Name: Quantification de la densité microvasculaire pulmonaire chez la souris à travers les lobules (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-03T12:40:00.000+00:00
Duration: 10 min
Description: Apprenez à quantifier la densité microvasculaire pulmonaire chez la souris en utilisant le marquage isolectin B4 et l'analyse ImageJ. Cette méthode permet d'étudier les variations anatomiques et liées à l'âge des lobules pulmonaires.

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<meta charset="utf8"></head><body>Évaluation de la microvascularisation pulmonaire avec coloration à l’isolectine B4 chez la souris

<ol><li>Jia, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fgf-2+promotes+angiogenesis+through+a+srsf1%2Fsrsf3%2Fsrpk1-dependent+axis+that+controls+vegfr1+splicing+in+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biol%22%5BJournal%5D)">Fgf-2 promotes angiogenesis through a srsf1/srsf3/srpk1-dependent axis that controls vegfr1 splicing in endothelial cells.</a> BMC Biol. 19 (1), 173(2021).</li>
<li>Schneider, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+aging+lung%3A+Physiology%2C+disease%2C+and+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The aging lung: Physiology, disease, and immunity.</a> Cell. 184 (8), 1990-2019 (2021).</li>
<li>Rafii, S., Butler, J. M., Ding, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiocrine+functions+of+organ-specific+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Angiocrine functions of organ-specific endothelial cells.</a> Nature. 529 (7586), 316-325 (2016).</li>
<li>Lipskaia, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+telomerase+in+p21-positive+cells+counteracts+capillaries+rarefaction+in+aging+mice+lung%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Induction of telomerase in p21-positive cells counteracts capillaries rarefaction in aging mice lung.</a> bioRxiv. , (2022).</li>
<li>Hoshino, M., Takahashi, M., Aoike, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+vascular+endothelial+growth+factor%2C+basic+fibroblast+growth+factor%2C+and+angiogenin+immunoreactivity+in+asthmatic+airways+and+its+relationship+to+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Allergy+Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Expression of vascular endothelial growth factor, basic fibroblast growth factor, and angiogenin immunoreactivity in asthmatic airways and its relationship to angiogenesis.</a> J Allergy Clin Immunol. 107 (2), 295-301 (2001).</li>
<li>Ackermann, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+vascular+endothelialitis%2C+thrombosis%2C+and+angiogenesis+in+covid-19%5BTitle%5D)+AND+%22New+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Pulmonary vascular endothelialitis, thrombosis, and angiogenesis in covid-19.</a> New Engl J Med. 383 (2), 120-128 (2020).</li>
<li>Wertheim, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolating+pulmonary+microvascular+endothelial+cells+ex+vivo%3A+Implications+for+pulmonary+arterial+hypertension%2C+and+a+caution+on+the+use+of+commercial+biomaterials%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Isolating pulmonary microvascular endothelial cells ex vivo: Implications for pulmonary arterial hypertension, and a caution on the use of commercial biomaterials.</a> PLoS One. 14 (2), e0211909(2019).</li>
<li>Thomas, S. M., Bednarek, J., Janssen, W. J., Hume, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Air-inflation+of+murine+lungs+with+vascular+perfusion-fixation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Air-inflation of murine lungs with vascular perfusion-fixation.</a> J Vis Exp. (168), e62215(2021).</li>
<li>Ramasamy, S. K., Kusumbe, A. P., Adams, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+tissue+morphogenesis+by+endothelial+cell-derived+signals%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Regulation of tissue morphogenesis by endothelial cell-derived signals.</a> Trends Cell Biol. 25 (3), 148-157 (2015).</li>
<li>Amersfoort, J., Eelen, G., Carmeliet, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunomodulation+by+endothelial+cells+-+partnering+up+with+the+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunomodulation by endothelial cells - partnering up with the immune system.</a> Nat Rev Immunol. 22 (9), 576-588 (2022).</li>
<li>Niethamer, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+the+role+of+pulmonary+endothelial+cell+heterogeneity+in+the+response+to+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Defining the role of pulmonary endothelial cell heterogeneity in the response to acute lung injury.</a> eLife. 9, e53072(2020).</li>
