Method Article

ייצור של מיקרו-רקמות באמצעות מודולים של קולגן ג'ל התאים המכילים

DOI:

10.3791/2177

⸱

December 13th, 2010

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Institute of Biomaterials and Biomedical Engineering / Department of Chemical Engineering and Applied Chemistry, University of Toronto, 2Institute of Biomaterials and Biomedical Engineering, University of Toronto

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

יצירה של מיקרו רקמות באמצעות ג'ל קולגן גלילי, המכונה מודולים, המכילות תאים אשר מוטבעים משטח מצופה בתאי האנדותל.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פרוטוקול זה מתאר את ייצור של סוג של מיקרו הרקמות נקרא מודולים. הגישה מודול מחולל אחיד, רקמות מדרגי vascularized. המודולים יכולים להיות עשויים קולגן כמו גם חומרים gelable או crosslinkable אחרים. הם כ -2 מ"מ אורך ו 0.7 מ"מ קוטר על ייצור אבל לכווץ בגודל עם תאים מוטבע או כאשר המודולים הם מצופים בתאי האנדותל. מודולים בנפרד הם קטנים מספיק שתאי המוטבע בתוך מגבלת דיפוזיה של חמצן וחומרים מזינים אחרים, אבל מודולים יכול להיות ארוזים יחד כדי ליצור רקמות גדול כי הם perfusable. רקמות אלה מודולרי בבנייה כי תאים מסוגים שונים יכול להיות מוטבע או מצופה על מודולים לפני שהם ארוזים יחד כדי ליצור רקמות מורכבות. ישנם שלושה שלבים עיקריים שהופך את המודולים: (1) לנטרל את הקולגן הטבעה תאים זה, (2) gelling קולגן בצינור חיתוך מודולים ו (3) ציפוי מודולים עם לתאי אנדותל.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1) הכנת Tubing

  1. חותכים 2-3 מ 'אורך של צינורות פוליאתילן (0.76 מזהה מ"מ x 1.22 מ"מ OD).
  2. נושא מחט 20 G1 לתוך קצה אחד של הצינור.
  3. בצינור קויל מקום בנרתיק הממירים עצמית חותם (7 1 / 2 "x 13"). שני הקצוות של הצינור צריך להיות ממוקם בסוף unsealed של התיק והדביקה במקום עם הקלטת עיקור גז.
  4. תיק חותם וגז לעקר.

2) נטרול של קולגן

<....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

יש לנו מספר מפוברק שונים מיקרו רקמות באמצעות מודולים מוטבע עם סוגי תאים שונים 1-11. יש לנו מוטבע בהצלחה cardiomyocytes העיקרי, איים, בתאי גזע השומן ותאי סטרומה mesenchymal כמו גם כמה שורות תאים כולל HepG2, NIH 3T3 ו 9 שיבוט תאים בכבד. יש לנו מצופה מודולים עם מספר סוגים של תאים אנדותל כולל אבי העורקים התאים עכברוש אנדותל, אדם וריד הטבור לתאי האנדותל האנושיים לתאי אנדותל כלי הדם. מודולים יש גם הפיק בתערובת של קולגן פולימר poloxamine או משחררי תרופה המכילה microspheres (אי.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
אין ניגודי אינטרסים הכריז.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
המימון ניתן על ידי המכון הלאומי לבריאות (EB 001,013), מדעי הטבע וההנדסה מועצת המחקר של קנדה קנדה המכונים לחקר בריאות. אנו מודים לד"ר AP מקגיגן עבור המומחיות שלה לסייע בפיתוח של מודולים.....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
צינורות תוך-רפואיים PE60BD Biosciences427416ניתן להשתמש בקוטר שונה של צינורות כדי לשנות את קוטר המודולים
תמיסת מלח חוצצת פוספט (PBS)GIBCO, מאת Life Technologies20012-027
Trypsin-EDTAGIBCO, מאת Life Technologies25200-072
קולגן מחומצת Purcol, 3 מ"ג/מ"לCedarlane Labs5005-B
נתרן ביקרבונטSigma-AldrichS5761
מחט 20GBD Biosciences305175קוטר המחט צריך להיות דומה לקוטר הצינור
מזרק 3 מ"לBD Biosciences309585
צינור 15 מ"לBD Biosciences352096
צינור 50 מ"לBD Biosciences352070
נרתיק איטום עצמי של ממירים 7 1/2” x 13”Cardinal Health92713
10 מ"ל פיפט סרולוגי BDBiosciences357504
10 מ"ל פיפט סרולוגיBD Biosciences357551
5 מ"ל פיפט סרולוגיBD Biosciences357543

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chamberlain, M. D., Gupta, R., Sefton, M. V. Chimeric vessel tissue engineering driven by endothelialized modules. , (2010).
  2. Corstorphine, L. E., Sefton, M. V. Effectiveness factor and diffusion limitations in collagen gel modules containing HepG2 cells. J Tissue Eng Regen Me....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Collagen Gel ModulesMicro tissue FabricationEndothelial Cell CoatingPolyethylene Tubing CuttingCollagen NeutralizationTissue Engineering ModulesVascularized MicrotissuesModular Tissue ConstructionCell Embedding ProtocolMicrofluidic Chamber Assays

Related Articles