystème applicable à l&#39;étude des stratégies diagnostiques et thérapeutiques pertinentes pour le système équin, où β-hexosaminidase libération, comme un indicateur de médiateur de la dégranulation cellulaire, a été évaluée sur des cellules RBL-2H3.1 exprimant FcεRIα équine. Ce protocole est basé sur des publications antérieures 25, 4, 5, 2, 3, décrivant l&#39;ingénierie de cellules RBL transfectées avec le gène codant le domaine de liaison du récepteur IgE de haute affinité pour les IgE provenant d&#39;espèces différentes. Le protocole explique comment effectuer un test de libération de β-hexosaminidase, dont les résultats sont présentés en moyenne ± écart-type d&#39;expériences en triple. Le dosage de la libération a été développé par Siraganian et le crochet 25 pour étudier allergie humaine. Le groupe de laboratoire dirigé par le Dr Reuben Siraganian également développé la lignée cellulaire RBL. Ces cellules RBL ont été développés pour exprimer la FcεRIα humain et le protocole a été publié par 4. La dernière piècedu dosage fournie avec le développement du plasmide pSV dans le papier par Neuberger 26 qui décrit la production d&#39;un anticorps IgE par clonage de son gène de chaîne lourde en aval d&#39;un gène de la souris pour une région variable d&#39;IgE qui cible l&#39;haptène 4-hydroxy-3 nitro-phénacétyle (NP), l&#39;anticorps chimérique résultant était pleinement fonctionnel. La possibilité de développer tout IgE ciblant le même haptène, tout en clonant son récepteur sur la surface des cellules RBL abouti à la normalisation du dosage qui en fait un protocole utile pour mesurer la dégranulation des basophiles. Le test a des avantages et des inconvénients. Les avantages du dosage est son adaptabilité à être utilisé dans un système de mammifère, notre laboratoire a ainsi utilisé pour tester la dégranulation dans les systèmes humains, canins, équins, ce qui est réalisable simplement par synthèse d&#39;IgE de l&#39;organisme et le clonage de son récepteur sur la surface des cellules RBL. D&#39;autre part,les inconvénients de l&#39;essai est que les cellules RBL sont très sensibles aux variations thermiques, mécaniques et PH, ce qui leur donne une variation des niveaux de dégranulation au sein de la même dosage. Il est donc fortement conseillé que les essais sont toujours répétées en triple, puis en prenant la moyenne de leur part. En outre, les cellules RBL ont tendance à se déplacer vers un phénotype non-libération si elles sont laissées en culture de tissu pendant des périodes prolongées (&gt; 10 semaines) 27, ce qui rend leur entretien lourd. Elles sont également sujettes à des infections par des bactéries de mycoplasmes, qui ne sont pas visibles à partir d&#39;un microscope optique et ne modifient pas la morphologie de la cellule, mais cela changerait radicalement leurs niveaux de dégranulation. Ainsi des tests réguliers de mycoplasmes sont nécessaires.