<li>Corliss, B. A., Mathews, C., Doty, R., Rohde, G., Peirce, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+to+label%2C+image%2C+and+analyze+the+complex+structural+architectures+of+microvascular+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Methods to label, image, and analyze the complex structural architectures of microvascular networks.</a> Microcirculation. 26 (5), e12520(2019).</li>
<li>Phillips, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+evaluating+the+murine+pulmonary+vasculature+using+micro-computed+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">A method for evaluating the murine pulmonary vasculature using micro-computed tomography.</a> J Surg Res. 207, 115-122 (2017).</li>
<li>Chadwick, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vessel+network+extraction+and+analysis+of+mouse+pulmonary+vasculature+via+x-ray+micro-computed+tomographic+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Comput+Biol%22%5BJournal%5D)">Vessel network extraction and analysis of mouse pulmonary vasculature via x-ray micro-computed tomographic imaging.</a> PLoS Comput Biol. 17 (4), e1008930(2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>4 % Paraformaldéhyde</td><td>Biosharp</td><td>BL539A</td><td>Fixateur de tissus</td></tr><tr><td>4',6-diamidino-2-phénylindole</td><td>MCE</td><td>HY-D0814</td><td>Colorants nucléiques</td></tr><tr><td>Alexa-647 Isolectine conjuguée au fluor B4</td><td>Thermo</td><td>I32450</td><td>Microvaisseaux</td></tr><tr><td>de liaison Scelleuse de comprimés anti-fluorescente</td><td>Abcam</td><td>AB104135</td><td>Fixation d’échantillon</td></tr><tr><td>Fluide de réparation d’antigène</td><td>Biosharp</td><td>BL151A</td><td>Réparation des sites antigéniques</td></tr><tr><td>Cassette de biopsie</td><td>ActivFlo</td><td>39LC-500-1</td><td>Fixation et positionnement d’échantillons de tissus</td></tr><tr><td>Sérum bovin Albumine</td><td>Sigma</td><td>B2064-50G</td><td>Solution d’étanchéité</td></tr><tr><td>Plaque froide</td><td>Leica</td><td>HistoCore Arcadia H&nbsp ;</td><td>Congélation d’échantillons</td></tr><tr><td>Four de séchage électrique à température constante</td><td>Taisite</td><td>101-0AB</td><td>Réparation à haute température</td></tr><tr><td>Lame de microtome jetable</td><td>Leica</td><td>14035838383</td><td>Couper des échantillons de tissus pour préparer des sections</td></tr><tr><td>Moules d’enrobage</td><td>Shitai</td><td>26155166627</td><td>Fixation d’échantillons de tissus</td></tr><tr><td>Éthanol</td><td>Kelong</td><td>CAS 64-17-5</td><td>Solution de déshydratation tissulaire</td></tr><tr><td>Paraffine chauffée Station d’enrobage</td><td>Leica</td><td>EG1150</td><td>Enrobage d’échantillons de tissus dans de la paraffine</td></tr><tr><td>Bain-marie HistoCore</td><td>Leica</td><td>HI1220</td><td>Aplatir et fixer des échantillons de tissus</td></tr><tr><td>ImageJ (Fidji)&nbsp ;</td><td>NIH</td><td>1.54f</td><td>Outil quantitatif</td></tr><tr><td>Immunohistochimie Stylos</td><td>Biosharp</td><td>BC004</td><td>Agent bloquant l’eau</td></tr><tr><td>Pince médicale Shanghai</td><td>Medical Equipment</td><td>N/A</td><td>Saisir, manipuler ou déplacer des échantillons de tissus</td></tr><tr><td>Microscope Appareil</td><td>d’imagerie</td><td>Nikon</td><td>Ts2</td></tr><tr><td>Supports de montage</td><td>Jiangyuan</td><td>Insipide</td><td>Fixation et conservation Coupes de tissus</td></tr><tr><td>Cire de paraffine</td><td>SCHLEDEN</td><td>80200-0014</td><td>Fixation de la structure tissulaire</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Beyotime</td><td>C0221A</td><td>Tampon de lavage</td></tr><tr><td>Pentobarbital Sodium</td><td>Beijing Chemical Reagent Company</td><td>Q/H82-F158-2002</td> Microtome rotatif <td>anesthésique</td></tr><tr><td></td><td>Biobase</td><td>Bk-2258</td><td>Préparation de tranches</td></tr><tr><td>Ciseaux stériles</td><td>Shanghai Medical Equipement</td><td>N/A</td><td>Segmentation Échantillons de Tissus</td></tr><tr><td>Scalpel Chirurgical Shanghai</td><td>Equipement Médical</td><td>N/A</td><td>Découpe d’Echantillons de Tissus</td></tr><tr><td>Triton&nbsp ;</td><td>Solarbio</td><td>T8200</td><td>Solution de perméabilisation</td></tr><tr><td>Lame sans lavage</td><td>PLATINUM PRO</td><td>PRO-04</td><td>Échantillons de fixation pour la coloration du</td></tr><tr><td>xylène</td><td>SUM</td><td>XK13-011-00031</td><td>Solution de déparaffinage des tissus</td></tr></tbody></table>

