Name: Stratégie de mise en banque d’organoïdes du cancer de l’ovaire : Aborder l’hétérogénéité interpatiente entre les sous-types histologiques et les stades de la maladie (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-02-23T14:10:00.000+00:00
Duration: 8 min 26 s
Description: Apprenez à établir des organoïdes de cancer de l'ovaire à partir de tissus patients pour la recherche translationnelle. Cette méthode permet d'étudier l'hétérogénéité interpatiente et d'identifier des biomarqueurs prédictifs.

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L’étude est financée par le Centre allemand de recherche sur le cancer DKTK, le site partenaire de Munich, un partenariat entre DKFZ et l’hôpital universitaire LMU Munich. L’étude est également soutenue par la subvention allemande Cancer Aid (#70113426 et #70113433). L’enrobage de paraffine de tissus et d’organoïdes a été effectué à la plateforme de l’Institut d’anatomie de la Faculté de médecine de la LMU de Munich. L’imagerie confocale a été réalisée à la plateforme de bioimagerie du Centre biomédical (BMC). Les auteurs tiennent à remercier Simone Hofmann, Maria Fischer, Cornelia Herbst, Sabine Fink et Martina Rahmeh, pour leur aide technique.

Standardisation de la biobanque d’organoïdes du cancer de l’ovaire

<ol><li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Fuchs, H. E., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+statistics%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J+Clin%22%5BJournal%5D)">Cancer statistics.</a> CA Cancer J Clin. 72 (1), 7-33 (2022).</li>
<li>Berger, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comprehensive+pan-cancer+molecular+study+of+gynecologic+and+breast+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">A comprehensive pan-cancer molecular study of gynecologic and breast cancers.</a> Cancer Cell. 33 (4), 690-705 (2018).</li>
<li>Watson, R. W. G., Kay, E. W., Smith, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrating+biobanks%3A+addressing+the+practical+and+ethical+issues+to+deliver+a+valuable+tool+for+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Integrating biobanks: addressing the practical and ethical issues to deliver a valuable tool for cancer research.</a> Nat Rev Cancer. 10 (9), 646-651 (2010).</li>
<li>Coppola, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biobanking+in+health+care%3A+evolution+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Biobanking in health care: evolution and future directions.</a> J Transl Med. 17 (1), 172(2019).</li>
<li>Drost, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoid+culture+systems+for+prostate+epithelial+and+cancer+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Organoid culture systems for prostate epithelial and cancer tissue.</a> Nat Protoc. 11 (2), 347-358 (2016).</li>
<li>Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+development+and+disease+with+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Modeling development and disease with organoids.</a> Cell. 165 (7), 1586-1597 (2016).</li>
<li>Hill, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prediction+of+DNA+repair+inhibitor+response+in+short-term+patient-derived+ovarian+cancer+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discov%22%5BJournal%5D)">Prediction of DNA repair inhibitor response in short-term patient-derived ovarian cancer organoids.</a> Cancer Discov. 8 (11), 1404-1421 (2018).</li>
<li>Kopper, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+organoid+platform+for+ovarian+cancer+captures+intra-+and+interpatient+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">An organoid platform for ovarian cancer captures intra- and interpatient heterogeneity.</a> Nat Med. 25 (5), 838-849 (2019).</li>
<li>Larsen, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+pan-cancer+organoid+platform+for+precision+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">A pan-cancer organoid platform for precision medicine.</a> Cell Rep. 36 (4), 109429(2021).</li>
<li>Bartfeld, S., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell-derived+organoids+and+their+application+for+medical+research+and+patient+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Med+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">Stem cell-derived organoids and their application for medical research and patient treatment.</a> J Mol Med (Berl). 95 (7), 729-738 (2017).</li>
<li>Larsen, B. M., Cancino, A., Shaxted, J. M., Salahudeen, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+for+drug+screening+of+patient-derived+tumor+organoids+using+high-content+fluorescent+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Protocol for drug screening of patient-derived tumor organoids using high-content fluorescent imaging.</a> STAR Protoc. 3 (2), 101407(2022).</li>
<li>Senkowski, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+platform+for+efficient+establishment+and+drug-response+profiling+of+high-grade+serous+ovarian+cancer+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">A platform for efficient establishment and drug-response profiling of high-grade serous ovarian cancer organoids.</a> Dev Cell. 58 (12), 1106-1121 (2023).</li>
<li>LeSavage, B. L., Suhar, R. A., Broguiere, N., Lutolf, M. P., Heilshorn, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Next-generation+cancer+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Mater%22%5BJournal%5D)">Next-generation cancer organoids.</a> Nat Mater. 21 (2), 143-159 (2022).</li>
<li>Hoffmann, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stable+expansion+of+high-grade+serous+ovarian+cancer+organoids+requires+a+low-Wnt+environment%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">Stable expansion of high-grade serous ovarian cancer organoids requires a low-Wnt environment.</a> EMBO J. 39 (6), e104013(2020).</li>
<li>Kessler, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Notch+and+Wnt+pathways+regulate+stemness+and+differentiation+in+human+fallopian+tube+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">The Notch and Wnt pathways regulate stemness and differentiation in human fallopian tube organoids.</a> Nat Commun. 6, 8989(2015).</li>
<li>Trillsch, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+to+optimize+the+biobanking+of+ovarian+cancer+organoids+by+accommodating+patient-specific+differences+in+stemness+potential%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Protocol to optimize the biobanking of ovarian cancer organoids by accommodating patient-specific differences in stemness potential.</a> STAR Protoc. 4 (3), 102484(2023).</li>
<li>Maenhoudt, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developing+organoids+from+ovarian+cancer+as+experimental+and+preclinical+models%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Developing organoids from ovarian cancer as experimental and preclinical models.</a> Stem Cell Reports. 14 (4), 717-729 (2020).</li>
<li>Fuerer, C., Nusse, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lentiviral+vectors+to+probe+and+manipulate+the+Wnt+signaling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Lentiviral vectors to probe and manipulate the Wnt signaling pathway.</a> PLoS One. 5 (2), e9370(2010).</li>
<li>Leica Biosystems. Leica ASP300S - Advanced smart processor vacuum tissue processor, instructions for use, V 2.1. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.leicabiosystems.com/sites/default/files/media_product-download/2022-01/Leica_ASP300S_IFU_2v1N_en.pdf">https://www.leicabiosystems.com/sites/default/files/media_product-download/2022-01/Leica_ASP300S_IFU_2v1N_en.pdf</a> (2021).</li>
<li>Thermo Scientific. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Microm+EC350+Modular+tissue+embedding+center+Instruction+manual%22">Microm EC350 Modular tissue embedding center Instruction manual</a>. , (2009).</li>
<li>Nanki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+ovarian+cancer+organoids+capture+the+genomic+profiles+of+primary+tumours+applicable+for+drug+sensitivity+and+resistance+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Patient-derived ovarian cancer organoids capture the genomic profiles of primary tumours applicable for drug sensitivity and resistance testing.</a> Sci Rep. 10 (1), 12581(2020).</li>
</ol>