<table><tbody><tr><td>RBL-2H3.1 Expression de Fc&epsilon équin ; RI&alpha ;</td><td>-</td><td>-</td><td>Produit en laboratoire</td></tr><tr><td>IgE équine anti NIP-HSA</td><td>-</td><td>-</td><td>Produit en laboratoire</td></tr><tr><td>96 Well Plate</td><td>Sigma</td><td></td> <td>CLS3595-Pipette</td></tr> <tr><td>multicanal</td><td>Anachem</td><td>-</td><td>-</td></tr><tr><td>Incubateur</td><td>Galaxy R</td><td>-</td><td>-</td></tr><tr><td>4Hydroxy-5-iodo-3-nitrophénylacétique Acide</td><td>Cambridge Research Biochemicals</td><td>N-1070-1</td><td>Le NIP-OH a été conjugué à l’albumine sérique humaine pour fabriquer le NIP-HSA en laboratoire</td></tr><tr><td>Dinitrophényle conjugué à l’albumine sérique humaine</td><td>Sigma</td><td>A6661</td><td>Spectrophotomètre à plaques abrégé DNP-HSA</td></tr><tr><td></td><td>Anthos Labtec HT2</td><td>-</td><td>-</td></tr><tr><td>Pipes</td><td>Sigma</td><td>P1851-Chlorure</td><td></td></tr> <tr>de <td>sodium</td><td>Sigma</td><td>S7653-Chlorure</td><td></td></tr> de <tr><td>potassium</td><td>Sigma</td><td>P9333-Chlorure</td><td></td></tr> <tr>de <td>magnésium</td><td>Sigma</td><td>M2670-Chlorure</td><td></td></tr> <tr>de <td>calcium</td><td>Sigma</td><td>C1016-Triton</td><td></td></tr> <tr><td>x100</td><td>Sigma</td> X100-4-nitrophényle <td></td><td></td></tr><tr><td>N-acétyl-&bêta ;-D-glucosaminide</td><td>Sigma</td><td>N9376</td> La <td>solution mère appelée substrat de &beta ;-hexosaminidase était de 50 mM préparée dans du DMSO</td></tr><tr><td>Dimethyl Sulfoxide</td><td>Sigma</td><td>D2650-Acide</td><td></td></tr> <tr><td>citrique</td><td>Sigma</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>251275-Acétate de sodium</td><td>Sigma</td><td>S7670-Tris</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Sigma</td><td>T5941</td><td>-</td></tr></tbody></table>

développement d'un in vitro système modèle pour l'étude de l'interaction de equus caballus ige avec son récepteur de haute affinité fcsri

Development of an in vitro model system for studying the interaction of Equus caballus IgE with its high-affinity receptor Fc&#949;RI

L’interaction des IgE avec son récepteur Fc de haute affinité (FcεRI) suivie d’un défi antigénique est la principale voie dans les réactions allergiques médiées par les IgE. En raison de la liaison de haute affinité entre les IgE et les FcεRI, ainsi que de la production continue d’IgE par les lymphocytes B, les allergies persistent généralement tout au long de la vie, sans qu’aucun remède permanent ne soit actuellement disponible. Les chevaux, en particulier les chevaux de course, qui sont généralement consanguins, sont une espèce de mammifères très sujette au développement de réponses d’hypersensibilité, ce qui peut sérieusement affecter leurs performances. Les réponses physiologiques à la sensibilisation allergique chez les chevaux reflètent celles observées chez l’homme et le chien. Dans cet article, nous décrivons le développement d’un système de test in situ pour l’évaluation quantitative de la libération de médiateurs de la réponse allergique appartenant au système équin. À cette fin, le gène codant pour l’équidé FcεRIα a été transfecté et exprimé à la surface des cellules parentales de leucémie basophile du rat (RBL-2H3.1). Le produit génique de la chaîne α équine transfectée a formé un complexe récepteur fonctionnel avec les chaînes endogènes β et γ rat 1. Le système de dosage résultant a facilité l’évaluation de la quantité de médiateur sécrétée par les cellules RBL-2H3.1 transfectées de FcεRIα équine après sensibilisation aux IgE équines et à la provocation antigénique en utilisant la libération de β-hexosaminidase comme lecture 2, 3. La libération du médiateur a culminé à 36,68 % ± 4,88 % à 100 ng ml-1 d’antigène. Ce test a été modifié par rapport aux tests précédents utilisés pour étudier les réponses allergiques humaines et canines 4, 5. Nous avons également montré que ce type de système de test a de multiples applications pour le développement d’outils de diagnostic et l’évaluation de l’innocuité de stratégies d’intervention thérapeutique potentielles dans les maladies allergiques 6, 2, 3.

Les cellules RBL-2H3.1 parentales et celles transfectées avec le gène du récepteur de FcεRIα équine ont d'abord été sensibilisées avec des IgE de souris anti- DNP-HSA et la provocation avec l'antigène DNP-HSA. IgE de souris se lie au récepteur de rat endogène dans les deux lignées cellulaires et agit comme un contrôle pour tester la viabilité de la libération de deux lignées cellulaires pour libérer des médiateurs (figure 1 A) ainsi. Ceci est un test important et doit être effectuée régulièrement depuis...

