MALDI הכנה לדוגמא: שיטת אולטרה שכבה דקה

Summary

וידאו זה מדגים את הכנת שכבת מטריצה ​​/ אנליטי דקים לניתוח פפטידים וחלבונים על ידי מטריקס בסיוע לייזר desorption Ionization המוניים ספקטרומטריית (MALDI-MS).

Abstract

וידאו זה מדגים את הכנת שכבת מטריצה ​​/ אנליטי דקים לניתוח פפטידים וחלבונים על ידי מטריקס בסיוע לייזר desorption Ionization המוניים ספקטרומטריית (MALDI-MS) ^{1, 2.} השיטה דקים שכבת כולל ייצור של שכבת המצע של גבישים מטריקס (אלפא cyano-4-hydroxycinnamic חומצה) על הצלחת המדגם, אשר משמש קרקע זריעת לגיבוש הבאות של תערובת מטריצה ​​/ אנליטי. יתרונות השיטה דקים שכבת פני גישות אחרות בתצהיר מדגם (טיפה מיובשים למשל) הם שהוא מספק (i) סובלנות גדולה יותר זיהומים כמו מלחים דטרגנטים, (ii) רזולוציה טובה יותר, וכן (iii) אחידות מרחבית גבוהה יותר. שיטה זו שימושית במיוחד לקביעת המסה המדויקת של החלבונים. פרוטוקול פותחה בתחילה אופטימיזציה עבור ניתוח של חלבונים בממברנה ומשמש בהצלחה לנתח תעלות יונים, מובילי המטבוליט, ואת הקולטנים, המכיל בין 2 ל 12 תחומים הטרנסממברני ^2. מאז פרסום מקורי, הוא הראה גם להיות שימושי באותה מידה לניתוח חלבונים מסיסים. אכן, יש לנו השתמשתי בה עבור מספר גדול של חלבונים בעל מגוון רחב של תכונות, כולל אלה עם ההמונים מולקולרי גבוה ככל 380 kDa ^3. עכשיו שיטת הבחירה שלנו לצורך ניתוח המסה המולקולרית של כל החלבונים. ההליך המתואר באופן עקבי מייצרת באיכות גבוהה ספקטרה, והוא רגיש, חזק, וקל ליישום.

Protocol

חשוב מאוד ללבוש אבקת ללא כפפות במהלך תקופת ההכנה של שכבת דק.

ניקוי הצלחת מדגם

1. השתמש נירוסטה או ציפוי זהב MALDI המדגם.
2. לשטוף עם MeOH ולנגב בעדינות עם Kimwipe. אל תשפשפו או תגרדו את פני השטח עם Kimwipe, כדי למנוע מגרד את פני השטח.
3. לשטוף עם H ₂ O ולנגב בעדינות עם Kimwipe.
4. לשטוף עם MeOH ולנגב בעדינות עם Kimwipe.

Materials