M.K. est inscrit en tant qu’inventeur sur un brevet lié à un milieu pour les organoïdes du cancer de l’ovaire. F.T. a reçu des fonds de recherche, un conseil consultatif, des honoraires et des frais de déplacement d’AstraZeneca, Clovis, Eisai, ImmunoGen, Medac, MSD, PharmaMar, Roche, SAGA diagnostics et Tesaro/GSK. S.M. a reçu des fonds de recherche, un conseil consultatif, des honoraires ou des frais de déplacement : AbbVie, AstraZeneca, Clovis, Eisai, GlaxoSmithKline, Hubro, Medac, MSD, Novartis, Nykode, Olympus, PharmaMar, Pfizer, Roche, Sensor Kinesis, Teva, Tesaro.

Le protocole conçu répond aux défis précédents de la biobanque d’organoïdes du cancer de l’ovaire en ce qui concerne la formation d’organoïdes et le potentiel de passage à long terme et garantit la génération de lignées entièrement extensibles à partir de la majorité des dépôts tumoraux solides. Le processus de collecte chirurgicale d’échantillons tumoraux à utiliser pour la génération d’organoïdes a un impact significatif sur le rendement et le potentiel d’expansion. Des échantillons de tissu tumoral peuvent être obtenus lors de diverses procédures, notamment la chirurgie multiviscérale, la laparoscopie diagnostique ou la biopsie. Le chirurgien gynéco-oncologique expérimenté doit donner la priorité à l’obtention d’échantillons de tumeurs propres à partir de localisations péritonéales. Il a notamment été observé que les zones macroscopiquement nécrotiques dans les grands dépôts tumoraux sont moins adaptées à la génération réussie de cultures d’organoïdes. Comme la pureté de l’échantillon est cruciale pour refléter les caractéristiques moléculaires et phénotypiques pour les applications en aval, des efforts synchronisés des équipes cliniques et de laboratoire sont nécessaires pour une biobanque optimale, garantissant que les lignées sont créées à partir des régions les plus pertinentes de la tumeur.
Bien que ce protocole couvre les variations de dépendance aux facteurs de croissance que nous avons observées au cours de 2 ans de biobanque, il est clair qu’un raffinement supplémentaire est justifié pour augmenter encore l’efficacité car nous n’avons toujours pas observé de croissance d’organoïdes dans 20% des cas et le nombre de lignées qui ont démontré un potentiel d’expansion limité suggère un maintien sous-optimal de la souche. Bien que notre biobanque d’organoïdes ne comprenne actuellement que des échantillons de cancer de l’ovaire d’histologie séreuse (HGSOC et LGSOC), notre expérience avec des échantillons de différentes histologies épithéliales du cancer de l’ovaire avant le programme de biobanque structurée a montré des taux de réussite comparables sans différences spécifiques. Notamment, la majorité des sous-types de cancer épithélial de l’ovaire partagent une morphologie pseudostratifiée colonnaire similaire avec des tissus qui se sont développés à partir du tractus müllérien (trompe de Fallope, utérus, col de l’utérus) tandis qu’en revanche, l’épithélium ovarien lui-même provient de la crête génitale et du mésonéphros, étant recouvert d’une seule couche d’épithélium cuboïdal. Étant donné que les voies de développement régulant l’homéostasie épithéliale jouent un rôle central dans le contrôle du potentiel des cellules souches adultes, les différences d’origine embryonnaire doivent être prises en compte lors de l’élaboration de protocoles de bio-banque d’organoïdes. Ainsi, nous pensons que les progéniteurs de la surface de l’ovaire ont probablement besoin de conditions de culture spécifiques à l’organe pour maintenir une croissance stable à long terme.
Notamment, dans notre laboratoire, le protocole s’est avéré efficace également pour les échantillons de cancer de l’ovaire post-néoadjuvant, bien que la chimiothérapie néoadjuvante ait un impact sur la viabilité cellulaire et le phénotype tissulaire. Ces échantillons présentent plus de débris et d’agrégats de tissus extracellulaires que les échantillons provenant de tissus naïfs de chimiothérapie de chirurgies de réduction tumorale primaires, ce qui pourrait affecter le potentiel de formation d’organoïdes. Dans ces cas, nous avons constaté qu’une quantité appropriée de tissu chirurgical et le strict respect des conditions de transport recommandées sont cruciaux pour une génération réussie d’organoïdes, car les échantillons post-néoadjuvants pourraient être plus sensibles.
Un phénomène très intéressant de l’effet bénéfique d’une brève expansion sur le plastique en 2D de progéniteurs fraîchement isolés sur la croissance ultérieure des organoïdes, que nous avons observé à plusieurs reprises et donc inclus dans la procédure expérimentale standardisée, est un ajout important à la méthodologie du domaine de recherche sur les organoïdes cancéreux, qui repose en grande partie sur des stratégies d’ensemencement direct. Il est tentant de spéculer que la sensibilité des progéniteurs après digestion enzymatique et la capacité des facteurs de croissance à les amorcer adéquatement pourraient être les mécanismes sous-jacents à l’origine de cette différence, qui est dans certains cas un facteur décisif si la lignée peut être établie. Cependant, des recherches supplémentaires sont nécessaires pour établir des dépendances claires.
Pour relever les défis posés par une forte adhésion cellulaire et des jonctions fonctionnelles dans les organoïdes 3D du cancer de l’ovaire, qui sont difficiles à digérer, une combinaison de dissociation mécanique et enzymatique avec une aiguille et une seringue peut aider lorsque de gros amas subsistent après la trypsinisation. L’expérimentation de différentes conditions enzymatiques pourrait conduire à d’autres améliorations.