La présente étude décrit le développement et les applications d’un système de dosage génétiquement modifié basé sur la transfection de cellules de leucémie basophile de rat avec le gène équin FcεRIα. Les cellules transfectées expriment un récepteur fonctionnel où la libération de médiateurs de la réponse allergique peut être activée par les IgE et l’antigène.

Développement d'un In vitro Système modèle pour l'étude de l'interaction de Equus Caballus IgE avec son récepteur de haute affinité FcsRI

The interaction of IgE with its high-affinity Fc receptor (Fc&#949;RI) followed by an antigenic challenge is the principal pathway in IgE mediated ...

L’objectif général de l’expérience suivante est de mesurer la quantité de libération de médiateurs dépendants des IgE à partir des cellules leucémiques basophiles RAD. Les symptômes d’allergie sont causés par la libération de médiateurs tels que l’histamine. Maintenant, l’histamine n’est pas le seul médiateur libéré par les basophiles sont les mastocytes.L’ensemble de tous les médiateurs libérés par ces cellules entraîne les signes et les symptômes d’une hypersensibilité immédiate et retardée. Maintenant, les humains ne sont pas les seuls organismes à souffrir d’allergies : les chiens et les chevaux en souffrent également. Afin de développer davantage la recherche et de trouver des traitements contre les allergies tels que des vaccins, un test de libération est nécessaire pour quantifier la quantité de médiateurs libérés, le cas échéant, par le traitement de recherche.C’est la raison de ce test de libération. Le test publié par le médiateur RBL pour le système humain a été développé et publié pour la première fois par Ian et Hook en 1986. Il a ensuite été développé pour le système DOC et maintenant pour le système cheval.Les modifications sont aussi simples que de changer les protéines d’intérêt. La nouvelle de la lignée cellulaire était la leucémie de Rat Baso ou RBL deux lignée cellulaire H 3.1 exprimant la chaîne alpha des récepteurs équins à haute FNT ffc Serin R one à une densité cellulaire de 500 000 cellules par millilitre. Ajouter l’anticorps IgE d’intérêt à une concentration finale d’un nanogramme par millilitre.Ajoutez 100 microlitres du mélange dans une plaque de sol de 96 et incubez pendant 16 heures à 37 degrés. Cela permet aux cellules d’adhérer à la surface du puits et à l’anticorps de se lier à son lavage de récepteur. Deux fois le milieu contenant l’anticorps non lié restant et les cellules mortes avec 100 microlitres de tampon de libération chaude à 37 degrés.Jetez le tampon du dernier lavage et remplacez-le par 100 microlitres de l’antigène d’intérêt à la concentration d’intérêt. Après une incubation de 20 minutes à 37 degrés, transférez 50 microlitres de SUP natin contenant les médiateurs de libération dans un nouveau puits et remplacez le surnageant restant par 50 microlitres de tampon Triton X pour allonger les cellules et libérer les médiateurs restants à l’intérieur des cellules. À 50 microlitres de 2 millions de molaires bêta hx.Plusieurs jours de substrat dissous dans un tampon de citrate. Après une incubation de deux heures à 37 degrés, ajoutez 150 microlitres de tampon tris dans chaque puits en rajeunissant le puits. Mesurez l’absorbance de la couleur à 405 nanomètres après 16 heures.Réchauffez le tampon de dosage de libération, également connu sous le nom de tampon Ian, à 37 degrés. Préparez également le gradient de concentration de l’antigène dans le tampon de libération aux concentrations. Zéro 0,1 1 10, 100, 100 et 10 000 nanogrammes par millilitre.Puis chaud à 37 degrés. Lavez les puits en retournant rapidement le plat pour retirer le média et ajoutez doucement 100 microlitres de tampon de libération chaude vers les parois des puits. Il s’agit de réduire le stress cellulaire dû à la différence de température, qui les amène à libérer prématurément des médiateurs.Le plat doit être lavé deux fois. Jetez le tampon de libération final, lavez et ajoutez 100 microlitres d’antigène, en commençant par une concentration d’antigène nulle à la rangée A pour le contrôle négatif, et en descendant le gradient de concentration des rangées