quantification de la densité microvasculaire pulmonaire chez la souris à travers les lobules

Quantifying Pulmonary Microvascular Density in Mice Across Lobules

Pour faire la distinction entre les lésions des bronches principales et les petites branches des voies respiratoires, il est crucial de s’assurer que la structure continue des lésions de ces deux types de voies respiratoires est observée. Cela peut être réalisé en suivant les procédures de coupe et d’enrobage décrites à la figure 1. Étant donné les nombreux lobes pulmonaires chez la souris, qui sont orientés dans différentes directions et possèdent une structure semblable à un maillage, ils ...

Quantification de la densité microvasculaire pulmonaire chez la souris à travers les lobules

The abnormal alternation of pulmonary angiogenesis is related to lung microvascular dysfunction and is deeply linked to vascular wall integrity, blood ...

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Un protocole spécifique et rapide à la fois étudier la fonction cardiaque droite, une inflammation des poumons, et la réponse immunitaire est décrit comme un outil d'apprentissage. Vidéo et chiffres décrivent la physiologie et de techniques de microdissection dans une équipe organisée approche qui est adaptable pour être utilisé pour les petites et grandes études taille.

Mesures systolique ventriculaire droite pression en combinaison avec la récolte du poumon et des échantillons de tissus immunitaires chez des souris

La couche de surface endothéliale glycocalyx / endothéliale est idéalement étudiées par microscopie intravitale. Microscopie intravitale est techniquement difficile dans un organe en mouvement, comme le poumon. Nous montrons comment fond clair simultanée et la microscopie à fluorescence peut être utilisée pour estimer endothéliale épaisseur de la couche de surface dans un mouvement...

La mesure in vivo de la surface de la couche de souris pulmonaire endothéliale

La vasoconstriction pulmonaire hypoxique (HPV) est un phénomène physiologique important par lequel à l’hypoxie alvéolaire la perfusion pulmonaire est assortie à la ventilation. Le segment vasculaire principal contribuant au VPH est l’artère intra-acinnaire. Ici, nous décrivons notre protocole pour l’analyse du VPH des vaisseaux pulmonaires murins d’un diamètre de 20 à 100 μm.

Analyse vidéomorphométrique de la vasoconstriction pulmonaire hypoxique des artères intra-pulmonaires à l’aide de tranches pulmonaires coupées de précision murine

La préparation des poumons dans le sang perfusé isolé, il est possible de visualiser des réseaux microvasculaires à la surface du poumon. Ici, nous décrivons une méthode pour quantifier la perméabilité des microvaisseaux simples dans les poumons isolés en utilisant l'imagerie de fluorescence en temps réel.

Quantifier simple microvaisseaux perméabilité d&#39;isolement de poumon de rat Préparation du sang perfusé

Nous décrivons un moyen de mesurer rapidement et simplement la capacité de diffusion pulmonaire chez la souris et montrons qu’elle est suffisamment sensible aux changements de phénotype dans plusieurs pathologies pulmonaires courantes.  Cette métrique apporte donc une pertinence translationnelle directe aux modèles murins, puisque la capacité de diffusion est également facilement mesurable chez l’homme.

Phénotypage Souris fonction pulmonaire In Vivo Avec le Capacité diffusion pulmonaire

Nous présentons ici un protocole permettant de mesurer simplement et de manière fiable la courbe pression-volume pulmonaire chez la souris, montrant qu’elle est suffisamment sensible pour détecter des modifications phénotypiques du parenchyme dans deux pathologies pulmonaires courantes, la fibrose pulmonaire et l’emphysème. Cette mesure permet de quantifier les changements structurels du poumon avec l’évolution d’une pathologie.

La mesure de la courbe pression-volume dans les poumons de souris

La zone de surface pulmonaire interne (ISA) est un critère critique pour évaluer la morphologie pulmonaire et la physiologie dans les maladies pulmonaires et la régénération alvéolaire induite par les blessures. Nous décrivons ici une méthode standardisée qui peut minimiser le biais de mesure pour ISA dans les modèles de la pneumonectomie pulmonaire et de la souris implantation de la prothèse.

Une méthode standardisée pour mesurer la surface interne du poumon par la pneumonie et la prothèse

L'administration intratrachéale (IT) des agents expérimentaux chez les souris a souvent comme conséquence la livraison asymétrique aux poumons distal.  Dans ce rapport, nous décrivons une approche intrabronchique directe (IB) pour cannuler chaque poumon dans les souris vivantes non-opératoirement.  Cette approche peut être utilisée pour administrer sélectivement des agents à un poumon ou peut être adaptée pour améliorer l'administration d'agents symétriques aux deux poumons.

Administration intrabronchique directe pour améliorer le dépôt sélectif d'agent dans le poumon de souris

Nous présentons une méthode assez simple et sensible pour la quantification précise de la densité de conduit biliaire dans le foie de souris. Cette méthode peut aider à déterminer les effets des modificateurs génétiques et environnementaux et l'efficacité des thérapies potentielles dans les modèles murins des maladies biliaires.

Détermination de la densité de duct biliaire dans le foie de souris

Le but de cette technique est la visualisation ex vivo des réseaux artériels pulmonaires des souris postnatales et adultes précoces par l’inflation pulmonaire et l’injection d’un composé à base de polymère radio-opaque par l’intermédiaire de l’artère pulmonaire. Les applications potentielles pour les tissus moulés sont également discutées.

Moulage vasculaire des poumons de souris postnatales adultes et précoces pour l’imagerie micro-CT

Apprenez à quantifier la densité microvasculaire pulmonaire chez la souris en utilisant le marquage isolectin B4 et l'analyse ImageJ. Cette méthode permet d'étudier les variations anatomiques et liées à l'âge des lobules pulmonaires.

Quantification de la densité microvasculaire pulmonaire chez la souris à travers les lobules

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