Après un stockage à long terme, les lignées organoïdes peuvent être décongelées et mises en culture selon le plan expérimental et utilisées pour des applications ultérieures. Cela permet d’accéder à tout moment à des lignées organoïdes déjà générées à des fins de recherche spécifiques et est particulièrement intéressant pour étudier le comportement à long terme de certaines lignées à la lumière de la progression de la maladie du patient. Cependant, la cryoconservation des organoïdes du cancer de l’ovaire reste un défi. Les variations de température pendant les cycles de congélation et de décongélation peuvent affecter négativement la viabilité, la fonctionnalité et le potentiel d’expansion des organoïdes. Le stockage à long terme est plus stable dans l’azote liquide, où les températures très basses minimisent le risque de dégradation afin que l’intégrité des organoïdes puisse être maintenue. Cependant, une optimisation continue est justifiée pour établir des procédures cohérentes de congélation, d’entreposage et de décongélation, afin d’améliorer encore ces processus.
Malgré les problèmes en suspens mentionnés, ce protocole démontre la capacité de générer de manière cohérente des lignées organoïdes stables à partir d’échantillons de tumeurs solides de patientes atteintes d’un cancer de l’ovaire. Dans notre laboratoire, nous avons traité à ce jour 120 échantillons de tissu cancéreux primitif de l’ovaire, réussissant dans environ 50 % des cas, y compris un large éventail de sous-types histologiques et de stades de la maladie avec des échantillons chirurgicaux primaires, récurrents et postnéoadjuvants. En fournissant un cadre structuré pour la génération d’organoïdes dérivés de divers échantillons de patients, l’ensemencement parallèle dans différents milieux et la mise en œuvre de différentes stratégies d’ensemencement, ce protocole offre la possibilité d’évaluer les différences individuelles dans le potentiel de souche, fournissant ainsi des informations supplémentaires sur la biologie tumorale. À notre connaissance, la grande majorité des études suivent généralement l’approche inverse consistant à tester les composants du milieu sur un petit nombre d’échantillons et à choisir pour simplifier principalement un milieu optimal. Nos tests systématiques de l’effet de HER1ß, de l’effet de la supplémentation en RSPO1 et FGF10 et de l’ensemencement 2D/3D démontrent de manière concluante que le tissu cancéreux de l’ovaire présente un degré de variabilité interpatiente dans les propriétés de souche, et que le milieu optimal est en effet spécifique à la patiente. Par conséquent, il est essentiel de tester systématiquement en parallèle différentes compositions de milieux fournissant différents environnements de signalisation paracrine exogènes.
La création d’une biobanque vivante avec un vaste panel d’organoïdes provenant de diverses patientes atteintes d’un cancer de l’ovaire ainsi que leurs informations cliniques recueillies prospectivement constituent une ressource précieuse pour un large éventail d’applications de recherche et reflètent le paysage clinique hétérogène qui peut s’appliquer à une population de patients plus large17. La culture et la cryoconservation à long terme permettent une cohérence expérimentale et l’accessibilité répétée de la même lignée organoïde au fil du temps, servant de base à des conceptions expérimentales longitudinales avec des propriétés cellulaires de lignée tumorale inchangées.
En conservant l’architecture épithéliale et la polarisation, les lignées organoïdes constituent un modèle adéquat pour étudier la communication cellule-cellule et la prise de décision sur le destin cellulaire en fonction du contexte médiée par les voies de signalisation paracrine. L’enrobage des organoïdes dans le gel histologique est une étape intermédiaire pratique et efficace pour éviter la perte de matériau après la fixation et garantit que le traitement en aval (enrobage dans la paraffine et coupe) peut être effectué en parallèle avec les échantillons de tissus. La perte d’organoïdes pendant la procédure de fixation est un problème critique lorsque le nombre d’organoïdes est très limité. Cependant, cette perte peut être contrecarrée en éliminant complètement les organoïdes de la matrice extracellulaire en les lavant dans un milieu de culture basal froid et en mettant en commun au moins deux puits adultes d’une plaque de format 24 puits avant la fixation. Le protocole de coloration par immunofluorescence permet une imagerie confocale à haute résolution pour faire correspondre les caractéristiques moléculaires et phénotypiques des organoïdes du cancer de l’ovaire avec le tissu tumoral parental, mais constitue également un outil précieux pour étudier la réponse cellulaire aux composés chimiques ou caractériser les lignées génétiquement modifiées. La méthode convient également à la coloration histologique sans aucune modification spécifique. Selon le but de l’étude, des coupes plus minces découpées au microtome (2-3 μm) doivent être envisagées.
Il est important de noter qu’une culture stable à long terme est une condition préalable aux expériences d’édition de gènes et aux tests fonctionnels sur la réponse aux médicaments et la résistance aux thérapies nouvelles et standard17,21. En particulier, les organoïdes générés à partir de biopsies effectuées au cours de la progression et de la récidive de la maladie, offrent la possibilité d’analyses comparatives directes entre la tumeur d’origine naïve de traitement et les caractéristiques nouvellement acquises observées lors de la rechute. L’identification des réponses thérapeutiques spécifiques aux patientes et la formation de résistance au traitement in vitro font progresser le domaine de la médecine de précision dans la recherche sur le cancer de l’ovaire21.