B à G et enfin aux tranches de Triton X, tampon à la rangée H. Incuber l’assiette pendant 20 minutes à 37 degrés.C’est à ce moment-là que les cellules libèrent des médiateurs après la période d’incubation. Transférez 50 microlitres du liquide dans chaque puits dans son puits respectif. Aux colonnes sept à 12, retirez complètement et jetez le liquide restant aux positions un à six et remplacez-le par 50 microlitres de tampon de lyse Triton X.Ajoutez 50 microlitres du substrat préparé dans les 96 puits du plat. Incuber à 37 degrés pendant deux heures. Le bêta H, plusieurs jours transforme le substrat en quatre nitrophénols.Après la période d’incubation, arrêtez la réaction en ajoutant 150 microlitres de tampon tris, transformant les quatre nitrophénols en une couleur jaune. Lire la plaque à l’aide d’un spectrophotomètre à plaques à 405 nanomètres. Après avoir mesuré les données d’absorbance, calculez la quantité totale de médiateurs à l’intérieur des cellules dans la position A des puits en multipliant.Son puits correspondant à la position a sept sur deux et en ajoutant le résultat à la valeur en un. En effet, pendant l’expérience, nous avons le supinat contenant l’opposition des médiateurs de libération A lorsque nous l’avons transféré dans un nouveau puits d’opposition. Un sept.Répétez les calculs pour le reste des puits. Calculez le pourcentage de médiateurs de libération dans l’opposition de puits, A sept à partir du total calculé des médiateurs à l’intérieur des cellules en multipliant la valeur de la position A sept par deux. Encore une fois, parce que pendant l’expérience, nous avons le supernat contenant les médiateurs de Reese.Au fur et à mesure que nous le transférons dans un nouveau, multipliez ce produit par 100 et divisez ce produit par la valeur totale correspondante des médiateurs à l’intérieur des cellules pour cette position. Cela donne le pourcentage de médiateurs de relâchement pour la houle. Répétez les calculs pour le reste des puits puisque les six houles de chaque rangée sont contestées par la même concentration d’antigène moyenne.Ces valeurs et calculer l’écart-type représentent ces valeurs sur un graphique comme suit. Le graphique montre qu’à mesure que la concentration d’antigène augmente, davantage de médiateurs sont libérés jusqu’à ce qu’elle atteigne un pic de 100 nanogrammes par millilitre, après quoi la libération de médiateurs diminue avec l’augmentation de la concentration d’antigène. Le résultat expérimental final devrait ressembler à ces graphiques, comme on peut le voir sur le graphique B.Le test de libération de contrôle en bleu clair ne contient pas d’anticorps IgE et ne montre donc aucun changement dans la libération du médiateur avec l’augmentation de la concentration d’antigène.Comparez cela au résultat expérimental en bleu foncé, qui pourrait contenir des anticorps IgE. Il s’agit d’un exemple d’un vaccin anti-IgE dont l’innocuité est testée. Il est clair, d’après ce graphique en rouge, que le sérum anti-IgE réticule, les récepteurs à la surface des cellules, provoquant la dégranulation des cellules RBL, tout comme on le voit dans le contrôle positif en violet par rapport au contrôle négatif en gris, ce qui rend ce vaccin dangereux.Ce test est très utile car il peut mesurer la libération du médiateur, ou le retard de celle-ci lors de l’essai de médicaments anti-allergiques potentiels ou les vaccins peuvent également être adaptés aux systèmes humains, canins ou équins, comme le montre le test peut déterminer le blocage réussi ou non de la libération du médiateur lors du test d’anticorps anti-allergiques.

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Immunology and Infection

Immunologie et infection

Cette vidéo montre les événements induits par FcγRIIIa initiés par des anticorps thérapeutiques dans des cellules tueuses naturelles humaines. La plateforme de stimulation artificielle facilite l’exploration des fonctions effectrices en aval, englobant le réarrangement cytosquelettique, la dégranulation, la production de chimiokines/cytokines et les voies de signalisation médiées par les parties FcγRIIIa et Fc des anticorps impliquées dans la liaison.

