Mesure de la thermogenèse des muscles squelettiques chez la souris et le rat

Ce protocole est important, car il fournit une méthode directe et rentable pour mesurer la température des muscles squelettiques. De plus, il peut être utilisé dans divers contextes et sous la stimulation d’agents pharmacologiques. Le principal avantage de cette technique est le nombre d’animaux qui peuvent être testés simultanément.

La perturbation minimale des animaux décrite ici évite le besoin de méthodes de haute technologie comme la thermographie infrarouge. Les individus peuvent avoir de la difficulté à mesurer la température des animaux dans la cage domestique ou sur les tapis roulants lorsqu’ils sont en mouvement. Cela peut être atténué en pratiquant des techniques de mesure pendant les essais d’accoutumance.

Commencez par réchauffer les transpondeurs fermés entre les mains gantées et assurez-vous de maintenir la stérilité tout en travaillant avec des transpondeurs. Mesurez la température à l’aide d’un scanner de température et vérifiez si le transpondeur lit les changements de température. Après avoir anesthésié la souris comme décrit dans le manuscrit, utilisez des ciseaux chirurgicaux pour faire une coupure peu profonde à travers la peau du membre postérieur droit.

Placez le bord tranchant d’un transpondeur stérile préprogrammé et non bouché dans l’incision, parallèlement au gastrocnémien. Assurez-vous que le piston vert est orienté vers le haut et visible. Continuez à pousser l’applicateur transpondeur dans l’incision jusqu’à ce que l’ouverture de l’applicateur transpondeur ne soit plus visible.

Tournez l’applicateur à 180 degrés, de sorte que le piston vert soit orienté vers le bas vers le membre de la souris et ne soit plus visible pour l’expérimentateur. Une fois que l’applicateur de transpondeur est placé à côté ou partiellement enfermé dans le gastrocnémien, poussez le piston vert, permettant à la pression de l’applicateur de guider la main de l’investigateur loin de la souris. À l’aide de forceps, maintenez la peau ouverte ensemble.

Placez un clip de plaie avec un clip automatique stérile, pliez si nécessaire. Utilisez des sutures résorbables avant l’autoclip stérile pour fermer la couche de fascia. À l’aide du lecteur de transpondeur, vérifiez la température du muscle de la souris.

Après avoir retiré la souris de l’anesthésie, placez-la dans une cage propre sur un coussin chauffant et assurez-vous que la cage domestique comprend une boule de thé avec une serviette inodore pour commencer l’habituation. Attribuez un emplacement au riser dans la salle de test et, pour éviter les variables confondantes, séparez les risers configurés pour recevoir différents stimuli contextuels d’au moins deux mètres. À l’aide de bandes magnétiques, fixez des feuilles chirurgicales sur le riser et créez une barrière visuelle pour minimiser les fluctuations de température dues à l’activité de la souris, en réponse au mouvement de l’expérimentateur.

Préparez des boules de thé avec des serviettes de contrôle et d’odeur de prédateur. Transférez l’animal dans la salle d’essai préparée. Placez l’animal à un endroit prédéterminé sur la colonne montante et évitez de changer l’emplacement de la colonne montante entre les procédures d’accoutumance et de test.

Retirez la boule de la cage d’origine de la souris. Récupérez la cage avec un chiffon ou une feuille chirurgicale et laissez la souris s’acclimater à l’espace de test pendant une à deux heures. Une fois l’acclimatation terminée, utilisez le scanner pour mesurer et enregistrer la température de base du sujet.

Découvrez la cage et placez la boule de thé sur le sol de la cage de la maison. Remplacez le couvercle de la cage et le revêtement en tissu. Démarrez le chronomètre et mesurez les températures des sujets testés dans le même ordre de placement de boule de thé.

Enregistrez les températures et l’heure d’horloge des mesures, en suivant les points de temps souhaités. Préparez les tapis roulants pour les tests, en vous assurant que les chocs sont fonctionnels. Assurez-vous que les animaux utilisent le même tapis roulant pour les procédures d’accoutumance et de test.

Déplacez la souris dans la salle de test et laissez-la s’acclimater pendant une à deux heures dans sa cage domestique. Avant de déplacer la souris sur le tapis roulant, mesurez et enregistrez sa température de base. Pour faciliter le placement et le retrait, collez les serviettes de contrôle ou d’odeur de prédateur au plafond ou sous l’avant du tapis roulant.

Guidez la souris dans le tapis roulant assigné. Allumez la ceinture du tapis roulant et le choc du tapis roulant, démarrez le chronomètre et prenez les mesures des sujets de test dans le même ordre qu’ils ont été installés dans les tapis roulants. Enregistrez les températures et l’heure d’horloge des mesures, en suivant les points de temps souhaités.

Une fois le test terminé, éteignez le choc et le tapis roulant et remettez la souris dans sa cage d’origine. Nettoyez le tapis roulant avec un détergent liquide et de l’eau et enlevez toute odeur de prédateur résiduelle. Des essais d’accoutumance répétés ont significativement diminué la température musculaire des souris, montrant que les souris étaient habituées à l’environnement et au protocole de test.

L’analyse combinée selon le sexe du quatrième essai n’a montré aucune différence significative entre les mesures de température avant le déplacement et les mesures de température de base, démontrant l’efficacité d’une acclimatation d’une heure au contexte de test. La stimulation pharmacologique à l’aide d’ocytocine chez la souris a montré une diminution de la température musculaire par rapport à la ligne de base avec une diminution maximale après 30 minutes. Les températures musculaires ont été normalisées 60 minutes après l’injection d’ocytocine.

Une augmentation soutenue de la température musculaire a été observée chez les rats Sprague Dawley, après avoir éliminé l’odeur du prédateur comme stimuli contextuels. Les rats Sprague Dawley ont montré une forte augmentation de la température en réponse à l’odeur de furet, par rapport à l’odeur témoin. En présence d’autres odeurs aversives, l’odeur de furet produit et maintient un changement thermogénique robuste par rapport à toutes les autres conditions.

Lors de la tentative de cette procédure, il est essentiel d’habituer les animaux au protocole d’essai et de prévoir une à deux heures d’acclimatation chaque jour d’essai.