La prise en charge clinique des patientes atteintes d’un cancer épithélial de l’ovaire reste difficile en raison de sa présentation clinique hétérogène à des stades avancés et de ses taux de récidive élevés1. Pour mieux comprendre le développement du cancer de l’ovaire et le comportement biologique, il faut des approches de recherche qui tiennent compte de la variabilité spécifique à la patiente au cours de la maladie, de la réponse au traitement et des caractéristiques histopathologiques et moléculaires2.
La biobanque, caractérisée par la collecte systématique et la conservation à long terme d’échantillons tumoraux provenant de patientes atteintes d’un cancer de l’ovaire ainsi que de leurs informations cliniques, offre la préservation d’une large cohorte de patientes à différents stades de la maladie, y compris des échantillons tumoraux provenant de chirurgies primaires de réduction tumorale, après une chimiothérapie néoadjuvante et d’une maladie récurrente. Il présente un potentiel précieux pour faire progresser la recherche sur le cancer en tant que ressource de biomarqueurs pronostiques prometteurs et de cibles thérapeutiques3. Cependant, les méthodes conventionnelles de biobanque, telles que la fixation et la congélation du formol, ne se prêtent pas à la réalisation d’études fonctionnelles sur les échantillons tumoraux d’origine en raison de la perte de viabilité et de la perturbation de l’architecture tissulaire tridimensionnelle native 4,5.
Les études des mécanismes moléculaires, en oncologie et au-delà, dépendent de manière cruciale de l’utilisation de modèles expérimentaux appropriés qui reflètent fidèlement la biologie de la maladie et maintiennent les propriétés in vitro du tissu observé in vivo. Les organoïdes dérivés du patient, basés sur la préservation du potentiel de renouvellement, reproduisent en laboratoire la structure et la fonction d’origine de l’épithélium et permettent des tests dans un contexte spécifique au patient. Par conséquent, ils sont devenus des outils très prometteurs pour la recherche sur le cancer et la médecine personnalisée, comblant le fossé entre la diversité clinique et la recherche en laboratoire 6,7,8,9. Des stratégies thérapeutiques sur mesure basées sur les réponses médicamenteuses individuelles des lignées organoïdes et l’évaluation de la pertinence fonctionnelle des profils moléculaires peuvent potentiellement être appliquées directement aux soins aux patients10,11. La possibilité d’une culture à long terme incluant des caractéristiques spécifiques au patient et la collecte de données cliniques prospectives pertinentes au fil du temps est très prometteuse pour identifier de nouveaux facteurs pronostiques et prédictifs impliqués dans la progression de la maladie et les mécanismes de résistance 3,9.
Néanmoins, la construction d’une biobanque comprenant des organoïdes provenant de différents échantillons tumoraux nécessite une combinaison de respect strict d’une méthodologie complexe et de mise en place de protocoles pour une maintenance facile12. La standardisation des processus garantit que la biobanque peut être établie et entretenue efficacement par du personnel formé, même en cas de chiffre d’affaires élevé, tout en respectant les normes de qualité les plus élevées13. Plusieurs études ont rapporté la génération réussie de lignées organoïdes stables pour le cancer de l’ovaire correspondant au profil mutationnel et phénotypique de la tumeur d’origine avec des taux d’efficacité variables. Pourtant, la biobanque de routine reste difficile dans la pratique, en particulier pour la croissance stable à long terme des lignées, qui est une condition préalable à une expansion à grande échelle ou à une édition génomique réussie.
En particulier, la question de l’extensibilité reste vaguement définie sur le terrain car les organoïdes qui présentent un potentiel de croissance lent et limité sont parfois comptés comme des lignées établies. Comme l’ont initialement démontré Hoffmann et al., une étude dont les principaux résultats ont servi de base à ce protocole plus développé, la manipulation optimale du tissu cancéreux de l’ovaire nécessite une stratégie unique pour s’adapter à l’hétérogénéité14. La caractérisation phénotypique des organoïdes obtenus par cette méthode et l’étroite similitude avec le tissu tumoral parental ont été confirmées par le séquençage de l’ADN et l’analyse transcriptomique des cultures matures (4-10 mois de culture) démontrant la stabilité du modèle 8,9,12,14.
Contrairement à l’environnement paracrine qui régule l’homéostasie dans les trompes de Fallope saines, la couche épithéliale, qui produit probablement un cancer de l’ovaire séreux de haut grade (HGSOC), un potentiel de régénération du cancer et une capacité de formation d’organoïdes, est moins dépendante de la supplémentation exogène en Wnt. De plus, la signalisation active de la protéine morphogénétique osseuse (BMP), caractérisée par l’absence de Noggin dans le milieu organoïde, s’est avérée bénéfique pour l’établissement de cultures à long terme à partir de dépôts de tissus solides du cancer de l’ovaire14,15. Au cours de la biobanque systématique de dépôts solides de cancer de l’ovaire, nous avons confirmé ces résultats et mis en place le pipeline, avec des détails décrits dans ce protocole qui assure une expansion soutenue à long terme dans la majorité des cas. Nous constatons que les tests parallèles de différentes compositions de milieux et modalités d’ensemencement lors de l’utilisation d’isolats primaires sont essentiels pour améliorer l’établissement de lignées organoïdes stables à long terme et pour augmenter les rendements permettant une propagation robuste et une expansion vers des formats multipuits requis pour les expériences en aval16.
En outre, la pureté et la qualité des échantillons prélevés lors de la chirurgie sont d’une importance cruciale pour le potentiel translationnel des organoïdes du cancer de l’ovaire dans la recherche fondamentale et le diagnostic moléculaire. La complexité de la présentation clinique du HGSOC nécessite une coopération étroite entre les chirurgiens, les oncologues et les scientifiques du laboratoire pour s’assurer que le matériel pertinent est correctement identifié, que les conditions de transport sont maintenues constantes et que les lignées organoïdes sont générées avec une grande efficacité représentant les caractéristiques les plus importantes de la maladie de chaque patient. Ce protocole fournit un cadre standardisé mais adaptable pour saisir tout le potentiel des organoïdes du cancer de l’ovaire, compte tenu de l’hétérogénéité qui caractérise le cancer de l’ovaire16,17. Ce protocole permet notamment une biobanque fiable du large spectre de la présentation clinique du cancer de l’ovaire, y compris différents types histologiques (cancer de l’ovaire de haut grade et de bas grade, LGSOC), différents dépôts provenant des mêmes patientes qui présentent des différences dans la régulation de la souche, des tissus provenant de chirurgies en contexte post-néoadjuvant, du matériel de biopsie et des échantillons de chirurgies dans la phase récurrente de progression de la maladie.