Un test d’activation artificielle in vitro pour l’étude de l’activation des récepteurs Fc par des anticorps

Encéphalomyélite auto-immune expérimentale (EAE) est un modèle animal établi de la sclérose en plaques. Souris C57BL / 6 sont immunisées avec la myéline oligodendrocyte glycoprotein (MOG) peptide 35-55 (MOG 35-55), entraînant une paralysie flasque ascendante causée par des cellules immunitaires auto-réactifs dans le système nerveux central. Protocoles pour l'induction et la surveillance des maladies seront discutés.

Myéline Oligodendrocyte glycoprotéine (MOG<sub&gt; 35-55</sub&gt;) Induit encéphalomyélite allergique expérimentale (EAE) dans C57BL / 6

Ici, nous présentons un protocole pour le développement et la validation d’une méthode de PCR quantitative utilisée pour la détection et la quantification de l’ADN de l’EHV-2 dans les fluides respiratoires équins. Le protocole de validation de la qRT-PCR EHV-2 implique une procédure en trois parties : le développement, la caractérisation du test qRT-PCR seul et la caractérisation de l’ensemble de la méthode analytique.

Développement et validation d&#39;une méthode de PCR quantitative pour équidé herpèsvirus-2 Diagnostics dans respiratoires Fluides

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Dans ce rapport, nous présentons un protocole qui permet à l’investigateur de générer un modèle murin d’uvéite intraoculaire. Plus communément appelé uvéite auto-immune expérimentale (EAU), ce modèle établi englobe de nombreux aspects de la maladie humaine. Ici, nous décrirons comment induire et surveiller la progression de la maladie à l’aide de plusieurs lectures.

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Pour induire une encéphalomyélite auto-immune expérimentale, un modèle animal de sclérose en plaques, les souris sont immunisées avec une émulsion eau dans huile contenant un autoantigène et un adjuvant de Freund complet. Bien qu’il existe plusieurs protocoles pour la préparation de ces émulsions, un protocole d’homogénéisation rapide, simple et standardisé pour la préparation de l’émulsion est présenté ici.

Procédé d’homogénéisation rapide, simple et normalisé pour préparer des émulsions antigènes/adjuvants pour induire une encéphalomyélite auto-immune expérimentale

Les entéroïdes sont en train de devenir un nouveau modèle pour l’étude de la physiologie et de la physiopathologie des tissus, le développement de médicaments et la médecine régénérative. Ici, nous décrivons un système de culture dérivé d’entéroïdes 2D de cellules primaires bovines qui permet la co-culture avec des types de cellules tissulaires pertinents. Ce modèle offre un avantage translationnel pour la modélisation de la recherche gastro-intestinale.

Génération d’un système de culture monocouche bidimensionnelle primaire dérivé d’entéroïdes bovins pour des applications dans la recherche biomédicale translationnelle

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Les cellules gliales entériques sont de plus en plus reconnues pour leur rôle dans l’homéostasie intestinale et les processus pathologiques, y compris les complications postopératoires. Les patients équins qui se remettent d’une laparotomie exploratoire d’urgence présentent un risque élevé de conditions postopératoires inflammatoires, ce qui souligne l’importance d’établir une culture de cellules primaires gliales entériques entériques équines reproductibles pour l’étude.

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L’étude démontre le rôle de la peau dans la modulation des réponses immunitaires chez la souris par l’immunisation épicutanée (EC). L’immunisation par EC avec un antigène protéique peut supprimer les réponses immunitaires en cas d’hypersensibilité de contact ou inverser la suppression induite par la peau lorsqu’elle est associée à des profils moléculaires associés à des agents pathogènes. L’immunisation EC est prometteuse en tant qu’approche efficace et sans aiguille de l’immunothérapie.

Modèle murin d’immunomodulation induite par l’épi-peau

Découvrez un test de libération de médiateurs utilisant des cellules RBL transfectées avec le gène FcεRIα équin. Cette méthode quantifie la réponse allergique IgE-dépendante pour développer des traitements.

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Développement d'un In vitro Système modèle pour l'étude de l'interaction de Equus Caballus IgE avec son récepteur de haute affinité FcsRI

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