<table><tbody><tr><td>100 Sterican 26 G</td><td>Braun, Melsungen, Allemagne</td><td>4657683</td><td></td></tr><tr><td>100 Sterican 27 G</td><td>Braun, Melsungen, Allemagne</td><td>4657705</td><td></td></tr><tr><td>293T HA Rspo1-Fc</td><td>R& D systems, Minneapolis,</td><td>États-Unis 3710-001-01</td><td>Alternative : Lignée cellulaire exprimant la R-Spondin1, Sigma-Aldrich, SC111</td></tr><tr><td>A-83-01 (inhibiteur de la kinase TGF-b RI IV)</td><td>Merck, Darmstadt, Allemagne</td><td>616454</td><td></td></tr><tr><td>Advanced DMEM/F-12 Medium&nbsp ;</td><td>Gibco, Thermo Scientific, Waltham, États-Unis</td><td>12634028</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps anti-p53 (DO1)</td><td>Santa Cruz Biotechnology, Texas, États-Unis</td><td>sc-126</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps anti-PAX8</td><td>Proteintech, Manchester, Royaume-Uni&nbsp ;</td><td>10336-1-AP</td><td></td></tr><tr><td>B-27 Supplément (50x)</td><td>Gibco, Thermo Scientific, Waltham, USA</td><td>17504-044</td><td></td></tr><tr><td>Filtre à vide pour bouteille 0.2 &micro ; m</td><td>Corning, Berlin, Allemagne&nbsp ;</td><td></td><td></td>430049</tr><tr><td>Flacon de culture cellulaire CELLSTAR, 175 cm2</td><td>Greiner Bio-one, Kremsm&uuml ; nster, Autriche</td><td>661175</td><td></td></tr><tr><td>Fiole de culture cellulaire CELLSTAR, 25 cm2</td><td>Greiner Bio-one, Kremsm&uuml ; nster, Autriche</td><td>690160</td><td></td></tr><tr><td>Flacon de culture cellulaire CELLSTAR, 75 cm2</td><td>Greiner Bio-one, Kremsm&uuml ; nster, Autriche</td><td>658175</td><td></td></tr><tr><td>Collagenase I</td><td>Thermo Scientific, Waltham, États-Unis</td><td>17018029</td><td></td></tr><tr><td>Costar 48 puits Clear TC-treated&nbsp ;</td><td>Corning, Berlin, Allemagne&nbsp ;</td><td>3548</td><td></td></tr><tr><td>Cryo SFM</td><td>PromoCell &ndash ; Human Centered Science, Heidelberg, Allemagne</td><td>C-29912</td><td></td></tr><tr><td>Extrait de membrane basale à facteur de croissance réduit Cultrex, type 2, Pathclear</td><td>R& D systems, Minneapolis, États-Unis</td><td>3533-005-02</td><td>Alternative : Matrigel, Matrice de membrane basale à facteur de croissance réduit&nbsp ; Corning, 356231</td></tr><tr><td>Cy5 AffiniPure Donkey Anti-Souris IgG</td><td>Jackson Immuno</td><td>715-175-151</td><td></td></tr><tr><td>DAKO&nbsp ; Tampon de citrate, pH 6,0, 10x Antigen Retriever</td><td>Sigma-Aldrich, Merck, Darmstadt, Allemagne</td><td>C9999-1000ML</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Thermo Scientific, Waltham, USA</td><td>62248</td><td></td></tr><tr><td>Donkey anti rabbit Alexa Fluor Plus 555</td><td>Thermo Scientific, Waltham, USA</td><td>A32794</td><td></td></tr><tr><td>Donkey anti-Goat IgG Alexa Fluor Plus 488</td><td>Thermo Scientific, Waltham, USA</td><td>A32814</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&aigu ; s Saline tamponnée au phosphate&nbsp ;</td><td>Gibco, Thermo Scientific, Waltham, États-Unis</td><td>14190-094</td><td></td></tr><tr><td>Epredia Richard-Allan Scientific HistoGel</td><td>Thermo Scientific, Waltham, États-Unis</td><td>Epredia HG-4000-012</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 24 puits Polystyrène&nbsp ;</td><td>Corning, Berlin, Allemagne&nbsp ;</td><td></td><td></td>351447</tr><tr><td>Scalpel en plumes&nbsp ;</td><td>Pfm medical, Cologne, Allemagne</td><td>200130010</td><td></td></tr><tr><td>Sérum de veau fœtal</td><td>Gibco, Thermo Scientific, Waltham, États-Unis</td><td>10270106</td><td></td></tr><tr><td>Formalin 37 % sans acide, stabilisé</td><td>Morphisto, Offenbach am Main, Allemagne</td><td>1019205000</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>Gibco, Thermo Scientific, Waltham, États-Unis</td><td>35050038</td><td></td></tr><tr><td>HEPES (1 M)</td><td>Gibco, Thermo Scientific, Waltham, États-Unis</td><td></td><td></td>156630080</tr><tr><td>Anticorps EpCAM/TROP-1 humain</td><td>R& D systems, Minneapolis, États-Unis</td><td>AF960</td><td></td></tr><tr><td>Humain FGF10</td><td>Peprotech, NJ, États-Unis</td><td>100-26</td><td></td></tr><tr><td>Humain recombinant BMP2</td><td>Gibco, Thermo Scientific, Waltham, États-Unis</td><td>PHC7146</td><td></td></tr><tr><td>Humain recombinant EGF</td><td>Gibco, Thermo Scientific, Waltham, États-Unis</td><td>PHG0311L</td><td></td></tr><tr><td>Humain recombinant Heregulin beta-1</td><td>Peprotech, NJ,</td><td>États-Unis 100-03</td><td></td></tr><tr><td>Logiciel de base LAS X</td><td>Leica Microsystems</td><td></td><td>https://webshare.leica-microsystems.com/latest/core/widefield/</td></tr> <tr><td>Leica TCS SP8 X&nbsp ; Microscope confocal laser à lumière blanche</td><td>Leica Microsystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>N-2 Supplement (100x)</td><td>Gibco, Thermo Scientific, Waltham, USA</td><td>17502-048</td><td></td></tr><tr><td>Nicotinamide</td><td>Sigma-Aldrich, Merck, Darmstadt, Allemagne</td><td>N0636</td><td></td></tr><tr><td>Omnifix 1 mL</td><td>Braun, Melsungen, Allemagne</td><td>3570519</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm de paraffine</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Omnilab, Munich, Allemagne</td><td>5170002</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyd ;</td><td>Morphisto, Offenbach-am-Main, Allemagne</td><td>1176201000</td><td></td></tr><tr><td>Pen Strep</td><td>Gibco, Thermo Scientific, Waltham, États-Unis</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Pénicilline-Streptomycine (10 000 U/mL)</td><td>Sigma-Aldrich, Merck, Darmstadt, Allemagne</td><td>P4333-100</td><td></td></tr><tr><td>PluriStrainer 400 &micro ; m</td><td>PluriSelect, Leipzig, Allemagne</td><td>43-50400-01</td><td></td></tr><tr><td>Primocin</td><td>InvivoGen, Toulouse, France</td><td>ant-pm-05</td><td></td></tr><tr><td>Tampon de lyse des globules rouges</td><td>Sigma-Aldrich, Merck, Darmstadt, Allemagne</td><td>11814389001</td><td></td></tr><tr><td>Roticlear</td><td>Carl Roth, Karlsruhe, Allemagne</td><td>A538.5</td><td></td></tr><tr><td>Surgipath Paraplast</td><td>Leica, Wetzlar, Allemagne</td><td>39602012</td><td></td></tr><tr><td>Thermo Scientific Nunc Cryovials</td><td>Thermo Scientific, Waltham, États-Unis</td><td>375418PK</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich, Merck, Darmstadt, Allemagne</td><td>T8787</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue Stain</td><td>Sigma-Aldrich, Merck, Darmstadt, Allemagne</td><td>T8154</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE Express Enzyme&nbsp ;</td><td>Gibco, Thermo Scientific, Waltham,</td><td>États-Unis 12604-013</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>PanReac AppliChem, Darmstadt, Allemagne</td><td>A4974-0100</td><td></td></tr><tr><td>Y-27632</td><td>TOCRIS biotechne, Wiesbaden, Allemagne</td><td>1254</td><td></td></tr><tr><td>Zeocin</td><td>Invitrogen, Thermo Scientific, Waltham, États-Unis</td><td>R25001</td><td></td></tr></tbody></table>

stratégie de mise en banque d’organoïdes du cancer de l’ovaire : aborder l’hétérogénéité interpatiente entre les sous-types histologiques et les stades de la maladie

Strategy for Biobanking of Ovarian Cancer Organoids: Addressing the Interpatient Heterogeneity across Histological Subtypes and Disease Stages

Bien que la création d’une biobanque du cancer de l’ovaire à partir d’organoïdes dérivés de patientes et de leurs informations cliniques de base promette des avancées dans la recherche et les soins aux patients, la normalisation reste un défi en raison de l’hétérogénéité de cette tumeur maligne mortelle, combinée à la complexité inhérente à la technologie des organoïdes. Ce protocole adaptable fournit un cadre systématique pour réaliser le plein potentiel des organoïdes du cancer de l’ovaire en tenant compte de la variabilité des progéniteurs spécifique à la patiente. En mettant en œuvre un flux de travail expérimental structuré pour sélectionner des conditions de culture et des méthodes de semis optimales, avec des tests parallèles de semis 3D direct par rapport à une voie 2D/3D, nous obtenons, dans la plupart des cas, des lignes d’expansion à long terme robustes adaptées à une large gamme d’applications en aval. 
Notamment, le protocole a été testé et s’est avéré efficace dans un grand nombre de cas (N = 120) de matériel de départ très hétérogène, y compris le cancer de l’ovaire de haut et de bas grade et les stades de la maladie avec réduction tumorale primaire, maladie récurrente et échantillons chirurgicaux post-néoadjuvants. Dans un environnement de signalisation exogène à faible Wnt et à BMP élevé, nous avons observé que les progéniteurs étaient différemment sensibles à l’activation de la voie Heregulin 1 ß (HERß-1), HERß-1 favorisant la formation d’organoïdes chez certains tout en l’inhibant chez d’autres. Pour un sous-ensemble d’échantillons du patient, la formation optimale d’organoïdes et la croissance à long terme nécessitent l’ajout du facteur de croissance des fibroblastes 10 et de la R-Spondine 1 au milieu. 
De plus, nous soulignons les étapes critiques de la digestion tissulaire et de l’isolement des progéniteurs et indiquons des exemples où une brève culture en 2D sur du plastique est bénéfique pour la formation ultérieure d’organoïdes dans la matrice de type 2 de l’extrait de membrane basale. Dans l’ensemble, une biobanque optimale nécessite des tests systématiques de toutes les principales conditions en parallèle afin d’identifier un environnement de croissance adéquat pour les lignées individuelles. Le protocole décrit également la procédure de manipulation pour un enrobage, une coupe et une coloration efficaces afin d’obtenir des images haute résolution des organoïdes, ce qui est nécessaire pour un phénotypage complet.

Après la dissociation tissulaire initiale, la filtration et le comptage, les cellules sont ensemencées en parallèle directement au format 3D, comme expliqué ci-dessus, ainsi que la suspension dans le flacon pour une brève expansion 2D. Dans certains cas, l’expansion 2D transitoire influence positivement la formation de l’organoïde, et la lignée à long terme est établie avec succès par cette voie, tandis qu’un ensemencement 3D parallèle comparatif peut entraîner un arrêt de la croissance (Figure 1). Pour chaque tissu de donneur traité, les cellules sont testées selon la matrice du milieu. Suivant cette stratégie, notre biobanque contient maintenant des lignes représentatives de chaque condition de croissance standard, comme le montre la figure 2. Grâce à la mise en œuvre rigoureuse de cette mini-plateforme de criblage testant différents milieux et modes d’ensemencement, nous avons réussi à générer des lignées organoïdes de différents types histologiques et stades de développement de la maladie du cancer de l’ovaire (Figure 3) des chirurgies primaires séreuses de haut grade, des chirurgies d’intervalle post-néoadjuvant et de la maladie récurrente. La caractérisation phénotypique des lignées organoïdes par coloration par immunofluorescence des principaux marqueurs par rapport au tissu parental démontre de manière convaincante que les caractéristiques du compartiment tumoral épithélial sont préservées dans le modèle organoïde : architecture épithéliale et adhésion marquées par (EpCAM), identité de lignée (PAX8) et mutation ponctuelle TP53 typique caractéristique du HGSOC conduisant à une accumulation dans le noyau (Figure 4).
Certains points méthodologiques importants sont également à prendre en compte pour une prise de décision efficace lors de la biobanque d’organoïdes. Le potentiel de croissance des organoïdes n’est pas seulement déterminé par l’augmentation du diamètre des organoïdes. De plus, les caractéristiques phénotypiques déterminent les potentiels d’expansion tels que la couleur, l’obscurité et l’intégrité des contours. La formation de vacuoles de stress cytoplasmique indique des conditions sous-optimales. Des problèmes initiaux en ce qui concerne la croissance et le potentiel de formation d’organoïdes peuvent survenir en raison de conditions de transport inappropriées et d’un retard de la procession tissulaire. Comme une grande variabilité interindividuelle du potentiel d’expansion est observée dans les lignées tumorales, nous recommandons d’attendre au moins 14 jours avant de prendre une décision finale sur le potentiel de croissance. Si des schémas de croissance similaires sont initialement observés dans différents milieux, plusieurs conditions doivent être étendues. D’après notre expérience, une distinction claire du potentiel de croissance stable à long terme n’est souvent possible qu’après une culture de plusieurs semaines ou mois.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66467/66467fig01.jpg"> Figure 1 : Avantages d’un bref ensemencement en 2D d’isolats primaires pour la génération ultérieure d’organoïdes. (A) Schéma du plan expérimental montrant une stratégie d’ensemencement parallèle bidirectionnel : 2D/3D, et ensemencement direct 3D dans quatre milieux différents. (B) Image des isolats primaires adhérents avant trypsinisation et transfert 3D. (C) Un exemple de gisement primaire où l’ensemencement parallèle a révélé l’avantage évident de la voie 2D/3D car l’expansion organoïde à long terme n’était possible qu’à partir de progéniteurs initialement isolés sur du plastique. L’image en haut à gauche montre une culture 3D 7 jours après l’isolement au passage 0 (appelé P0) avec une formation insuffisante d’organoïdes après le premier passage (appelé P1) sur l’image en bas à gauche. Après un ensemencement 2D sur plastique (voir Figure 1B) suivi d’un transfert dans une culture 3D, une meilleure formation organoïde est déjà apparente à P0, tandis que le potentiel d’expansion à long terme est confirmé au passage 4 (P4). Barre d’échelle = 200 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66467/66467fig01large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66467/66467fig02.jpg"> Figure 2 : Besoin de milieu spécifique au patient. Exemples de quatre lignées expansées stables à long terme différentes, chacune poussant dans un milieu différent. Barre d’échelle = 500 μm. Abréviations : OCM = milieu pour le cancer de l’ovaire ; her = heregulin 1β ; HGSO = cancer de l’ovaire séreux de haut grade. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66467/66467fig02large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66467/66467fig03.jpg"> Figure 3 : Génération d’organoïdes à tous les stades de la maladie. Images de lignes d’expansion stables à long terme, d’un cancer de l’ovaire séreux de haut grade et d’un cancer de l’ovaire séreux de bas grade dans la présentation de la maladie primaire, d’une chirurgie d’intervalle (post-chimiothérapie néoadjuvante) et de tissus cancéreux récurrents. Barre d’échelle = 500 μm. Abréviations : HGSOC = cancer de l’ovaire séreux de haut grade ; LGSOC = cancer de l’ovaire séreux de bas grade ; NACT = chimiothérapie néoadjuvante. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66467/66467fig03large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66467/66467fig04.jpg"> Figure 4 : Correspondance étroite du phénotype des organoïdes et du tissu cancéreux parental. Les images confocales de la coloration par immunofluorescence du tissu cancéreux (A) et de la ligne organoïde appariée (B) montrent une très grande similitude dans le motif de coloration et le niveau d’expression de tous les marqueurs, EpCAM (vert), PAX8 (rouge), TP53 (magenta). Barre d’échelle = 20 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66467/66467fig04large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
Tableau 1 : Composition du milieu et du mélange de digestion utilisés dans ce protocole. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66467/66467_Table%201.xlsx" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour télécharger ce tableau.</a>

Ce protocole offre un cadre systématique pour l’établissement d’organoïdes du cancer de l’ovaire à différents stades de la maladie et relève les défis de la variabilité spécifique à la patiente pour augmenter le rendement et permettre une expansion robuste à long terme pour des applications ultérieures. Il comprend des étapes détaillées pour le traitement des tissus, l’ensemencement, l’ajustement des exigences en matière de milieux et la coloration par immunofluorescence.

Stratégie de mise en banque d’organoïdes du cancer de l’ovaire : Aborder l’hétérogénéité interpatiente entre les sous-types histologiques et les stades de la maladie

While the establishment of an ovarian cancer biobank from patient-derived organoids along with their clinical background information promises advances in ...

La meilleure prise en charge clinique dans la recherche translationnelle de pointe pour les patientes atteintes d’un cancer de l’ovaire avancé est la priorité absolue dans notre institution. Grâce à la biobanque d’organoïdes dérivés de patients, nous avons réalisé des progrès majeurs vers une prise en charge personnalisée. Cela nous permet d’évaluer les caractéristiques spécifiques du patient et d’identifier des biomarqueurs prédictifs.Nous avons fait des progrès significatifs ces dernières années dans l’amélioration de la chirurgie multiviscérale radicale, de la chimiothérapie, de la thérapie anti-angiogénique et aussi du traitement par inhibiteur de PARP chez les patientes atteintes d’un cancer de l’ovaire avancé et avons amélioré les taux de survie même avec cela. Maintenant, la prochaine grande étape serait de mieux prédire quel patient bénéficierait de quel traitement spécifique. Actuellement, les décisions de traitement clinique sont basées sur les caractéristiques histopathologiques générales et sur les informations sur le déficit de recommandation homologue ou testées dans le tissu tumoral inclus en paraffine.Les modèles biologiques qui évaluent les réponses spécifiques à la chimiothérapie et aux traitements ciblés n’ont pas encore été mis en œuvre dans la routine clinique. Nous avons identifié les principales caractéristiques du tissu cancéreux de l’ovaire, en particulier les exigences de culture nécessaires pour maintenir son potentiel de renouvellement in vitro, et nous utilisons ces connaissances pour obtenir une croissance robuste à long terme des lignées d’organoïdes et établir une biobanque à partir d’échantillons à différents stades de la maladie. Notre expérience quotidienne dans la biobanque d’organoïdes du cancer de l’ovaire montre en effet une hétérogénéité remarquable dans la biologie de cette tumeur maligne, qui pourrait ouvrir la voie à une nouvelle classification ou fournir la base de nouvelles solutions thérapeutiques ciblant le potentiel de STEMI.

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Hétérotypique tridimensionnelle<em&gt; In Vitro</em&gt; Modélisation des interactions stroma-épithéliales lors de l&#39;initiation et la progression du cancer des ovaires

Les organoïdes dérivés du patient (AOP) sont un outil puissant dans la recherche translationnelle sur le cancer, reflétant à la fois l’hétérogénéité génétique et phénotypique de la maladie et la réponse aux thérapies anticancéreuses personnalisées. Ici, un protocole consolidé pour générer des AOP pour le cancer primaire de la vessie humaine en préparation de l’évaluation des analyses phénotypiques et des réponses médicamenteuses est détaillé.

Culture des organoïdes du cancer de la vessie comme outils de médecine de précision

Les biobanques sont des ressources cruciales pour la recherche biomédicale et l’unité Biobanque de médecine translationnelle et numérique de l’Institut européen d’oncologie est un modèle dans ce domaine. Nous fournissons ici une description détaillée des procédures opérationnelles normalisées des biobanques pour la gestion de différents types d’échantillons biologiques humains.

Biobanque de médecine translationnelle : Modes opératoires normalisés pour une gestion optimale des échantillons

Les organoïdes dérivés de patients (AOP) sont une culture tridimensionnelle (3D) qui peut imiter l’environnement tumoral in vitro. Dans le cancer séreux de l’ovaire de haut grade, les AOP représentent un modèle pour étudier de nouveaux biomarqueurs et thérapeutiques.

Génération et culture d’organoïdes dérivés de patients atteints d’un cancer de l’ovaire séreux de haut grade

Le présent protocole décrit des méthodes d’évaluation des protéines de réparation des dommages à l’ADN dans les organoïdes du cancer de l’ovaire dérivés de patientes. Vous trouverez ici des méthodes complètes de placage et de coloration, ainsi que des procédures de quantification détaillées et objectives.

Visualisation des protéines de réparation des dommages à l’ADN dans les organoïdes du cancer de l’ovaire dérivés de patients par des tests d’immunofluorescence

Un protocole détaillé est fourni ici pour établir des organoïdes mammaires humains à partir de résections de tumeurs mammaires dérivées de patientes ou de tissu mammaire normal. Le protocole fournit des instructions complètes étape par étape pour la culture, la congélation et la décongélation d’organoïdes mammaires humains dérivés de patientes.

Établissement et culture d’organoïdes mammaires dérivés de patientes

Nous présentons un protocole qui peut être utilisé pour effectuer des tests thérapeutiques de médicaments avec des organoïdes du cancer de l’ovaire dérivés de patientes.

Modèles organoïdes dérivés de patientes atteintes d’un cancer de l’ovaire pour les tests précliniques de médicaments

Les organoïdes tumoraux ont révolutionné la recherche sur le cancer et l’approche de la médecine personnalisée. Ils représentent un modèle de tumeur cliniquement pertinent qui permet aux chercheurs de garder une longueur d’avance sur la tumeur en clinique. Ce protocole établit des organoïdes tumoraux à partir d’échantillons frais de tissus tumoraux pancréatiques et de xénogreffes dérivées de patients d’origine adénocarcinome pancréatique.

Mise en place d’organoïdes tumoraux et de fibroblastes dérivés du cancer du pancréas à partir de tissus frais

Ce protocole décrit une méthode pour faciliter le prélèvement d’échantillons de prostatectomie radicale. L’objectif est de cartographier, caractériser et micro-macro disséquer des échantillons de tissus à partir des échantillons sur la base de critères anatomopathologiques avant de les stocker dans une biobanque.

Amélioration de la fiabilité des biobanques de tumeurs de la prostate grâce à une technique d’échantillonnage et une caractérisation histologique améliorées

Ce protocole décrit l’établissement d’organoïdes tissulaires tridimensionnels (3D) à partir de cellules primaires d’épithélium de surface ovarienne humaine (hOSE). Le protocole comprend l’isolement de l’hOSE à partir d’ovaires fraîchement collectés, l’expansion cellulaire de l’hOSE, les procédures de cryoconservation-décongélation et la dérivation d’organoïdes. L’immunofluorescence, l’analyse quantitative et la démonstration de l’utilité en tant que plate-forme de dépistage sont incluses.

Les organoïdes de l’épithélium de surface de l’ovaire humain comme plate-forme pour étudier la régénération des tissus

Ce protocole détaille le développement de modèles murins de carcinome séreux de l’ovaire séreux de haut grade (HGSOC) in vitro et in vivo. De la dérivation d’organoïdes murins de trompes de Fallope, leur modification génétique pour récapituler la génétique HGSOC humaine, et leur introduction dans la bourse ovarienne de souris syngéniques pour le développement in vivo de tumeurs.

Développement de lignées organoïdes dérivées de souris à partir de cellules épithéliales de trompes de Fallope pour la modélisation du carcinome de l’ovaire séreux de haut grade

Apprenez à établir des organoïdes de cancer de l'ovaire à partir de tissus patients pour la recherche translationnelle. Cette méthode permet d'étudier l'hétérogénéité interpatiente et d'identifier des biomarqueurs prédictifs.

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